第十章+食品檢驗(yàn)與免疫技術(shù).ppt

1、第十章 食品檢驗(yàn)與免疫技術(shù),陸劍鋒 食品科學(xué)與工程系,免疫檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)是食品檢驗(yàn)檢測(cè)分析技術(shù)體系的一個(gè)重要分支，由于其專一性、高靈敏、快速簡(jiǎn)易的應(yīng)用特點(diǎn)，已稱為食品營(yíng)養(yǎng)成分、功能成分、有害成分、污染殘留成分檢測(cè)的重點(diǎn)發(fā)展技術(shù)之一。 免疫檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)是以抗原抗體特異性識(shí)別和結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，可以與酶標(biāo)記、放射性和發(fā)光性物質(zhì)標(biāo)記、生物傳感器等各種方法相結(jié)合，形成檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確而又精確的專用檢測(cè)技術(shù)。 一個(gè)國(guó)家的食品檢驗(yàn)檢測(cè)水平關(guān)系到廣大人民群眾的生命安全及社會(huì)穩(wěn)定。,第一節(jié) 現(xiàn)代食品檢驗(yàn)的理論基礎(chǔ),食品檢驗(yàn)主要是運(yùn)用物理、化學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)等學(xué)科的基本理論及各種科學(xué)技術(shù)，按照制定的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)食

2、品加工、農(nóng)、牧業(yè)生產(chǎn)中的物料，包括原料、輔助材料、半成品、成品、副產(chǎn)品等的主要成分、含量及其衛(wèi)生指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)以及對(duì)可能含有的有害物質(zhì)進(jìn)行痕量分析。 食品檢驗(yàn)是研究和評(píng)定食品質(zhì)量及其變化的一門學(xué)科。 它的特點(diǎn)是緊密銜接相關(guān)基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，根據(jù)影響食品質(zhì)量與安全的因素而不斷地革新和創(chuàng)新自己的技術(shù)體系。,一、食品檢驗(yàn)與食品質(zhì)量和食品質(zhì)量安全,食品檢驗(yàn)是食品質(zhì)量和食品衛(wèi)生的評(píng)價(jià)手段，是實(shí)現(xiàn)食品質(zhì)量安全的重要基礎(chǔ)工作之一。 食品檢驗(yàn)內(nèi)容十分豐富，主要包括：食品衛(wèi)生與營(yíng)養(yǎng)成分、保健食品中的功能成分、食品添加劑、食品中污染及違禁成分、食品輔助材料等有關(guān)的食品分析。,1. 食品質(zhì)量要素,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品工業(yè)基本術(shù)

3、語(yǔ)（GB15091-1995）規(guī)定，食品質(zhì)量（food quality）是指食品滿足規(guī)定或者潛在要求的特征和特性總和，反映食品品質(zhì)的優(yōu)劣。 食品質(zhì)量，是一個(gè)“度”的概念，不是“質(zhì)”的概念，是指食品的優(yōu)劣程度，既包括優(yōu)等食品，也包括劣等食品。 食品質(zhì)量要素分為：外觀要素、質(zhì)構(gòu)要素、風(fēng)味要素、營(yíng)養(yǎng)質(zhì)量、衛(wèi)生質(zhì)量和耐藏性能等。,2. 食品質(zhì)量安全,食品安全包含食品質(zhì)量安全（food safety）和食品供給安全（food security）。 根據(jù)WHO的定義，食品安全（food safety）是“食物中有毒、有害物質(zhì)對(duì)人體健康影響的公共衛(wèi)生問題”。其中包括兩點(diǎn)：第一“有毒有害物質(zhì)”。第二“對(duì)人體健

4、康影響”。 食品質(zhì)量安全是指食品及食品相關(guān)產(chǎn)品不存在對(duì)人體健康造成現(xiàn)實(shí)的或潛在的侵害的一種狀態(tài)，也指為確保此種狀態(tài)所采取的各種管理方法和措施。,食品質(zhì)量安全包括食品衛(wèi)生、食品質(zhì)量、食品營(yíng)養(yǎng)等相關(guān)方面的內(nèi)容。 常見的食品質(zhì)量安全的危害有如下分類： （1）生物因素：細(xì)菌性食品中毒的病原菌；人類腸道傳染病的病原菌；人畜共患的病原菌和病毒；引起嬰兒腹瀉和甲肝流行病毒；其他，包括魚貝類、動(dòng)植物毒素等 （2）化學(xué)因素：環(huán)境污染；農(nóng)藥、獸藥殘留；添加劑濫用；營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑濫用；貯藏加工成分轉(zhuǎn)化物；食物中抗?fàn)I養(yǎng)因子。 （3）生產(chǎn)與技術(shù)因素：生物技術(shù)因素；生產(chǎn)技術(shù)因素；經(jīng)濟(jì)與生活因素；人體生理因素,二、食品檢驗(yàn)檢測(cè)

5、的技術(shù)體系,目前，根據(jù)采用的技術(shù)和方法，大致可以分為食品感官檢驗(yàn)技術(shù)、食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)、食品理化檢驗(yàn)技術(shù)和生物檢測(cè)技術(shù)等若干種類。 但是，針對(duì)當(dāng)前食品質(zhì)量與安全存在的問題，進(jìn)一步建設(shè)和完善食品檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)體系顯得極其重要和緊迫。,1. 食品感官檢驗(yàn),食品感官檢驗(yàn)（food sensory analysis or sensory evaluation）就是憑借人體自身的感覺器官，具體地講就是憑借眼、耳、鼻、口（包括唇和舌頭）和手，對(duì)食品的質(zhì)量狀況作出客觀的評(píng)價(jià)。 食品質(zhì)量的優(yōu)劣最直接地表現(xiàn)在它的感官性狀上，通過(guò)感官指標(biāo)來(lái)鑒別食品的優(yōu)劣和真?zhèn)?，不僅簡(jiǎn)便易行，而且靈敏度高，直觀而實(shí)用，與使用各種理

6、化、微生物的儀器進(jìn)行分析相比，有很多優(yōu)點(diǎn)，因而它也是食品的生產(chǎn)、銷售、管理人員所必須掌握的一門技能。,食品感官檢驗(yàn)?zāi)芊裾鎸?shí)、準(zhǔn)確地反映客觀事物的本質(zhì)，除了與人體感覺器官的健全程度和靈敏程度有關(guān)外，還與人們對(duì)客觀事物的認(rèn)識(shí)能力有直接的關(guān)系。 只有當(dāng)人體的感覺器官正常，又熟悉有關(guān)食品質(zhì)量的基本常識(shí)時(shí)，才能比較準(zhǔn)確地鑒別出食品質(zhì)量的優(yōu)劣。 因此，通曉各類食品感官檢驗(yàn)方法，為人們?cè)谌粘Ｉ钪羞x購(gòu)食品或食品原料、依法保護(hù)自己的正常權(quán)益不受侵犯提供了必要的客觀依據(jù)。 感官鑒別有三個(gè)主要的應(yīng)用特點(diǎn)：（1）隨時(shí)檢驗(yàn)及時(shí)處理；（2）無(wú)需場(chǎng)地和條件要求；（3）感官鑒別的靈敏性。,2. 食品微生物檢驗(yàn),食品微生物檢

7、驗(yàn)（food microbiological analysis）是應(yīng)用微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢查食品中微生物的生長(zhǎng)、繁殖情況。 檢測(cè)污染食品的生物主要包括細(xì)菌、霉菌、生物毒素、寄生蟲等，通常采用顯微技術(shù)，通過(guò)接種、分離純化、配制培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)來(lái)對(duì)部分可疑食品中的病原體進(jìn)行檢測(cè)。 食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)的主要特點(diǎn)：（1）微生物菌類（種屬繁多）；（2）微生物檢驗(yàn)的數(shù)量觀念（污染程度）；（3）微生物檢驗(yàn)技術(shù)（檢驗(yàn)技術(shù)廣泛）；（4）微生物檢驗(yàn)要求（快速性、準(zhǔn)確性）,3. 食品理化檢驗(yàn),食品理化檢驗(yàn)（food physical and chemical analysis）是應(yīng)用物理學(xué)和化學(xué)分析原理，利用光

8、譜、色譜及質(zhì)譜等分析儀器，結(jié)合有機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)、食品化學(xué)等知識(shí)對(duì)食品的質(zhì)量要素進(jìn)行測(cè)定、試驗(yàn)、計(jì)量，從而判斷食品的質(zhì)量。 食品理化檢驗(yàn)的主要特點(diǎn)：（1）技術(shù)性強(qiáng)；（2）應(yīng)用面廣；（3）精確度高。,4. 食品生物技術(shù)檢驗(yàn),食品生物技術(shù)檢驗(yàn)（biological assay or analysis）是將生物酶、生物分子、離體組織或細(xì)胞乃至生物個(gè)體的生物學(xué)特征和原理應(yīng)用于食品檢驗(yàn)的方法。 生物檢驗(yàn)技術(shù)，包括終點(diǎn)測(cè)定法、動(dòng)力學(xué)測(cè)定法、多酶偶聯(lián)測(cè)定法等生物酶技術(shù)，核酸探針技術(shù)和多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)等分子生物學(xué)技術(shù)以及微生物、生物酶、免疫等技術(shù)復(fù)合應(yīng)用的生物傳感器、生物芯片技術(shù)等。其中最為普及和成熟的生物

9、技術(shù)是免疫檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)。 生物技術(shù)檢驗(yàn)的主要特點(diǎn)：（1）生物識(shí)別功能；（2）靈敏度高；（3） 特異性強(qiáng)和針對(duì)性強(qiáng)。,第二節(jié) 免疫檢驗(yàn)檢測(cè),免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)起源于檢測(cè)病原微生物抗原及抗體的血清學(xué)診斷。 1896年，G. Widal和A. Sicad利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效準(zhǔn)確地診斷傷害。 此后，應(yīng)用免疫反應(yīng)原理的免疫檢驗(yàn)技術(shù)逐步在醫(yī)學(xué)、生物等各個(gè)領(lǐng)域普及，成為一種微量化學(xué)分析方法。 免疫檢驗(yàn)包括標(biāo)記免疫測(cè)定法和非標(biāo)記免疫檢測(cè)法。標(biāo)記免疫檢測(cè)法又包括熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫、放射免疫、酶聯(lián)免疫等檢測(cè)方法。,一、免疫檢驗(yàn)檢測(cè)的應(yīng)用原理,食品免疫檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)主要利用體外抗原和

10、抗體的特異性反應(yīng)。借助抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè)。 抗原抗體的結(jié)合就像酶與底物的結(jié)合，激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學(xué)的反應(yīng)，而是非共價(jià)鍵的可逆的結(jié)合。 檢測(cè)原理：根據(jù)抗原抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物的性狀與活性特點(diǎn)，對(duì)標(biāo)本的抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量檢測(cè)。 對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí)，反應(yīng)中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復(fù)物的濃度呈函數(shù)關(guān)系。,1. 抗原或抗體檢測(cè)的實(shí)際意義,抗體檢測(cè)的意義 檢測(cè)抗體多用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)，可用于評(píng)價(jià)人和動(dòng)物免疫功能的指標(biāo)。 在食品檢驗(yàn)檢測(cè)中常用于受病毒、微生物感染的瘟疫產(chǎn)品。有利于鑒別評(píng)價(jià)畜禽產(chǎn)品的質(zhì)量安

11、全。 抗原檢測(cè)的意義： 作為抗原進(jìn)行檢測(cè)的物質(zhì)分為四類：（1）各種微生物及其大分子（2）生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)。（3）人和動(dòng)物細(xì)胞的表面分子（4）各種半抗原物質(zhì)。,2. 抗體的分類,抗體有多種類型，根據(jù)制備原理和方法，可分為：多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體。,（1） 多克隆抗體,一種抗原性物質(zhì)由于具有多種抗原決定簇，既可以刺激多種淋巴細(xì)胞克隆，也可以產(chǎn)生抗多種抗原決定簇的抗體，所以體液或血清是含有多種抗體的混合物。這樣的免疫血清稱為多克隆抗體（polyclonal antibody），即第一代抗體。,（2）單克隆抗體,一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單

12、克隆抗體（monoclonal antibody）。 單克隆抗體具有如下優(yōu)點(diǎn)： 單一特異性，與一個(gè)抗原決定簇反應(yīng)；可重復(fù)性，能夠提供完全一樣的抗體制劑；一經(jīng)制出，可無(wú)限量地供應(yīng)；生產(chǎn)單克隆抗體不一定需要純的抗原；能查出混合物中存在的用常規(guī)方法查不出的微量成分。,（3）基因工程抗體,基因工程抗體（genetic engineering antibodies）是以基因工程技術(shù)等高新生物技術(shù)為平臺(tái)制備的生物藥物總稱。 通常制備的抗體均為鼠源性，臨床應(yīng)用時(shí)，對(duì)人是異種抗原，重復(fù)注射可使人產(chǎn)生抗鼠抗體，從而減弱或失去療效，并增加了超敏反應(yīng)的發(fā)生，在 80 年代早期，開始利用基因工程制備抗體，降低鼠源抗體

13、的免疫原性及其功能。 目前多采用人抗體的部分氨基酸序列代替某些鼠源性抗體的序列，經(jīng)修飾制備基因工程抗體，稱為第三代抗體。 基因工程抗體主要包括：嵌合抗體、改行抗體（人源化抗體）、完全人源抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體等。,二、免疫檢驗(yàn)檢測(cè)的主要方法,常規(guī)免疫檢驗(yàn)檢測(cè)方法是直接利用抗原與抗體反應(yīng)產(chǎn)生的關(guān)系進(jìn)行檢測(cè)，這一類方法簡(jiǎn)便、直觀，通常無(wú)需特殊的處理和試劑。 常規(guī)免疫檢驗(yàn)檢測(cè)方法主要有以下幾種： 凝集反應(yīng)法（直接和間接）、沉淀反應(yīng)法、免疫擴(kuò)散法（實(shí)質(zhì)上是免疫沉淀）、免疫電泳法等,1. 常規(guī)免疫檢驗(yàn)檢測(cè)方法,（1）凝集反應(yīng),凝集反應(yīng)（agglutination）是指顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)

14、的可以通過(guò)肉眼或顯微鏡觀察到的現(xiàn)象。 凝集反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）,生理鹽水,pH 6-8 -37,顆?？乖?二價(jià)相應(yīng)抗體,凝集,（2）沉淀反應(yīng),當(dāng)抗原為可溶性分子時(shí)，在與抗體結(jié)合后就形成沉淀（precipitation）。 絮狀沉淀反應(yīng)（flocculation）：在一系列試管中加入等量的抗體和遞增量的抗原，在中性條件下，37保溫1-2h，便可以出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀。通過(guò)對(duì)沉淀量的檢測(cè)，可以測(cè)出抗原抗體分子比，粗略地計(jì)算出抗原決定簇的數(shù)目。 環(huán)狀沉淀反應(yīng)（ring precipitation）：取直徑5mm左右的小試管，加入抗體后，

15、小心加入相應(yīng)的抗原，使抗原抗體不相混，37保溫10-20min，在抗原抗體界面上出現(xiàn)沉淀，這就是環(huán)狀沉淀實(shí)驗(yàn)。,（3）免疫擴(kuò)散法,免疫擴(kuò)散（immuno diffusion）利用蛋白質(zhì)在半固體基質(zhì)上的擴(kuò)散作用，使抗原和抗體在濃度比例合適的部位產(chǎn)生沉淀帶或沉淀環(huán)。免疫擴(kuò)散反應(yīng)實(shí)質(zhì)上也是免疫沉淀反應(yīng)。 單向免疫擴(kuò)散（simple immunodiffusion）：是在瓊脂中加入一定量的抗體，在孔中加入未知量的抗原。在37保溫過(guò)程中，孔內(nèi)的抗原不斷向四周擴(kuò)散，在遇到抗體后形成抗原抗體復(fù)合物沉淀。如果抗原量大，后繼的抗原遇到復(fù)合物后使之溶解，繼續(xù)向四周擴(kuò)散。復(fù)合物沉淀圈也不斷擴(kuò)大，直至孔內(nèi)的抗原全部形

16、成沉淀。,（4）免疫電泳法,火箭電泳（rocket immunoelectrophoresis ）是單向的定量免疫電泳技術(shù)。在電場(chǎng)作用下，定量的抗原在泳動(dòng)過(guò)程中不斷地出現(xiàn)抗原-抗體復(fù)合物沉淀的形成-溶解-再形成過(guò)程，類似單向瓊脂擴(kuò)散。當(dāng)全部抗原與抗體結(jié)合成抗原抗體復(fù)合物沉淀時(shí)，在瓊脂內(nèi)形成可見的錐形弧峰，形如火箭故稱為火箭電泳。,2. 標(biāo)記抗原抗體免疫檢驗(yàn)檢測(cè)法,免疫標(biāo)記技術(shù)指用熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金及化學(xué)(或生物)發(fā)光劑等作為追蹤物，標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 藉助于熒光顯微鏡、射線測(cè)量?jī)x、酶標(biāo)檢測(cè)儀、和發(fā)光免疫測(cè)定儀等精密儀器，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果直接鏡檢觀察或進(jìn)行自動(dòng)化測(cè)

17、定，可以在細(xì)胞、亞細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)及分子水平上，對(duì)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定性和定位研究。 因此，免疫標(biāo)記技術(shù)在敏感性、特異性、精確性及應(yīng)用范圍等方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)一般免疫血清學(xué)方法。,免疫標(biāo)記技術(shù)分為免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)、免疫酶技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)、免疫膠體金技術(shù)和發(fā)光免疫測(cè)定等。,（1）免疫熒光檢測(cè),免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence technique) ）是用化學(xué)方法使熒光素標(biāo)記的抗體（或抗原）與組織或細(xì)胞中的相應(yīng)抗原（或抗體）結(jié)合，進(jìn)行定性定位檢查抗原或抗體的方法。 常用的熒光素主要有：異硫氰酸熒光素（FITC），呈黃綠色熒光；四乙基羅丹明（RB200）呈明亮橙色熒光；四甲基異硫

18、氰酸羅丹明（TRITC），呈橙紅色熒光。,直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細(xì)胞懸液，細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行染色，經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后，洗去未結(jié)合的熒光抗體，將待檢標(biāo)本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應(yīng)抗原存在。缺點(diǎn)是檢查多種抗原需分別制備多種標(biāo)記抗體。 間接熒光法：將抗原直接與相應(yīng)抗體（不標(biāo)記熒光）結(jié)合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結(jié)合的熒光標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標(biāo)記的第二抗體，觀察與直接法相同。間接法比直接法敏感性高，如果用于檢查抗原的第一抗體是人或動(dòng)物的只需制備一種抗人或動(dòng)物的免疫球蛋白熒光抗體。,（2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linke

19、d immunosorbant assay, ELISA）是免疫酶技術(shù)中的一種。 原理：抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面仍保持免疫活性；抗原或抗體與酶形成的結(jié)合物仍保持其免疫活性和酶活性；結(jié)合物與相應(yīng)抗體或抗原反應(yīng)后，免疫復(fù)合物上標(biāo)記的酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)，可以催化底物水解、氧化還原，從而產(chǎn)生有色物質(zhì)，其顏色深淺與相應(yīng)的抗體或抗原有關(guān)。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。 在測(cè)定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物。,（a）直接ELISA檢測(cè)方法,首先將抗原吸附于載體表面，然后將酶標(biāo)記抗體與抗原反應(yīng)形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，最后加入底物產(chǎn)生有色物質(zhì)，進(jìn)行

20、光密度測(cè)定，計(jì)算出抗原存在量。,（b）間接ELISA檢測(cè)方法,首先將已知定量的抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加入待測(cè)抗體，溫浴過(guò)夜，或37保溫2h后，洗滌去未結(jié)合的雜蛋白，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌去未結(jié)合的酶標(biāo)抗抗體，加底物保溫30min后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。,（c）競(jìng)爭(zhēng)法（競(jìng)爭(zhēng)抑制法）,競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。,設(shè)立對(duì)照,（d）雙抗夾心法,首先將特異抗體的免疫球蛋白吸附在載體的表面，洗滌除去未吸附的抗體，加入含有抗原（多價(jià)）的待測(cè)溶液

21、，保溫形成抗原抗體復(fù)合物，洗滌除去雜蛋白，再加經(jīng)抗原免疫的第二種動(dòng)物獲得的特異抗體（酶標(biāo)抗抗體），經(jīng)再次保溫則可以形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，洗滌后加底物呈色，終止酶反應(yīng)，比色測(cè)定抗原量。 該法不能用來(lái)測(cè)定半抗原或低于二價(jià)的小分子抗原。,（3）化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè),化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是利用化學(xué)發(fā)光物標(biāo)記的免疫檢測(cè)技術(shù)。 分為二種類型：以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定的底物，通過(guò)發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定的敏感性；以發(fā)光劑作為抗體或抗原的標(biāo)記物，直接通過(guò)發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)標(biāo)本中抗原或抗體的含量。 它具有高靈敏度、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定性好、無(wú)

22、污染、儀器簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。 它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。,化學(xué)發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型（flash type）和輝光型（glow type）兩種。 閃光型發(fā)光時(shí)間很短，只有零點(diǎn)幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時(shí)間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時(shí)至更久。,三、現(xiàn)代免疫技術(shù),現(xiàn)代免疫技術(shù)的特征是免疫技術(shù)與生物化學(xué)、 材料學(xué)、酶學(xué)等相關(guān)技術(shù)交叉應(yīng)用，新興邊緣學(xué)科技術(shù)不斷涌現(xiàn)。,1. PCR-ELISA,原理：是在做PCR擴(kuò)增時(shí)應(yīng)用生物素（biotin）標(biāo)記的引物，這樣PCR的產(chǎn)物就可結(jié)合到親和素（avidin）包被的塑料板上，再用地高辛標(biāo)記的探針與PCR產(chǎn)

23、物雜交，然后就可以用抗地高辛的酶聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)。 特點(diǎn)：PCR-ELISA是用免疫學(xué)方法檢測(cè)PCR產(chǎn)物，這比常規(guī)用電泳方法及Southern blot要簡(jiǎn)便、省時(shí)，可同時(shí)處理大量標(biāo)本，便于自動(dòng)化。,2. 免疫膠體金技術(shù),免疫膠體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。 膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定膠體狀態(tài)，稱為膠體金。 1971年，F(xiàn)aulk 和Taytor將膠體金引人免疫化學(xué)，此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。,原理：主要利用金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。 特點(diǎn)：膠體金標(biāo)記技術(shù)由于標(biāo)