藥物的鑒別試驗(yàn)

1、第二章 藥物的鑒別試驗(yàn)Identification test of drug,藥學(xué)院 方海紅,2,復(fù)習(xí)回顧,Basic regularity of drug inspection,3,學(xué)習(xí)要求,4,鑒別試驗(yàn)的定義 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目 鑒別試驗(yàn)的方法 鑒別試驗(yàn)的條件,主要內(nèi)容,5,一、鑒別試驗(yàn)的定義,藥物鑒別試驗(yàn)：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)、儀器分析等方法來判斷藥物的真?zhèn)巍?僅用于證實(shí)儲藏有標(biāo)示的藥物鑒別，而不是對未知物進(jìn)行定性分析。,鑒別試驗(yàn)方法應(yīng)專屬，每個(gè)品種一般23條。,6,二、鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,7,（一）性狀 （Description）,1外觀指藥物的聚集狀態(tài)、晶

2、型、色澤及臭、味等性質(zhì)。 2溶解度是藥物的一種物理性質(zhì)，在一定程度上反映了藥品的純度。 3物理常數(shù)具有鑒別意義，也反映該藥品的純凈程度。 比旋度、吸收系數(shù)、酸值、碘值、皂化值等,8,（一）性狀 外觀、溶解度,阿司匹林 【性狀】 本品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭或微帶醋酸臭，味微酸；遇濕氣即緩緩水解。 本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或無水乙醚中微溶；在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解。 阿司匹林片 【性狀】 本品為白色片。 阿司匹林腸溶片 【性狀】本品為腸溶包衣片，除去包衣后顯白色。,9,極易溶解：系指溶質(zhì)1g(ml)能在溶劑不到1ml中溶解； 易溶：系指溶質(zhì)1g(ml

3、)能在溶劑1不到10ml中溶解； 溶解：系指溶質(zhì)1g(ml)能在溶劑10不到30ml中溶解； 略溶：系指溶質(zhì)1g(ml)能在溶劑30不到100ml中溶解； 微溶：系指溶質(zhì)1g(ml)能在溶劑100不到1000ml中溶解; 極微溶解： 系指溶質(zhì)1g(ml)能在溶劑1000不到10000ml中溶解； 幾乎不溶或不溶系指溶質(zhì)1g(ml)在溶劑10000ml中不能完全溶解。,（一）性狀 外觀、溶解度,10,（一）性狀 物理常數(shù),布洛芬 熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)（附錄 C）為74.577.5。 卡巴膽堿 熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)（附錄 C）為200204，熔融時(shí)同時(shí)分解。,熔 點(diǎn),固體熔化成液體的溫度,熔融同時(shí)分解的溫

4、度,自初熔至全熔的一段溫度,11,如：右旋糖酐20 比旋度：取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含10mg的溶液，在25時(shí)， 依法測定(附錄)，比旋度為+190至200 。,（一）性狀 物理常數(shù),藥品批發(fā),比旋度,在一定波長與溫度下，偏振光透過1dm且每1ml中含旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測得的旋光度。,12,如：替硝唑 吸收系數(shù) 取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含12g的溶液，照紫外-可見分光光度法(附錄 A)，在317nm的波長處測定吸收度，吸收系數(shù)（E1%1cm ）為352378。,（一）性狀 物理常數(shù),A=ECL,藥品批發(fā),吸收系數(shù),在給定的波長、溶劑和

5、溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度。,13,（二）一般鑒別試驗(yàn) General identification test,依 據(jù)： 某一類藥物組成中的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)或典型的有機(jī)官能團(tuán)反應(yīng)。 中國藥典附錄收載一般鑒別試驗(yàn)：,14,例：有機(jī)酸FeCl3 反應(yīng),堿式苯甲酸鐵鹽（赭色沉淀）,15,例：有機(jī)氟化物,反應(yīng)原理地塞米松磷酸鈉及其注射液，醋酸曲安奈德及其注射液、諾氟沙星、醋酸氟輕松、醋酸氟輕可的松等含氟藥物 將有機(jī)氟轉(zhuǎn)化F-，用氧瓶燃燒法進(jìn)行破壞，用水或堿性溶液吸收成 F-，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰在Ph4.3溶液中形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。,16,17,例：托烷類生物堿類,

6、反應(yīng)原理氫溴酸山莨菪堿及其片劑、注射液，氫溴酸東莨菪堿及其片劑、注射液，丁溴酸東莨菪堿及其注射液、膠囊、硫酸阿托品及其片劑、注射液，鹽酸消旋山莨菪堿注射液等藥物的分子結(jié)構(gòu)，都是由莨菪烷衍生物（又稱托烷衍生物）與莨菪酸生成的酯，稱為托烷生物堿類。 Vitali反應(yīng),18,19,（三）專屬性鑒別試驗(yàn)Specific identification test,依 據(jù)： 藥物分子中的特殊基團(tuán)或官能團(tuán)特殊反應(yīng)或典型的有機(jī)官能團(tuán)反應(yīng)。 如：巴比妥類藥物依據(jù)C-5上取代基的官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)鑒別,20,5,5-取代的巴比妥類藥物,21,三、鑒 別 方 法,化學(xué)鑒別法,光譜鑒別法,生物學(xué)法,HPLC、GC鑒別法,薄

7、層色譜鑒別法,紙色譜鑒別法,呈色反應(yīng)鑒別法,紫外光譜鑒別法,紅外光譜鑒別法,沉淀生成反應(yīng)鑒別法,色譜鑒別法,氣體生成反應(yīng)鑒別法,測定生成物的熔點(diǎn),熒光反應(yīng)鑒別法,22,1.呈色反應(yīng)鑒別法 指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤海谝欢l件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。 （1）三氯化鐵呈色反應(yīng)： 用于酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基 （2）異羥肟酸鐵反應(yīng)： 多用于芳酸及其酯類、酰胺類 （3）茚三酮呈色反應(yīng)： 用于結(jié)構(gòu)中含有脂肪氨基藥物 （4）重氮化-偶合顯色反應(yīng)： 用于芳伯氨基或潛在芳伯氨基 （5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng),23,2.沉淀生成反應(yīng)鑒別法,（1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng) （2）與硫氰化

8、鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng) （3）其它沉淀反應(yīng)。,多用于生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽。,24,呋塞米 【鑒別】(1) 取本品約25mg，加水5ml ，滴加氫氧化鈉試液使恰溶解，加硫酸銅試液12滴，即生成綠色沉淀。 (2) 取本品25mg，置試管中，加乙醇2.5ml 溶解后，沿管壁滴加對二甲氨基苯甲醛 試液2ml ，即顯綠色，漸變深紅色。 (3) 取本品，加0.4 氫氧化鈉溶液制成每1ml 中含5g的溶液，照分光光度法（ 附錄 A）測定，在228nm與271nm 的波長處有最大吸收。,例： 呈色反應(yīng)與沉淀,25,常用的熒光發(fā)射形式： （1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光； （2）藥物溶液加

9、硫酸后，在可見光下發(fā)射熒光； （3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；,3.熒光反應(yīng)鑒別法,（4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。,26,硫酸奎寧 【鑒別】(1) 取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。 (2) 取鑒別(1)項(xiàng)剩余的溶液5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml ，即顯翠綠色。 (3) 取鑒別(1)項(xiàng)剩余的溶液5ml，加鹽酸使成酸性后，加氯化鋇試液1ml，即發(fā)生白 色沉淀。,例：熒光反應(yīng),27,（1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣。 （2）化學(xué)

10、結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體。 （3）含碘有機(jī)藥物，經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。,4.氣體生成反應(yīng)鑒別法,28,氯氮平 【鑒別】(1) 取本品約100mg，加碳酸鈉等量攪拌均勻，置干燥試管中灼燒，管口覆以用11,2-萘醌-4-磺酸鈉溶液濕潤的試紙，試液顯紫藍(lán)色。 (2) 本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集504 圖）一致。,例：生成氣體反應(yīng),29,（二）光譜鑒別法,1.紫外可見光譜鑒別法 對比吸收曲線一致性 對比最大吸收波長和同時(shí)測定最小吸收波長的一致性 規(guī)定一定濃度的供試品在最大吸收波長處的

11、吸收度 規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法 規(guī)定吸收波長和吸收度比值法 經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性,30,光譜鑒別法：紫外光譜 維生素2 【鑒別】 (1) 取本品約1mg ，加水100ml 溶解后，溶液在透射光下顯淡黃綠色并 有強(qiáng)烈的黃綠色熒光；分成二份，一份中加無機(jī)酸或堿溶液，熒光即消失；另一份中加 連二亞硫酸鈉結(jié)晶少許，搖勻后，黃色即消褪，熒光亦消失。 (2) 取含量測定項(xiàng)下的溶液，照分光光度法（附錄 A）測定，在267nm、375nm、與444nm 的波長處有最大吸收。375nm波長處的吸收度與267nm波長處的吸收度的比值應(yīng) 為0.310.33；444nm波長處的吸收度與267n

12、m波長處的吸收度的比值應(yīng)為0.360.39。,31,2、丹參藥材中丹參總酚酸的測定標(biāo)準(zhǔn)曲線法 對照品溶液的配制：取原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加水稀釋配制成對照品溶液。 樣品的配制：分別稱取1g丹參藥材粉末至100ml錐形瓶中，精密加入75%甲醇溶液，超聲1小時(shí)，濾過，經(jīng)顯色，紫外掃描。 顯色方法：取樣品0.2ml于10ml量瓶中，加入0.5ml 5%NaNO2后，搖勻后再加入0.5ml 10%Al(NO3)3，搖勻后再加入4ml 4%NaOH溶液，用水補(bǔ)足至刻度，即進(jìn)行紫外掃描。,32,原兒茶醛對照品 紫外掃描圖,丹參藥材樣品 紫外掃描圖,不同濃度對照品 紫外掃描圖,33,2）光譜鑒別法：

13、紅外光譜 對比供試品紅外吸收光譜與藥品標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜的一致性，尤其是指紋一致性。主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥。 阿莫西林 【鑒別】（1）在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。 （2）本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的光譜（光譜集441）一致。,34,35,（三）色譜法,1、薄層色譜法 2、高效液相色譜法 3、質(zhì)譜法,36,1、薄層色譜法 薄層層析流動相的移動是依靠毛細(xì)作用。 將試樣點(diǎn)在色譜濾紙或?qū)游霭宓囊欢耍⒃摱私谧鳛榱鲃酉嗟娜軇ǔ７Q之為展開劑）中，隨著溶劑向上的移動，經(jīng)過試樣點(diǎn)時(shí)，帶動試樣向上運(yùn)動。,37,硫酸阿米卡星 【鑒別】 (1)

14、 取本品與阿米卡星標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別加水制成每1ml 中含10mg的溶 液，照薄層色譜法（附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10l ，分別點(diǎn)于同一硅膠 薄層板上，以氯仿甲醇濃氨溶液水(1:4:2:1) 為展開劑，展開后， 晾干，噴 以0.2 茚三酮的水飽和正丁醇溶液，在100 加熱10分鐘，供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液 所顯主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)相同。,38,2、高效液相色譜法,39,（一）溶液的濃度 （二）溶液的溫度 （三）溶液的酸堿度 （四）試驗(yàn)時(shí)間 （五）干擾成分的存在,四、鑒別試驗(yàn)條件,40,（一）專屬性,五、鑒別方法的驗(yàn)證,指其他成分存在的情況下，采用的鑒別方法能否正確地鑒別出被測物質(zhì)的特性。 一般可做陰性對照（空白試驗(yàn)） 鑒別試驗(yàn)一般需23種不同類型的方法。,41,（一）耐用性,五、鑒別方法的驗(yàn)證,指測定條件發(fā)生小的變動時(shí)，測定結(jié)果受到的影響程度。 如色譜柱的型號、流動相的比例、pH等 適用范圍盡可能廣。,42,鑒別試驗(yàn)的定義,鑒別試驗(yàn)的方法（化學(xué)、光譜、色譜）,本章要點(diǎn)回顧,鑒別試驗(yàn)的條件,鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目（性狀、一般鑒別、特殊鑒別）,鑒別試驗(yàn)的驗(yàn)證,43,復(fù)習(xí)思考題,1、藥物鑒別