熔解溫度試題及答案詳解

熔解溫度試題及答案詳解

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.DNA的熔解溫度（Tm）是指？A.A260達到最大值時的溫度B.A260達到最大值50%時的溫度C.A280達到最大值時的溫度D.A280達到最大值50%時的溫度答案：B2.以下哪種因素會使Tm升高？A.增加DNA溶液的鹽濃度B.降低DNA溶液的鹽濃度C.減少DNA長度D.提高溶液pH答案：A3.Tm與DNA中哪種堿基對含量有關(guān)？A.A-TB.G-CC.A-CD.G-T答案：B4.一段DNA序列中，G-C含量為60%，其Tm相對？A.較低B.較高C.不變D.不確定答案：B5.測定Tm常用的方法是檢測？A.溶液的黏度變化B.溶液的顏色變化C.核酸的紫外吸收變化D.核酸的熒光強度變化答案：C6.雙鏈DNA變性成為單鏈的過程中，以下正確的是？A.Tm是開始變性的溫度B.Tm是完全變性的溫度C.Tm是變性50%時的溫度D.Tm與變性程度無關(guān)答案：C7.若一條DNA鏈長度增加，其Tm會？A.降低B.升高C.不變D.先降后升答案：B8.以下哪種物質(zhì)會降低Tm？A.尿素B.氯化鈉C.氯化鉀D.硫酸鎂答案：A9.通常Tm的計算公式與什么有關(guān)？A.A-T含量B.G-C含量C.核酸長度D.以上都有關(guān)答案：D10.不同來源DNA的Tm不同，主要原因是？A.磷酸基團不同B.堿基組成不同C.戊糖不同D.連接鍵不同答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.影響DNA熔解溫度（Tm）的因素有？A.DNA的堿基組成B.DNA的長度C.溶液的離子強度D.溶液的pH答案：ABCD2.以下關(guān)于Tm說法正確的是？A.Tm是DNA熱變性的特征溫度B.Tm與DNA分子中的氫鍵有關(guān)C.Tm是雙鏈解開一半時的溫度D.Tm受核酸純度影響答案：ABCD3.使Tm升高的因素包括？A.增加G-C含量B.提高溶液鹽濃度C.延長DNA鏈長度D.加入某些金屬離子答案：ABCD4.降低Tm的因素有？A.加入甲酰胺B.降低鹽濃度C.核酸發(fā)生降解D.提高溫度答案：ABC5.檢測Tm的方法有？A.紫外分光光度法B.熒光定量法C.凝膠電泳法D.核磁共振法答案：AB6.Tm與下列哪些因素呈正相關(guān)？A.G-C含量百分比B.DNA分子長度C.溶液中陽離子濃度D.核酸的復(fù)雜性答案：ABC7.以下關(guān)于Tm在實際應(yīng)用中的說法正確的是？A.可用于核酸純度鑒定B.可用于判斷核酸分子的完整性C.可用于設(shè)計PCR引物D.可用于核酸序列分析答案：ABC8.導(dǎo)致Tm測定不準確的因素有？A.核酸樣品有雜質(zhì)B.儀器誤差C.實驗操作不規(guī)范D.環(huán)境溫度波動答案：ABCD9.若想提高Tm可以采取的措施有？A.調(diào)整溶液pH到合適范圍B.增加DNA溶液濃度C.選擇合適的緩沖液體系D.去除核酸中的變性劑答案：ACD10.Tm與以下哪些分子生物學(xué)過程有關(guān)？A.DNA復(fù)制B.轉(zhuǎn)錄C.翻譯D.核酸雜交答案：ABD三、判斷題（每題2分，共10題）1.DNA的熔解溫度（Tm）是固定不變的。（×）2.G-C含量越高，DNA的Tm越高。（√）3.增加DNA溶液的鹽濃度會降低Tm。（×）4.Tm是DNA完全變性時的溫度。（×）5.核酸長度越長，其Tm越低。（×）6.測定Tm只能用紫外分光光度法。（×）7.溶液pH對Tm沒有影響。（×）8.不同來源的DNA，即使G-C含量相同，Tm也可能不同。（√）9.Tm可以反映DNA分子的穩(wěn)定性。（√）10.去除溶液中的尿素會使Tm降低。（×）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述影響Tm的主要因素答案：主要因素有堿基組成，G-C含量越高Tm越高；核酸長度，長度越長Tm越高；溶液離子強度，離子強度增加Tm升高；還有溶液pH、變性劑等，pH不當(dāng)、有變性劑會降低Tm。2.說明Tm在核酸研究中的意義答案：可鑒定核酸純度，純度高Tm范圍窄；判斷核酸完整性，降解會使Tm變化；設(shè)計PCR引物時需參考Tm，保證引物退火溫度合適，有助于核酸相關(guān)實驗順利進行。3.簡述測定Tm的紫外分光光度法原理答案：DNA有紫外吸收特性，雙鏈變單鏈時，堿基暴露，紫外吸收值（A260）升高。隨溫度上升監(jiān)測A260變化，A260達到最大值50%時對應(yīng)的溫度就是Tm。4.舉例說明Tm與核酸雜交的關(guān)系答案：核酸雜交時，雜交溫度通常比Tm低25℃左右。比如特定核酸雜交體系，已知其Tm為80℃，適宜雜交溫度約55℃，這樣保證雜交特異性和效率。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在基因工程實驗中，精確測定Tm的重要性答案：在基因工程如PCR中，精確測定Tm能確定合適退火溫度，保證引物與模板準確結(jié)合，提高擴增特異性和效率。在核酸分子雜交中，利于選擇恰當(dāng)雜交溫度，使目的核酸準確雜交，避免非特異性結(jié)合，保證實驗結(jié)果可靠性。2.分析當(dāng)Tm測定結(jié)果異常時，可能的原因及解決方法答案：原因可能是核酸樣品有雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)等；儀器誤差，如分光光度計未校準；操作不規(guī)范，如加熱速度過快。解決方法為純化核酸樣品；校準儀器；規(guī)范操作，嚴格按流程控制加熱速度、溫度等條件。3.探討Tm與生物進化之間可能存在的聯(lián)系答案：不同生物DNA的Tm不同，G-C含量影響Tm。進化過程中，適應(yīng)不同環(huán)境的生物，其DNA的G-C含量會有差異，導(dǎo)致Tm不同。比如嗜熱生物G-C含量高、Tm高，利于在高溫環(huán)境穩(wěn)定遺傳信息，這體現(xiàn)Tm與生物進化對環(huán)境的適應(yīng)性有關(guān)。4.闡述如何根據(jù)