藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)

1、.,主講老師 胡建平,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí),.,第一章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 第二章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器及技術(shù) 第三章 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)學(xué),該次課的內(nèi)容安排,.,第一章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知,一 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要性 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)是藥理學(xué)教學(xué)的一個(gè)重要的部分。 用來(lái)驗(yàn)證一些藥理學(xué)理論部分內(nèi)容。 二 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的目的 選做一些經(jīng)典、實(shí)用的實(shí)驗(yàn)，使得學(xué)生熟悉藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作方法和技能。 了解新藥評(píng)價(jià)和開(kāi)發(fā)臨床前的一些藥效學(xué)和毒理學(xué)的一些基本技能。 培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考、操作、分析、解決問(wèn)題的能力。,.,第一章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知,三 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課前、課中、課后的要求 （一）實(shí)驗(yàn)前 仔細(xì)閱讀實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，了解實(shí)驗(yàn)的目的

2、、要求、步驟和操作程序。 結(jié)合實(shí)驗(yàn)內(nèi)容復(fù)習(xí)有關(guān)理論，做到充分理解。 預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)得到的結(jié)果。 寫(xiě)出預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（自己隨意寫(xiě)，對(duì)自己做實(shí)驗(yàn)有用就好）,.,（二）實(shí)驗(yàn)時(shí) 實(shí)驗(yàn)器材安放整齊、清潔有序。 按照實(shí)驗(yàn)步驟，以嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度循序操作，不得進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)，注意保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果），愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)器材和節(jié)約藥品。 仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的現(xiàn)象，隨時(shí)紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，聯(lián)系理論進(jìn)行思考(發(fā)生什么？為何這樣？生理意義?)。 （三）實(shí)驗(yàn)后 把實(shí)驗(yàn)用具整理就緒。如有損壞短缺，應(yīng)向教師報(bào)告。 整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，認(rèn)真書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，按時(shí)上交評(píng)閱。,.,四 實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě),藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 姓名： 班級(jí)： 組別：

3、日期： 實(shí)驗(yàn)題目： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?實(shí)驗(yàn)對(duì)象： 實(shí)驗(yàn)步驟： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 分析與討論： 結(jié)論：,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述文字上力求從簡(jiǎn)，最好用圖表表示。 填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要堅(jiān)持真實(shí)性和科學(xué)性。 在分析討論中，可以結(jié)合理論部分進(jìn)行分析，或?qū)?shí)驗(yàn)得到的規(guī)律性的東西進(jìn)行分析討論，提出見(jiàn)解，避免抄書(shū)。 結(jié)論部分的東西是本次實(shí)驗(yàn)獲得的最為基本的規(guī)律性內(nèi)容。文字務(wù)必簡(jiǎn)明扼要，不可憑空想象加入一些本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有證實(shí)的內(nèi)容。,.,五 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 1 遵守學(xué)習(xí)紀(jì)律，準(zhǔn)時(shí)上下課。實(shí)驗(yàn)期間不得借故外出或早退，特 殊情況下，需要請(qǐng)假。 2 必須認(rèn)真地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作、觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)期間要保持安 靜， 不得進(jìn)行任何與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)。 3

4、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄，必須經(jīng)過(guò)教師審核，否則不能結(jié)束實(shí)驗(yàn)。 4 各組的儀器、用品，由本組使用，不得與別組調(diào)換，以免混亂。 如遇到儀器損壞或丟失，應(yīng)報(bào)請(qǐng)教師處理。 5 愛(ài)護(hù)公共財(cái)物，注意節(jié)約各種實(shí)驗(yàn)用品。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按組發(fā)給，如 需要補(bǔ)充使用，須經(jīng)教師同意之后才能補(bǔ)領(lǐng)。 6 保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊，隨時(shí)清除污物。實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器 材、用具收拾妥當(dāng)；將手術(shù)器械擦洗干凈，清點(diǎn)數(shù)量，放回原處。 經(jīng)教師檢查之后才能離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。,.,一 分光光度計(jì) 二 離心作用 三 動(dòng)物的捉持 四 動(dòng)物的給藥方法 五 動(dòng)物的取血方法 六 動(dòng)物的處死方法,第二章 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器及技術(shù),.,一 分光光度計(jì), 儀器介紹 分光光

5、度計(jì)有幾個(gè)部件：其中包括光源、提供選擇波長(zhǎng)的的單色器、可變狹縫、樣品架、光探測(cè)器和儀表。不同的光譜區(qū)要使用不同的光源。在可見(jiàn)區(qū)（400nm700nm）和紫外區(qū)（200nm400nm）分別使用鎢燈和氘燈。在這些區(qū)域的光波長(zhǎng)是由分光光度計(jì)中的單色器選擇的，單色器是由棱鏡或衍射光柵構(gòu)成的，在可見(jiàn)區(qū)和紫外區(qū)給出窄帶波長(zhǎng)的光，光由可控制光強(qiáng)的可調(diào)狹縫進(jìn)入樣品，然后由光電管探測(cè)透過(guò)的光，并被電流計(jì)所測(cè)量。下圖為分光光度計(jì)的部件原理圖：, 紫外和可見(jiàn)光譜的應(yīng)用 紫外和可見(jiàn)光譜最為主要的應(yīng)用是：測(cè)量溶液中物質(zhì)的濃度。其基本原理是：光吸收值和吸光物質(zhì)的濃度成正比。,.,二 離心作用 離心作用是裝有固體顆粒懸浮液

6、的容器迅速旋轉(zhuǎn)的過(guò)程，顯著增加的重力場(chǎng)使顆粒沉降，離心力或引力與角速度的平方（2）乘以距轉(zhuǎn)動(dòng)中心的徑向距離r（cm）成正比，角速度以每分鐘的轉(zhuǎn)速（rpm）來(lái)表示，離心力由下式給出：F=(1.1210-5) (2) (r) 從上式可以看出：對(duì)于徑向距離為7cm的轉(zhuǎn)子，若角速度為10000 rpm，則離心力為8000g。成功的離心作用取決于兩個(gè)因素（1）離心時(shí)間和（2）發(fā)揮的g值。如下表： 表1 在離心場(chǎng)中沉降生物顆粒所需的重力和時(shí)間的比較,所以使用不同的g力，不同的離心t的差速離心法可用來(lái)分離細(xì)胞組分。,.,三 動(dòng)物的提持（限小鼠和家兔）,1 小鼠的提持（2種方法） 雙手提斥法 右手提起鼠尾，放

7、在鼠籠（或其他粗糙面）上，向后輕拉其尾，小鼠即固定于鼠籠上，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頭頸部皮膚，并以左手小指、無(wú)名指壓其尾部于手掌尺側(cè)。 單手提持法 只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺側(cè)和小指夾住尾根部，然后用左手拇指和食指捏住頭頸部皮膚 2 家兔的提持 一只手抓住兔頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿勢(shì)。切不可用手握持雙耳提起兔子。,.,1 灌胃方法 2 皮下注射方法 3 肌內(nèi)注射方法 4 腹腔注射方法 5 靜脈注射方法,四 動(dòng)物的給藥方法（限小鼠和家兔）,.,動(dòng)物給藥方式一 - 灌胃方法,小鼠的灌胃方法 左手捉持小鼠，腹部朝向操作者，右手持灌胃管，經(jīng)口角

8、插入口腔，使灌胃管與食管成一直線，將灌胃管沿上腭壁緩慢插入食管2cm3cm，灌胃管的前端即達(dá)膈肌部位，此時(shí)操作者可有抵抗感，如動(dòng)物安靜，呼吸無(wú)異常，即可將藥液注入。操作宜輕柔，防止損傷食管。如遇阻力應(yīng)抽出灌胃管重新插入，若將藥液誤注氣管，動(dòng)物立即死亡。 家兔的灌胃方法 給兔灌胃需兩人合作，一人坐好將兔軀體夾于兩腿之間，左手抓住雙耳，固定其頭部，左手抓住兩前肢，使兔頭稍向后仰；另一人將開(kāi)口器橫放于兔口中，慢慢旋轉(zhuǎn)開(kāi)口器，將兔舌壓住，并固定之。將8號(hào)導(dǎo)尿管經(jīng)開(kāi)口器中央孔，沿上腭壁慢慢插入食管15cm18cm。為避免誤入氣管，可將導(dǎo)尿管的外口端放入清水中，無(wú)氣泡逸出方可注入藥液，再用少量清水沖洗管內(nèi)

9、殘存藥液。灌畢，慢慢拔出導(dǎo)尿管，取出開(kāi)口器。,.,小鼠的皮下注射方法 一般需要兩個(gè)人合作，一人左手捏小鼠頭部皮膚，右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定；另一人左手提起背部皮膚，右手持注射器將針頭刺入皮下，稍稍擺動(dòng)針頭，若容易擺動(dòng)則表明針尖確實(shí)位于皮下，此時(shí)注入藥液。拔針時(shí)，右手捏住針刺部位片刻，以防止藥液逸出。 也可一人操作，將小鼠放在粗糙的平面上，左手拉小鼠尾巴，趁小鼠向前爬動(dòng)時(shí)，右手持注射器迅速將針頭刺入小鼠背部皮下，推注藥液。 家兔的皮下注射方法 通常選擇背頸部皮下注射。操作者左手拇指、食指和中指提起背頸部皮膚，使其折成三角體，右手持注射器自皺折下方刺入皮下，松開(kāi)皮膚注入藥液。,動(dòng)物給藥方式二 -

10、 皮下注射方法,.,小鼠的肌內(nèi)注射方法 需兩人合作，一人左手捏小鼠頭部皮膚，右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定；另一人左手固定注射側(cè)后肢，右手持注射器，將針頭刺入外側(cè)股部肌內(nèi)。小鼠肌肉較少，肌內(nèi)注射不常用。 家兔的肌內(nèi)注射方法 注射部位為臀部和股部肌肉。,動(dòng)物給藥方式三 - 肌內(nèi)注射方法,.,小鼠的腹腔注射方法 左手捉持小鼠，將腹部朝上，頭部下傾，右手持注射器在下腹左側(cè)或右側(cè)（避開(kāi)膀胱）向頭端穿刺，針頭與皮膚呈30,刺入腹腔（有落空感）注入藥液。注意針頭不要刺入太深，太靠上，以免刺破肝臟。 家兔的腹腔注射方法 方法幾乎與小鼠相同 。,動(dòng)物給藥方式四 - 腹腔注射方法,.,小鼠的靜脈注射（多用尾靜脈注射

11、） 將小鼠固定在一鐵絲籠或特制筒內(nèi)，使小鼠尾露在外面。用75%乙醇溶液涂擦尾巴或在45左右溫水中侵泡30s，使尾靜脈充血。注射時(shí)，左手拇指和食指捏持鼠尾，右手持注射器，選擇尾巴兩側(cè)靜脈，使針頭與鼠尾成3 5（幾乎平行），進(jìn)行靜脈穿刺。如推注藥液無(wú)阻力，局部皮膚發(fā)白則表明針頭未刺入血管，退出針頭重新穿刺，注意靜脈穿刺時(shí)應(yīng)從遠(yuǎn)端（近尾尖）開(kāi)始，不僅容易穿刺，而且還可向近端多次穿刺。注射完畢，用棉球按壓穿刺口止血。 家兔的靜脈注射（多用耳緣靜脈） 注射部位去毛并用酒精棉球涂擦。用左手拇指和中指捏住兔耳尖部，以食指墊于耳下，右手持注射器，從靜脈遠(yuǎn)端將針頭刺入血管，將藥液推入。如推注時(shí)有阻力，局部出現(xiàn)腫

12、脹，表明針頭不在血管內(nèi)，應(yīng)立即拔針重新穿刺。注畢要用棉球壓迫針眼幾分鐘止血。,動(dòng)物給藥方式五 - 靜脈注射方法,.,小鼠剪尾采血 將小鼠固定在鐵絲籠或特別筒內(nèi)，使鼠尾露在外面。剪掉鼠尾1mm2mm，用拇指和食指由尾根向尾尖按捏，血液即從尾尖流出，小鼠每次可采血0.1ml。注意：只剪去尾尖，如剪去過(guò)多組織，反而流血少。下次采血時(shí)，只需將尾尖血痂jia剪掉就可以了。 家兔心臟采血 將家兔被部固定，剪去左側(cè)胸部相當(dāng)于心臟部位的被毛，用碘酒和酒精消毒皮膚，選擇心臟跳動(dòng)最明顯處穿刺。一般由胸骨左緣外3mm處刺入兔的第三肋間隙。穿刺時(shí)，最好用左手觸診心臟，以作配合。當(dāng)針頭接近心臟時(shí)，就會(huì)感到心臟的跳動(dòng)。這

13、是需將針頭再向里穿刺，便可進(jìn)入心室。由于心臟的搏動(dòng)，血液會(huì)自然進(jìn)入注射器。如認(rèn)為針頭已經(jīng)進(jìn)入心臟，但抽不出血液，可將針頭稍微退出或進(jìn)入一點(diǎn)。 一般來(lái)講，心臟采血經(jīng)67天后，可以重復(fù)進(jìn)行。采血量大約20ml30ml。,五 動(dòng)物的取血方法（限小鼠和家兔）,.,家兔耳緣靜脈采血 拔去耳緣被毛，用燈泡照射加熱耳朵或75%酒精涂擦局部，使靜脈擴(kuò)張，再用石蠟油涂擦耳緣，防止血液凝固。耳受熱之后用小血管夾夾緊耳根部，用粗號(hào)針頭逆靜脈回流方向刺破靜脈或用刀片切開(kāi)靜脈，血液可自動(dòng)流出，一般可采血2ml3ml。取血后棉球壓迫止血。 家兔耳中央動(dòng)脈采血 將兔子置于兔固定箱內(nèi)，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳

14、中央有一條縱行、較粗、顏色鮮紅的中央動(dòng)脈。左手固定兔耳，右手持注射器（一般用6號(hào)針筒，不可太細(xì)），在中央動(dòng)脈的末端，沿動(dòng)脈平行地向心方向刺入動(dòng)脈，慢慢回抽針筒，動(dòng)脈血立即進(jìn)入針筒，一次可取血15ml。因耳中央動(dòng)脈容易發(fā)生痙攣收縮（容易導(dǎo)致采血無(wú)法進(jìn)行），因此必須要先讓兔耳充分充血，并在痙攣前迅速完成抽血，抽血后棉球壓迫止血。,五 動(dòng)物的取血方法（限小鼠和家兔）,.,六 動(dòng)物的處死方法（限小鼠和家兔）,小鼠的處死（常采用頸椎脫臼法） 用左手拇指和食指將其頭部緊緊按在硬的物體上，右手捏住鼠尾，用力向后上方牽拉，使頸椎脫位，小鼠可瞬間死亡。 家兔的處死（常采用空氣栓注法） 用50ml100ml的注射

15、器，往家兔的耳緣靜脈內(nèi)注射20ml40ml的空氣量，使之發(fā)生栓塞而死亡。,.,一 均數(shù) 二 標(biāo)準(zhǔn)差（SD） 三 標(biāo)準(zhǔn)誤和t檢驗(yàn),第三章 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)學(xué),.,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)的意義,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)一般都需要經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以便通過(guò)分析樣本，推斷總體，透過(guò)偶然，找出規(guī)律。 統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)資料的系統(tǒng)知識(shí)比較豐富，這里僅僅對(duì)處理藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的需要，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、標(biāo)準(zhǔn)誤以及計(jì)量資料的顯著性測(cè)定做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹，以供學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作出正確的判斷。,.,一 均數(shù)（）,均數(shù)也就是算術(shù)平均值，統(tǒng)計(jì)學(xué)上用 表示。均數(shù)是分析計(jì)量數(shù)據(jù)最基本的指標(biāo)。它表示一套變量值的集中趨勢(shì)（平均水平），不僅可以

16、給人一個(gè)簡(jiǎn)明概括的印象，并可用來(lái)作事物間的比較。均數(shù)的計(jì)算公式為： 其中 為總和；x1、x2、xn等為各次的測(cè)定值（變量）；n為變量的個(gè)數(shù)，即樣本容量；而 為各變量的總和。,.,二 標(biāo)準(zhǔn)差（SD）,均數(shù)只是集中趨勢(shì)的指標(biāo)，不能反映一組數(shù)據(jù)與均數(shù)的離散程度。特別是數(shù)據(jù)不符常態(tài)分布時(shí)，更是如此。而標(biāo)準(zhǔn)差是最為常用的、最能完整地反映全套變量值離散程度的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，一般用SD表示。而計(jì)算SD的公式為：,式子中x為每一個(gè)變量值；為均數(shù)；n為變量的個(gè)數(shù)；,.,例1 根據(jù)某年級(jí)12名女學(xué)生收縮壓的數(shù)據(jù)（見(jiàn)下表），求其均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差？,表一 12名女學(xué)生收縮壓數(shù)據(jù),表一 12名女學(xué)生收縮壓數(shù)據(jù),表一 12名女學(xué)生

17、收縮壓數(shù)據(jù),.,解：將有關(guān)數(shù)據(jù)帶入公式（1）求出均數(shù) 代入公式（2）求出標(biāo)準(zhǔn)差 所以可以得到： 從上面的例子也可以看出：標(biāo)準(zhǔn)差反映了各變量離開(kāi)均數(shù)的分布情況。在均數(shù)與單位相同的情況下，標(biāo)準(zhǔn)差越大，則表示各變量離開(kāi)均數(shù)越遠(yuǎn)，諸變量離散程度也越高；反之，標(biāo)準(zhǔn)差越小，則表示離均數(shù)越近，離散程度越低，偏差小，精密度高。,.,三 標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）和t檢驗(yàn),標(biāo)準(zhǔn)誤和標(biāo)準(zhǔn)差不同，它表示的是多次測(cè)定的均數(shù)與總體均數(shù)的離散程度，也就是總體中各樣本的均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差。計(jì)算公式如下： 其中：SE為標(biāo)準(zhǔn)誤，SD為標(biāo)準(zhǔn)差，n為樣本數(shù)。值得注意是：SE的目的主要是為了用于兩個(gè)均數(shù)差別的顯著性檢驗(yàn)之中。,.,t檢驗(yàn)的定義：在抽樣研究中，經(jīng)常遇到兩個(gè)樣本均數(shù)的有所差別。對(duì)于兩個(gè)均數(shù)的差別不可以僅看表面數(shù)值的不同而匆忙推論出其本質(zhì)的差異。必須考慮到引起這種差別有兩種可能性：（1）差別僅僅又抽樣誤差所引起，它們之間沒(méi)有本質(zhì)上的誤差；（2）差別已經(jīng)超出了抽樣誤差所引起的范圍，它們之間有本質(zhì)差異。 除t值之外，在得到組間差異的概率之前還需要知道自由度，上述例子的自由度為： 通過(guò)t值和自由度f(wàn)值可以從t-分布表上找到組間差異的概率P（兩者差別不大且接受抽樣誤差的概率）。其中t值的判斷標(biāo)準(zhǔn)（表二）和