自身免疫性疾病及其免疫檢測(cè)

1、,常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測(cè),自身抗體（autoantibody） 是指抗自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜) 分類: 臟器特異性自身抗體 臟器非特異性自身抗體,自身免疫性疾病的重要標(biāo)志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 與疾病的活動(dòng)性相關(guān) 參與免疫病理性損傷,一、自身抗體的特性,自身抗體 免疫球蛋白 補(bǔ)體 淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子,自身免疫性疾病的主要實(shí)驗(yàn)檢測(cè), 1948年 Haragraves等發(fā)現(xiàn) LE 細(xì)胞現(xiàn)象 1957年 Holborow等應(yīng)用IIF檢測(cè)ANA 1961年 Beck等發(fā)現(xiàn)ANA不同熒光

2、染色模型 6070年代IIF、ID、CIE應(yīng)用新的自身抗體 1979年 Towbin等應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自身抗體 80年代IB、RIP應(yīng)用蛋白多肽水平認(rèn)識(shí)自身抗原 1987年DNA基因重組技術(shù)開始應(yīng)用自身抗體研究 近十年應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),自身抗體研究發(fā)展簡(jiǎn)史,抗核抗體（ANA） 抗可提取性核抗原抗體（ENA） 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA） 類風(fēng)濕因子（RF） 抗角蛋白抗體（AKA） 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體） 抗心磷脂抗體（ACLA）,常檢測(cè)的自身抗體,常見自身免疫性疾病的標(biāo)志抗體,間接免疫熒光法（IIF） ELISA 免疫印跡法（Western-blot） 酶免疫斑點(diǎn)法,檢測(cè)自

3、身抗體常用的方法,抗核抗體:以真核細(xì)胞（如HEp-2細(xì)胞、肝細(xì)胞）的各種細(xì)胞核成分為靶抗原所檢測(cè)的自身抗體的總稱。,二、抗核抗體的檢測(cè)與應(yīng)用,抗核抗體譜,以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗體等； 以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B 抗體等； 以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等； 以抗原的化學(xué)名稱分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體,抗核小體抗體等。,抗核抗體譜的分類和命名,間接免疫熒光法 （indirect immunofluorescence, IIF） 酶免疫斑點(diǎn)法 ELISA 免疫印跡法 （Weste

4、rn-blot）,抗核抗體檢測(cè)方法,間接免疫熒光法示意圖,細(xì)胞核 細(xì)胞漿 細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期 均質(zhì)型 核糖體型 肌蛋白型 中心體型 斑點(diǎn)型 線粒體型 波形纖維蛋白型 紡綞體型 核仁型 高爾基體型 細(xì)胞角蛋白型 紡綞絲型 著絲點(diǎn)型 溶酶體型 原肌球蛋白型 中間體型 周邊型 顆粒型 紐帶蛋白型 PCNA型 核點(diǎn)型(dots),IIF檢測(cè)ANA熒光染色模型,斑點(diǎn)型（nRNP/Sm）,高滴度的抗U1-nRNP為MCTD的特征。抗Sm抗體對(duì)SLE具有高度特異性。,斑點(diǎn)型（SSA/SSB）,抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡 （100%）?？筍SB抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。,均質(zhì)型,抗

5、dsDNA抗體 抗組蛋白抗體(histone) 抗ssDNA抗體 抗核小體抗體(nucleosome),周邊型,可見于膠原病、PBC、CAH等患者,核點(diǎn)型（DOTS）,見于SLE、SS、PBC、風(fēng)濕病,抗著絲點(diǎn)型,PSS局限型標(biāo)志抗體,抗原纖維蛋白型,僅見于5%10%的PSS，男性高于女性,抗RNA多聚酶型抗體,僅見于硬皮病患者，陽性率為4%,抗PM-Scl（PM-1）抗體,見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM /皮肌炎 DM / 彌漫性PSS ）,抗Scl-70型,PSS 彌漫型的標(biāo)志抗體,增殖細(xì)胞核抗原型 （PCNA） SLE特異性抗體，與發(fā)生彌漫性增殖性腎小球腎炎相關(guān),抗核糖體P蛋白（rib-

6、P）抗體,抗線粒體抗體（AMA）,SLE標(biāo)志抗體,原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體,抗Jo-1抗體,抗高爾基體抗體,多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體,偶見于SLE和SS,抗肌動(dòng)蛋白抗體,見于自身免疫性慢性活動(dòng)型肝炎,抗雙鏈DNA抗體,抗dsDNA抗體與細(xì)胞核DNA（外圍區(qū)）脫氧核糖磷酸框架結(jié)合。 抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標(biāo)志抗體。其抗體滴度與疾病的活動(dòng)程度有相關(guān)性，抗體滴度的動(dòng)態(tài)測(cè)定為監(jiān)控治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)室手段。,抗雙鏈DNA抗體,檢測(cè)方法及應(yīng)用,間接免疫熒光檢測(cè)，是目前國內(nèi)外臨床常規(guī)檢測(cè)抗dsDNA抗體最常用的方法。 抗dsDNA抗體診斷SLE的特異性可達(dá)95%100%，但其敏感性僅為3

7、0%50%，因此抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷。,檢測(cè)方法及應(yīng)用,抗dsDNA抗體,SLE特異性抗體，與病情活動(dòng)度相關(guān)。,抗核小體抗體,核小體（nucleosome）是真核生物細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位 。凋亡細(xì)胞是核小體的重要來源，當(dāng)SLE患者的吞噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的清除能力受損或降低，導(dǎo)致核小體在患者體內(nèi)大量存積，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗核小體抗體（Antinucleosome antibody ,AnuA）。,檢測(cè)及應(yīng)用,AnuA的檢測(cè)通常采用ELISA檢測(cè)法。 AnuA具有同抗ds-DNA抗體相同的診斷特異性，可達(dá)到95%，在系統(tǒng)性硬化（SSc）病中可有20%50%低濃度陽性率，其他自身免

8、疫性疾病中該抗體均為陰性。 AnuA的表達(dá)與SLE病情活動(dòng)分?jǐn)?shù)相關(guān)。,檢測(cè)及應(yīng)用,抗ENA抗體譜:可提取核抗原抗體的總稱 臨床常檢測(cè)的抗ENA抗體譜主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白,三、抗ENA抗體譜的檢測(cè)與應(yīng)用,抗可提取性核抗原（ENA）抗體,雙向免疫擴(kuò)散（ID） 對(duì)流免疫電泳（CIE） 免疫印跡法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑點(diǎn)法,ENA檢測(cè)方法,免疫印跡法,SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)移電泳,酶免疫檢測(cè),免疫印跡法,抗可提取性核抗原（ENA）抗體, 抗Sm抗體：SLE標(biāo)記性抗體（20%30%） 抗nRNP

9、抗體：MCTD 95%100%（高滴度） 抗SSA抗體：PSS 60%75%，其它CTD 抗SSB抗體： PSS 10%40%，其它CTD 抗Scl-70抗體：SSc 25%75%, 標(biāo)記性抗體 抗Jo-1抗體：PM/DM 25%，標(biāo)記性抗體 抗rRNP抗體： SLE特異性抗體（10%30%）,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies, ANCA）是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對(duì)系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。,四、與小血管炎相關(guān)的自身抗 體檢測(cè)與應(yīng)

10、用,熒光染色型,靶抗原,胞漿型(cANCA),蛋白酶3（PR3） 殺菌/通透性增高蛋白（BPI）,核周型(pANCA),髓過氧化物酶（MPO） 組織蛋白酶G（Cath-G） 乳鐵蛋白（LF） 白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE）,非典型型(aANCA),兼有兩種特性,ANCA熒光染色型與靶抗原,周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 （pANCA）,主要見于炎癥性腸?。冃越Y(jié)腸炎和克羅恩?。?胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 (cANCA),主要見于Wegeners肉芽腫及微小多動(dòng)脈炎,ANCA臨床應(yīng)用,髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新 月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽腫性血管炎 相關(guān),殺菌/通透性增高蛋

11、白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病 并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系,蛋白酶3（PR3）與Wegeners肉芽腫（WG）密切相關(guān)。 僅cANCA診斷WG的特異性大于90%，聯(lián)合PR3 可超過95%， 活動(dòng)期幾乎100%陽性。,組織蛋白酶G (Cath-G) 白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE) 乳鐵蛋白(LF),可見于SLE、IBD、PBC、PSC等,RA早期診斷相關(guān)自身抗體 抗角質(zhì)層蛋白抗體（AKA）：1979年 Young等報(bào)告 靶抗原：filaggrin（40KD） 抗核周因子（APF):1964年 Nienhuis等報(bào)告 靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解產(chǎn)物 抗聚角蛋

12、白微絲蛋白抗體（AFA）：1993年Simon等報(bào)告 靶抗原：filaggrin（40KD） 抗Sa抗體：1994年 Despres等報(bào)告 靶抗原:50/55KD非?；嚯?，半抗原-瓜氨酸 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）：1998 Schellekens,五、與RA相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用,類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor, RF）為抗變性IgG Fc的自身抗體，主要是IgM型 致病機(jī)理： RF與體內(nèi)變性IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體或被吞噬細(xì)胞吞噬，產(chǎn)生炎性介質(zhì)導(dǎo)致組織炎性損傷，使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。,1. 膠乳顆粒凝集實(shí)驗(yàn) 定性、半定量，敏感性和特異性不高，測(cè)定I

13、gM-RF 2. 速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE） 定量、準(zhǔn)確、快速，測(cè)定IgM-RF 3. ELISA 定量、準(zhǔn)確，可測(cè)定不同類型的RF,檢測(cè)方法,（1）RF在RA、SLE、PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。,臨床應(yīng)用,（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價(jià)80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)通常提示患者預(yù)后不良。（3）IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)癥狀密切相關(guān)，常伴隨IgM-RF同時(shí)出現(xiàn)，在正常人及非RA患者中很難檢出。（4）IgA-RF與RA患者關(guān)節(jié)癥狀的嚴(yán)重程度及骨質(zhì)破壞有顯著相關(guān)性。,AKA主要見于RA，陽性率36%59%，特異性

14、95%99%，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的RA類型。,抗角蛋白抗體（AKA）,常用方法：ELISA 臨床意義：RA特異性自身抗體，敏感性65%85%，特異性為94%98%；高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關(guān)節(jié)侵蝕的危險(xiǎn)因子之一，定量檢測(cè)有助于判斷預(yù)后。,抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）,自身免疫性肝病是與自身免疫密切相關(guān)的特殊類型的肝病，其診斷和治療完全不同于一般的慢性病毒性肝炎 自身免疫性肝炎 (AIH) 原發(fā)性膽汁性肝硬化 (PBC) 原發(fā)性硬化性膽管炎 (PSC) 重疊綜合征,六、與自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用, 在多種累及肝膽疾患的自身免疫疾病中，自身抗體在發(fā)病機(jī)

15、制中起重要作用 自身免疫性肝病具有相對(duì)特異性自身抗體譜 自身抗體檢測(cè)對(duì)自身免疫性肝病的診斷及鑒別診斷具有重要意義,自身免疫性肝病與自身抗體,自身免疫性肝病及其自身抗體譜,疾病類型 相關(guān)自身抗體 自身免疫性肝炎（ AIH ） 型AIH ANA/ASMA 型AIH anti-LKM-1 anti-LC-1 型AIH anti-SLA (可溶性肝抗原) 原發(fā)性膽汁性肝硬化（ PBC） AMA (M2/M4/M8/M9 ) anti-gp210， sp100 ACA 原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC） pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗體譜,抗甲狀腺球蛋白抗體(TG Ab) 抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO

16、 Ab ） 抗促甲狀腺素受體抗體（TSH-R Ab）,七、與橋本甲狀腺炎相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用,重癥肌無力（MG）自身抗體譜： 抗骨胳肌抗體（ASA）、抗乙酰膽堿受體(AchR) 抗體 多發(fā)性硬化（MS）自身抗體譜： 抗髓鞘堿性蛋白（MBP）抗體、抗腦苷脂抗體、抗神經(jīng)結(jié)苷脂抗體 急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病（格林巴利綜合征）自身抗體譜： 抗髓鞘糖脂抗體、抗髓鞘硫脂抗體,八、與神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用,大多數(shù)自身免疫患者血清中可測(cè)到高效價(jià)的自身抗體，特別是有些自身抗體的檢測(cè)已納入某些自身免疫性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)中，自身抗體檢測(cè)已是臨床免疫檢測(cè)的一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。,第五節(jié) 自

17、身抗體檢測(cè)的 臨床應(yīng)用,篩查性試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)項(xiàng)目的合理組合 選擇相關(guān)的自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目 切忌盲目的全面檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)同步設(shè)置陽性和陰性對(duì)照,一、自身抗體檢測(cè)的一般原則,95%99%可排除SLE （） SLE治療緩解 病情特重（大量IC沉積消耗抗體） （）低滴度 常見于RA等其它自身免疫性疾病 高滴度可作為診斷SLE的依據(jù) ENA抗體譜檢測(cè) （）不能排除 抗dsDNA、Sm、rib抗體 （）可幫助診斷,ANA初篩,二、實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn),ANA在自身免疫性疾病中的檢出率,第六節(jié) 自身免疫性 疾病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè),在自身免疫病患者體內(nèi)，因有多種自身抗原的存在，自身抗體的種類也可有交叉重疊

18、現(xiàn)象，故實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)出多種自身抗體陽性時(shí)還必須結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行綜合分析。,自身抗體免疫球蛋白 II型及III型自身免疫病消耗補(bǔ)體補(bǔ)體 監(jiān)測(cè)病情,一、免疫球蛋白及補(bǔ)體檢測(cè)及臨床意義,淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能反應(yīng)患者體內(nèi)免疫細(xì)胞狀態(tài),二、淋巴細(xì)胞檢測(cè)及臨床意義,細(xì)胞因子介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)或應(yīng)用治療監(jiān)測(cè)病情或指導(dǎo)治療,三、細(xì)胞因子檢測(cè)及臨床意義,CIC與多種自身免疫病相關(guān) 輔助診斷疾病,四、循環(huán)免役復(fù)合物檢測(cè)及臨床意義,1.區(qū)分自身免疫和自身免疫性疾?。?2.自身免疫性疾病分為幾類？其代表性疾病有哪些？ 3.ANA有哪些種類？它們?cè)贏ID及SLE診斷中的價(jià)值如何？ 4.自身免疫病的發(fā)病機(jī)制是什么？ 5.自身免疫性疾病根據(jù)超敏反應(yīng)類型可分為幾類，代表性疾病有哪些？ 6.常見的免疫熒光法檢測(cè)ANA的核型有哪些？有何臨床意義？ 7.抗ENA抗體譜的可檢測(cè)自身抗體項(xiàng)目包括哪些？有何臨床意義？ 8.SLE和RA診斷的篩查試驗(yàn)和確診試驗(yàn)分別是什么？ 9.小血管炎相關(guān)的自身抗體和自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目分別有哪些？ 10.自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)有哪些？,思考題,自身免疫性疾病是自身免疫應(yīng)答引起的疾病，其體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)自身成份的自身抗體或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞。