急性大鼠心肌梗死實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽?ppt

1、大鼠心肌梗死實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽?背景,有關(guān)心肌梗死模型的制作，國內(nèi)外采用結(jié)扎、藥物、冷凍、栓塞、電凝等方法制作兔、大鼠、狗等不同動(dòng)物的心肌梗死模型，但大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為結(jié)扎法復(fù)制的心肌梗死模型與心肌梗死實(shí)際發(fā)病過程更符合。 由于臨床大多心肌缺血或心肌梗死都是一漸進(jìn)性過程，會(huì)不斷發(fā)生缺血或梗死后再灌現(xiàn)象。而冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法能人為地仿造臨床心肌梗死過程的冠狀動(dòng)脈梗死，其梗死部位、分布范圍相對(duì)一致，病理生理、生化改變與臨床心肌梗死更相似。 綜上所述,結(jié)合實(shí)際操作條件,選用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎的方法,以建立穩(wěn)定的、適于細(xì)胞移植治療心肌梗死的大鼠動(dòng)物模型。,建模原理,生物體各組織器官要維持其正常的生命活動(dòng)，需要心

2、臟不停地搏動(dòng)以保證血運(yùn)。而心臟作為一個(gè)泵血的肌性動(dòng)力器官，本身也需要足夠的營養(yǎng)和能源，供給心臟營養(yǎng)的血管系統(tǒng)，就是冠狀動(dòng)脈和靜脈，也稱冠脈循環(huán)。冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部,行于心臟表面。冠狀靜脈伴隨 冠狀動(dòng)脈收集代謝后的靜脈血，歸流于冠狀靜脈竇，回到右心房。正常情況下，冠狀動(dòng)脈 之間，尚有豐富的吻合支或側(cè)支。冠狀動(dòng)脈雖小，但血流量很大。占心排血量的5%，這就保證了心臟有足夠的營養(yǎng)，維持它有力地晝夜不停地跳動(dòng)。如果冠狀動(dòng)脈突然阻塞，不能很快建立側(cè)支循環(huán)，常常導(dǎo)致心肌梗塞。但若冠狀動(dòng)脈阻塞是緩慢形 成的，則側(cè)支可逐漸擴(kuò)張，并可建立新的側(cè)支循環(huán)，起代償?shù)淖饔?。左冠狀?dòng)脈為最大冠狀動(dòng)

3、脈分支.主要供應(yīng)左心室前壁和側(cè)壁，其主要分支是左前降支和左回旋支.選用結(jié)扎鼠左冠狀動(dòng)脈前降支中上13處結(jié)扎的方法,冠狀動(dòng)脈突然阻塞，側(cè)支循環(huán)不及起代償?shù)淖饔?以建立穩(wěn)定的、適于細(xì)胞移植治療心肌梗死.,1 實(shí)驗(yàn)步驟和觀察項(xiàng)目,1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性Wistar大鼠30只,體質(zhì)量250 25 g制作心肌梗死動(dòng)物模型的大鼠體重以200 250 g為宜（動(dòng)物太小，不利于操作，耐受創(chuàng)傷能力低；而體重及鼠齡太大，則不利術(shù)后觀察生存期，而且麻醉劑量不好掌握，凝血功能較差，不易止血。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。）,1. 2 試驗(yàn)材料和藥品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、小動(dòng)物呼吸機(jī)、心

4、電圖機(jī)、大白鼠手術(shù)板、5ml注射器2個(gè)、7號(hào)或4號(hào)針頭、眼科剪、手術(shù)燈、眼科開瞼器、小鑷子、小彎鉗、縫針、縫合線(6 - 0線)、小無菌棉簽 1.3 麻醉 SD大鼠稱重(兩只Wistar大鼠體重各為290g及360g), 號(hào)鼠腹腔注射烏拉坦1.45ml號(hào)鼠腹腔注射 10%水合氯醛1ml。,1. 4氣管插管 大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上。沿頸部中線切開皮膚，分離組織暴露氣管，用7號(hào)注射針頭做為插管以45度斜進(jìn)針從甲狀軟骨下緣輕輕水平插入約0.71.5cm 斜面朝上。固定好,氣管插管，呼吸比為1：2，呼吸頻率90次rain，潮氣量14 mlkg。關(guān)閉呼吸機(jī)，四肢接心電圖機(jī)記錄術(shù)前心電圖。完畢打開呼吸機(jī)，

5、 (此時(shí)作心電圖與開胸后結(jié)扎前心電圖對(duì)照,驗(yàn)證是否為先天變異或?qū)嶒?yàn)前異常心電圖機(jī)未借到，所以心電圖未能做),甲狀軟骨下緣,1.5開胸及冠狀動(dòng)脈結(jié)扎 心前區(qū)域剃毛, 在心臟搏動(dòng)最明顯處,第三肋間隙水平開胸,皮膚切口約1. 52. 0 cm,逐層鈍性分離肌肉至胸膜。剪開胸膜,用眼科開瞼器撐開肋間肌切口,以無菌棉球向下壓迫左肺以保護(hù)肺臟剪開心包,用無菌棉簽推開左心耳。在左心耳下距主動(dòng)脈根部23 mm處,用6 - 0線穿過一小束心肌,并結(jié)扎。(1)結(jié)扎后左室壁變蒼白,并出現(xiàn)室壁運(yùn)動(dòng)減弱。(2)術(shù)中結(jié)扎成功標(biāo)識(shí):心電監(jiān)護(hù)見II導(dǎo)聯(lián)大鼠于結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后QRS波峰降低，J點(diǎn)上移，ST段明顯抬高.證明心肌缺血

6、存在心肌梗死（證明結(jié)扎成功，心電圖于結(jié)扎前與結(jié)扎后的心電圖改變,排除手術(shù)操作造成人為性大鼠心肌缺血） 。然后加大通氣量,充分使肺復(fù)漲,并清理胸腔。,左心耳,在左心耳下距主動(dòng)脈根部23 mm處可見一粉紅色細(xì)小血管,1.6 關(guān)胸及術(shù)后處理 逐層關(guān)胸, 斷開呼吸機(jī),清理呼吸道（拔出氣管插管后應(yīng)注意將大鼠舌頭外提，防止舌根后墜出現(xiàn)缺氧窒息）并觀察大鼠呼吸，以淺快呼吸，頻率3040次/min為宜。術(shù)后單籠飼養(yǎng)。 注:手術(shù)過程中大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后可能馬上出現(xiàn)心律失常，室性停搏或心室纖維顫動(dòng)，立即解除對(duì)心臟的擠壓或同時(shí)進(jìn)行心內(nèi)按壓可以使心臟恢復(fù)搏動(dòng)。,1.7 術(shù)后抗感染及護(hù)理 大鼠本身具有比較強(qiáng)的抗感染能力

7、，但是預(yù)防感染有利于促進(jìn)術(shù)后恢復(fù)，并且良好的術(shù)后護(hù)理可以提高動(dòng)物模型的生存率。因此，術(shù)前所用手術(shù)器械均要用75酒精浸泡消毒。術(shù)后腹腔注射青霉素80萬U。待大鼠麻醉清醒后即可與其糖水和飼料，無須禁食。術(shù)后可適量補(bǔ)充能量。冬天應(yīng)注意保噯。,2 檢測(cè)指標(biāo),2.1 術(shù)前和術(shù)中做的心電圖 2.2 組織病理學(xué)檢查 開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后1d、2d及3 d分批處死實(shí)驗(yàn)鼠。取其心臟，沿心臟縱軸剖開左右心室，用10福爾馬林溶液固定24 h，然后垂直于心臟縱軸從心尖部至心底部分別橫切4個(gè)切面，石蠟包埋，連續(xù)5 um厚度切片，HE染色，觀察左室壁心肌組織的病理變化，確定心肌梗死的存在。,3 結(jié)果討論,兩只實(shí)驗(yàn)鼠死亡原因討論： 號(hào)實(shí)驗(yàn)鼠在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈時(shí)心臟停止跳動(dòng)死亡號(hào)實(shí)驗(yàn)鼠在關(guān)閉胸腔時(shí)呼吸停止死亡 考慮以下可能原因： . 鼠齡過大，適應(yīng)手術(shù)能力較適齡鼠差，多篇文獻(xiàn)提出實(shí)驗(yàn)鼠體重以250 25 g 為宜，本次實(shí)驗(yàn)鼠體重分別為 290g及360g;,. 實(shí)驗(yàn)鼠體重較實(shí)驗(yàn)前預(yù)期的要重，麻醉劑有使用過量的可能，實(shí)驗(yàn)鼠術(shù)中出現(xiàn)呼吸抑制； . 開瞼器撐開術(shù)口壓迫肺臟時(shí)間過長(zhǎng)，可能存在氣胸肺不張?jiān)斐蓪?shí)驗(yàn)鼠缺氧； . 壓迫心臟時(shí)造成大血管移位扭轉(zhuǎn)，重要臟器供血不足； .術(shù)中失血過多，造成血壓下降，失血性休克；,. 結(jié)扎冠狀動(dòng)脈時(shí)部位未掌握好，結(jié)扎部位過高（結(jié)