蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)2.ppt

1、(5)鑒定、一純度鑒定、基本手段：陽離子電泳分析、超速離心法：一帶。 n末端測定： n子蛋白的n末端aa有n個。 選擇手段：沉降分析、溶解度分析、結(jié)晶分析(可結(jié)晶化一般是單純的，有活性)和定溶解度法分析、化學(xué)組成法的最低分子量SDS-PAGE法凝膠過濾法滲透壓法擴(kuò)散系數(shù)法和沉降平衡方法、兩蛋白質(zhì)的分子量測定， 例如，肌球蛋白由含有0.335%鐵元素的Fe分子量55.8最小m10016700、Fe分子量、Fe(% )、55.8、0.335%、1 )分子組成測定最低分子量，血色素含有0.335%的鐵元素，F(xiàn)e分子量55.8血色素的實際分子量為66800(16700 4 )、2 )， 在SDS-聚丙

2、烯酰胺凝膠陽離子電泳(SDS-PAGE )中，帶電物質(zhì)在電場中移動的速度會受到怎樣的影響？ 加SDS和巰基乙醇嗎？ 用SDS (十二烷基磺酸鈉) sodium dodecyl sulfate、污垢清除劑的十二烷基磺酸鈉(SDS )和還原劑(通常為巰基乙醇)樣品處理液來處理蛋白質(zhì)樣品(通常煮沸3.5分鐘)，加熱和SDS時，能夠使蛋白質(zhì)變性，多亞單位的蛋白質(zhì)也能解離成單亞單位在云同步中還原劑可以切斷蛋白質(zhì)中的任何二硫鍵(使二硫鍵還原)。 這樣處理過的樣本中的所有肽鏈都處于沒有二硫鍵的、分離狀態(tài)。 SDS是陰離子性的污垢清除劑，具有很多負(fù)電荷。 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，使蛋白質(zhì)分子帶有一盞茶負(fù)電荷，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過

3、了蛋白質(zhì)分子本來的電荷，蛋白質(zhì)分子本來的電荷變得不重要。 SDS是一種改性劑，與蛋白質(zhì)結(jié)合，改變蛋白質(zhì)單體分子的形態(tài)，變成長橢圓棒狀。 電場移動的速度完全取決于蛋白質(zhì)分子的大小。 注意： SDSPAGE將蛋白質(zhì)分解為亞單位，測定的分子量為亞單位的分子量。 (3)沉降分析法、沉降速度：離心時，蛋白質(zhì)分子在單位時間內(nèi)沉降的距離。 沉降常數(shù)(沉降系數(shù)):沉降界面以定速移動時的單位離心場中的沉降速度。 s :沉降常數(shù)v :沉降速度(cm/sec) w :離心分離機(jī)旋轉(zhuǎn)的角速度(弧度/sec) x :從蛋白質(zhì)界面的中點到旋轉(zhuǎn)中心的距離，用cm進(jìn)行計算。 沉降的速度與粒子的重量、密度、形狀有關(guān)。 根據(jù)離心

4、后沉降的速度，相互分離形成區(qū)域樂隊。 進(jìn)行光學(xué)定位、針刺、冰凍切片抽樣分析。 蔗糖密度梯度多蔗糖密度梯度氯元素化銫密度剃度離心，沉降系數(shù)：以10-13秒為一個單位，稱為斯德伯格單位或沉降系數(shù)單位，用s (大寫)表示。 瑞典蛋白質(zhì)化學(xué)家T.Svedberg 1S=10-13，蛋白質(zhì)分子量(m )與沉降系數(shù)(s )的關(guān)系，3等電點的測定，4生物活性的測定，每種蛋白質(zhì)有不同的生物功能，即不同的生物活性的測定方法。 (6)含量測定總蛋白含量分析：凱文氮氣法、福林-酚法(Lowry法)、縮二脲法、商業(yè)藍(lán)法、紫外吸收法。 特定蛋白成分含量分析：酶催化劑、荷爾蒙激素等：酶活力和荷爾蒙激素活性表達(dá)其他蛋白：抗

5、原抗體反應(yīng)(western blot )是雙向陽離子電泳分離蛋白的技術(shù)原理及其蛋白質(zhì)組研究研究中的重要意義西北大學(xué)05年，雙向電泳(two-dimensional electrophoresis ) 雙向陽離子電泳后凝膠染色，蛋白呈二維分布圖，水平方向反映蛋白在pI上的差異，垂直方向反映蛋白在分子量上的差異。 雙向陽離子電泳可以分為分子量相同但等電點不同的蛋白質(zhì)和等電點相同但分子量不同的蛋白質(zhì)。 某種溶液中含有三氯甲烷、氯甲烷和砷化鈉、- COOH化學(xué)基的pKa為3.8； -NH3化學(xué)基的pKa為8.5。在哪個ph(2.0、6.0或13.0 )下，用陽離子電泳分離這些個3種多肽最有效？ 下一種

6、試劑和酶催化劑常用于蛋白質(zhì)化學(xué)的研究： CNBr； 異硫氰酸酯； 丹黃酰氯； 尿素； 6摩爾/立方厘米； -巰基乙醇； 水合茚三酮； 過甲酸； 胰蛋白酶； 胰蛋白酶。 這之中哪個是最適合完成下面的塔斯克的？ (a )測量肽的氨基酸排列順序。 (b )鑒定肽的氨基末端殘馀化學(xué)基。 (c )不含二硫鍵的蛋白質(zhì)的可逆變性。 存在二硫鍵時，需要什么樣的試劑(d )在芳香族氨基酸殘馀化學(xué)基的羧基化學(xué)基側(cè)水解作用肽結(jié)合。 (e )在甲基勞氏紫殘馀化學(xué)基的羧基化學(xué)基側(cè)水解作用肽結(jié)合。 (f )在賴氨酸和精氨酸殘化學(xué)基側(cè)水解作用肽結(jié)合。 合成的多晶肽多聚谷氨酸(Glu)n )在pH3.0以下時在水溶液中形成螺

7、旋，在pH5.0以上時呈伸長狀態(tài)。 a )試著說明一下這種現(xiàn)象吧。 b )聚賴氨酸(Lys )在哪個pH條件下形成螺旋？ a)Glu側(cè)鏈的pKa約為4.1，pH遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于4.1 (約3左右)時，大部分的多聚谷氨酸側(cè)鏈變?yōu)闆]有電荷的狀態(tài)，多肽鏈可以形成螺旋。 pH在5以上時，幾乎所有的側(cè)鏈都帶有負(fù)電荷，為了阻止鄰接的電荷間的靜電排斥力形成螺旋，均聚物呈伸長的排列。 (b)Lys側(cè)鏈的pK為10.5，pH遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過10.5時，聚賴氨酸的多數(shù)側(cè)鏈變?yōu)闆]有電荷的狀態(tài)，該多肽可能形成一種螺旋構(gòu)象，低pH下，多數(shù)帶有正電荷的分子可能呈現(xiàn)伸展構(gòu)象。 根據(jù)氨基酸的量化分析，牛血清蛋白含有0.58 (色氨酸的分子量

8、為204 )的色氨酸。 (a )嘗試估算牛血清蛋白的最小分子量(假設(shè)每個蛋白質(zhì)分子只有1個色氨酸殘留化學(xué)基)。 (b )凝膠過濾測定的牛血清蛋白的分子量為7.0， 在000，詢問血清白蛋白分子中含有多少色氨酸殘馀化學(xué)基的1，在低聚蛋白質(zhì)中，將亞單位間的立體構(gòu)型、相互作用及接觸部位間的空間結(jié)構(gòu)，形成所謂的() a、三級結(jié)構(gòu)b、締合現(xiàn)象c、四次結(jié)構(gòu)d、結(jié)構(gòu)變化現(xiàn)象2、穩(wěn)定的肽鏈空間結(jié)構(gòu)的非常重要的方面， 肽鍵中的四個原子和與其鄰接的兩個-碳原子在() a上，圍繞的狀態(tài)b、相對自由旋轉(zhuǎn)的狀態(tài)c、同一平面d、根據(jù)不同的外界環(huán)境變化的狀態(tài)3、肽鏈中的肽鍵是： () a、順結(jié)構(gòu)b、順和變壓器的共存c、反結(jié)

9、構(gòu)4、 穩(wěn)定維持蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要原因是： () a、靜電力b、氫鍵c、疏水力d、范德瓦爾斯力，5，蛋白質(zhì)變性是由() a、初生結(jié)構(gòu)變化b、空間構(gòu)象破壞c、輔助化學(xué)基脫落d、蛋白質(zhì)水解作用6、必需氨基酸引起的。 在a、植物b、動物c、動物和植物d、人和動物7，以下所有氨基酸溶液中，不發(fā)生偏振旋轉(zhuǎn)的氨基酸為() a、丙氨酸b、亮氨酸c、甘氨酸d、絲氨酸8，天然蛋白質(zhì)中含有的2.0種類的氨基酸的結(jié)構(gòu)() a，全部為l型b，全部為d型c，部分為l () a、Pro B、Lys C、His D、Glu 10、天然蛋白質(zhì)中不存在的氨基酸，() a、半胱氨酸b、瓜氨酸c、絲氨酸d、甲勞氏紫1.1、破壞螺

10、旋結(jié)構(gòu)的氨基酸殘馀化學(xué)基之一是： () a、亮氨酸b、丙氨酸c、脯氨酸d、谷氨酰胺蛋白質(zhì)位于等電點時，蛋白質(zhì)分子的() a、穩(wěn)定性增加b、表面凈電荷不變c、表面凈電荷增加d、溶解度最小1.3、使蛋白質(zhì)分子中的-S-S-斷裂成為可能的方法是，() a、尿素b、透析法c、甲酸d、加權(quán)金屬鹽、1、單氨基單羧酸氨基酸的pI為中性() 2、配置的變化需要破壞舊的共價鍵和形成新的共價鍵，配置的變化不會發(fā)生這種變化。 () 3、生物體內(nèi)只有蛋白質(zhì)含有氨基酸。() 4、所有蛋白質(zhì)均具有一、二、三、四級結(jié)構(gòu)。 () 5、用羧肽酶a水解作用肽，最早釋放的是Leu，其次是Gly，由此判明該肽的c端序列是Gly-Le

11、u。 (6)蛋白質(zhì)分子中各個氨基酸的置換不一定引起蛋白質(zhì)活性的變化。 () 7，長型血紅細(xì)胞貧血癥是先天性遺傳性分子癥，其病因是正常血色素分子中的谷氨酸殘留化學(xué)基被纈氨酸殘留化學(xué)基取代。 ()、8、長型血紅細(xì)胞貧血癥是先天性遺傳病，其病因是血色素代謝障礙。 () 9、蛋白質(zhì)和多肽中，連接氨基酸殘化學(xué)基的共價鍵，即只有一個肽鍵。 () 1.0、熱力學(xué)上蛋白質(zhì)分子最穩(wěn)定的構(gòu)象是自由能最低時的構(gòu)象。 () 1.1、天然氨基酸有不對稱的碳原子。 () 1.2、改性的蛋白質(zhì)的分子量也發(fā)生了變化。 () 1.3、蛋白質(zhì)為等電點，凈電荷為零，溶解度最小。 ()、1、Gly、Pro與其他常見氨基酸結(jié)構(gòu)的差異，對多肽鏈的二級結(jié)構(gòu)形成有何影響？ 2、為什么說蛋白質(zhì)水溶液是穩(wěn)定的親水膠體？3 .舉例說明蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系(包括初生結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系)。 4、聚賴氨酸(poly Lys )在pH7中呈不規(guī)則的線團(tuán)，在pH10中呈-螺旋的多聚谷氨酸(poly Gl