專(zhuān)題五DNA的粗提取與鑒定.ppt

1、5.1 DNA的粗提取與鑒定,一、基礎(chǔ)知識(shí),（一）提取DNA的方法,1.提取生物大分子的基本思路,選用一定的物理或化學(xué)方法，分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子,2.提取DNA的基本思路,提取DNA，去除其他成分 利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等 在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異, DNA的溶解性,DNA和蛋白質(zhì)等成分 在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,利用這一特點(diǎn)， 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度 就能使DNA充分溶解， 而使雜質(zhì)沉淀；,3.DNA等大分子的理化性質(zhì), DNA不溶于酒精溶液, DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性,DNA不溶于酒精溶液， 但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。 將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步

2、分離。, DNA不溶于酒精溶液, DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性, 蛋白酶水解蛋白質(zhì)， 對(duì)DNA沒(méi)有影響, 高 溫大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080 而DNA在80以上才會(huì)變性, 洗滌劑溶解細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì) 但對(duì)DNA沒(méi)有影響,試劑：,（二）DNA的鑒定,條件：,二苯胺,沸水浴條件下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色,沸水浴,現(xiàn)象：,（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取,（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液,（三）除去濾液中的雜質(zhì)(純化),（四） DNA的析出與鑒定,二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取,從下列材料中選取23種,原則：,菜花、香蕉、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜； 魚(yú)卵、豬肝、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞； 在液

3、體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌,凡是含有DNA的生物材料都可以考慮 選用DNA含量相對(duì)較高的組織,（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液,1、動(dòng)物細(xì)胞,2、植物細(xì)胞,容易破碎,需要溶解細(xì)胞膜,雞血細(xì)胞溶液（防凝固加檸檬酸鈉） 加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液,想一想：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？,蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體， 水分大量進(jìn)入血細(xì)胞，使血細(xì)胞脹裂； 加上攪拌作用，加速雞血細(xì)胞細(xì)胞膜、核膜破裂，從而釋放出DNA, 加入一定的洗滌劑和食鹽, 充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液,想一想：洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？,洗滌劑能溶解細(xì)胞膜，利于DNA釋放 食 鹽N

4、aCl，利于DNA的溶解于研磨液中,經(jīng)研磨可破碎細(xì)胞壁，使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放。若研磨不充分，會(huì)使提取的DNA量變少，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。,為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理,討論：濾液/研磨液中可能含有哪些成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì),想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？,1. DNA的溶解性,2. DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性,（三）除去濾液中的雜質(zhì),討論：方案二與方案三的原理有什么不同？,方案二：利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，使提取的DNA 與蛋白質(zhì)分開(kāi)； 方案三：利用DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，

5、 使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離,（四） DNA的析出與鑒定,與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95)， 靜置23min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物 粗提取DNA 用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌， 卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水,1、DNA的析出,2. DNA的鑒定, 向兩支試管中分別加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 其中一支試管中加入DNA絲狀物 各加入二苯胺試劑4ml 混勻后，置于沸水浴中加熱5min 待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化 觀(guān)察現(xiàn)象：,溶解絲狀物的溶液變?yōu)樗{(lán)色,2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響?,1.用雞血材料，做DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。 A.稀釋血液、沖洗樣品 B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出 C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍(lán)色,4.