實(shí)驗(yàn)七-維生素C的定量測(cè)定-2-6-二氯酚靛酚法

1、維生素C的定量測(cè)定-2，6-二氯酚靛酚法,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理 三、器材儀器和主要試劑 四、實(shí)驗(yàn)操作 五、思考題,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?從食品原料等提取維生素C、脫色 2,6-二氯酚靛酚鈉(藍(lán)色)滴定、計(jì)算,二、實(shí)驗(yàn)原理,染料2,6二氯靛酚的顏色反應(yīng)表現(xiàn)兩種特性,一氧化還原狀態(tài),氧化態(tài)為深藍(lán)色,還原態(tài)變?yōu)闊o(wú)色;二介質(zhì)的酸度影響,在堿性溶液中呈深藍(lán)色,在酸性介質(zhì)中呈淺紅色。 用藍(lán)色的堿性染料標(biāo)準(zhǔn)溶液,對(duì)含維生素C的酸性浸出液進(jìn)行氧化還原滴定,染料被還原為無(wú)色,當(dāng)?shù)竭_(dá)滴定終點(diǎn)時(shí),多余的染料在酸性介質(zhì)中則表現(xiàn)為淺紅色,由染料用量計(jì)算樣品中還原型抗壞血酸的含量。,當(dāng)抗壞血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，

2、使滴定液呈淡紅色，即為終點(diǎn)。,VC 還原型,脫氫VC 氧化型,2,6-二氯酚靛酚 氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色),2,6-二氯酚靛酚 還原型(無(wú)色),三、器材儀器和主要試劑,偏磷酸:2%溶液(W/V)* , 鹽酸:2%溶液(W/V) 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2mg/ml):稱取50mg(準(zhǔn)確至0.1mg)抗壞血酸,溶于浸提劑 中并稀至250ml?，F(xiàn)配現(xiàn)用。 2,6二氯靛酚(2,6二氯靛酚吲哚酚鈉鹽)溶液:稱取碳酸氫鈉52mg溶解在200ml 熱蒸餾水中,然后稱取2,6二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氫鈉溶液中。冷卻定容至 250ml,過(guò)濾至棕色瓶?jī)?nèi),保存在冰箱中。每次使用前,用標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸標(biāo)定其滴

3、定度。,標(biāo)定,吸取1ml抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于50ml錐形瓶中,加入10ml浸提劑,搖勻,用2 ,6二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色15s不褪色為止。同時(shí),另取10ml浸提劑做空白試驗(yàn)。 滴定度(mg/ml)cv/V1V2 s每毫升2,6二氯靛酚溶液相當(dāng)于抗壞血酸的毫克數(shù); C抗壞血酸的濃度,mg/ml; V吸取抗壞血酸的體積, ml; V1滴定抗壞血酸溶液所用2,6二氯靛酚溶液的體積,ml; V2滴定空白所用2,6二氯靛酚溶液的體積,ml。 白陶土(或稱高嶺土),對(duì)維生素C無(wú)吸附性。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:0.088 mg/ml,四、實(shí)驗(yàn)操作,1、提取: 桔子肉10克(獼猴桃或棗5克)于研缽 加2%HCl

4、約10ml 充分研磨 提取液通過(guò)兩層紗布濾入50ml容量瓶2%HCl定容到50ml 。 2、脫色:液干燥錐形瓶 加白陶土一匙(用于吸附生物樣品中的色素 )充分振搖（約10分鐘）過(guò)濾 脫色濾液。 3、滴定: 1）樣品滴定：取三角燒瓶?jī)芍?，各加脫色濾液10ml，用2,6-二氯酚靛酚鈉(藍(lán)色)滴定至出現(xiàn)微紅色并保持5秒鐘不褪色為止，記下二份樣品滴定所用的染液毫升數(shù)（滴定過(guò)程宜迅速，不超過(guò)2分鐘），取其平均值-VA； 2）空白滴定用10ml 2%HCl代替脫色濾液，2,6-二氯酚靛酚鈉(藍(lán)色)滴定至出現(xiàn)微紅色并保持5秒鐘不褪色為止，記下滴定所用的染液毫升數(shù)-VB；,計(jì)算,維生素（mg/100g）樣品（

5、VA-VB） SV100/WD 式中： VA：滴定樣品用去2,6-二氯酚靛酚鈉的平均ml數(shù) VB：滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚鈉的ml數(shù) S：每毫升2,6-二氯酚靛酚鈉溶液相當(dāng)于維生素的mg數(shù) V：樣品提取液總毫升（定容后的ml數(shù),50或100 ml ） D：滴定時(shí)所取的樣品提取液ml數(shù)(10 ml) W：樣品的重量（g）,1、為了測(cè)得準(zhǔn)確的維生素C濃度，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意哪些操作步驟？為什么？,（1）在操作過(guò)程中某些步驟一定要快，避免Vc的氧化，因?yàn)閂c具有還原性，還要向樣品中加入草酸溶液，保護(hù)Vc； (2)對(duì)于Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液要現(xiàn)用現(xiàn)配，盡量精確，避免Vc氧化，避免因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)溶液的誤差造成的誤差； (3) 整個(gè)操作過(guò)程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過(guò)程一般不超過(guò)2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1ml或多于4ml，如果樣品含維生素C太高或太低時(shí)，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。