《微量分光光度計(jì)》PPT課件.ppt

1、NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì),內(nèi)容簡(jiǎn)介,一. NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì) (1)儀器描述及規(guī)格 (2)檢測(cè)原理及優(yōu)點(diǎn) 二.軟件 (1)使用前準(zhǔn)備工作及軟件操作界面介紹 三.應(yīng)用,NanoDrop 2000分光光度計(jì)可以檢測(cè)0.5-2ul 的樣本，而且檢測(cè)是非常高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。樣本保留系統(tǒng)應(yīng)用了表面張力來(lái)把樣本保留在兩根檢測(cè)光纖中間，這使得儀器可以檢測(cè)較高濃度的樣本而不用稀釋。應(yīng)用這個(gè)技術(shù)，NanoDrop 2000分光光度計(jì)檢測(cè)樣本的最高濃度是標(biāo)準(zhǔn)比色皿的200 倍。,樣品臂,檢測(cè)基座,一. NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì),(1)儀器描述,儀器類型

2、： 分光光度計(jì) 最小樣品量： 0.5ul 波長(zhǎng)： 1mm（可以自動(dòng)調(diào)整到0.05mm） 光源： 氙閃爍燈 檢測(cè)器類型： 2048象素線型硅CCD陣列 波長(zhǎng)范圍： 190840nm 波長(zhǎng)準(zhǔn)確性： 1 nm 光譜分辨率： 1.8nm 吸收光精確性： 0.002吸光值（1mm光程） 吸收光準(zhǔn)確性： 2（257nm波長(zhǎng)下，0.76個(gè)吸光值） 吸光值范圍： 0.02300（等同于10mm光程時(shí)） 檢測(cè)極限： 2ng/ul dsDNA 最大檢測(cè)濃度： 15,000ng/ul（dsDNA） 檢測(cè)時(shí)間： 5秒 儀器占地面積; 14cm20cm 重量： 2kg 樣本基座材料： 303不銹鋼以及石英光纖 工作電壓

3、; 12V 工作功率; 1218W（最大30W） 軟件兼容性; Windows XP 和Vista（32bit,儀器規(guī)格,(2)檢測(cè)原理,利用表面張力保持樣本形態(tài)的專利技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。只需使用加樣器將1ul的樣品直接加在檢測(cè)表面上，而無(wú)需其他容器或檢測(cè)裝置。使用兩根光纖將樣本拉開(kāi)，形成固定光程的檢測(cè)通路，自動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)。,優(yōu)點(diǎn),1.檢測(cè)所需樣微量，0.5-2ul，可以節(jié)省辛苦得到的樣品 2.檢測(cè)范圍寬，比傳統(tǒng)的分光光度計(jì)的上限高200倍，吸光度0.02-300，對(duì)于多數(shù)樣品而言，無(wú)需稀釋 3.無(wú)需檢測(cè)容器，日常消耗低，直接將樣品加在檢測(cè)面上，檢測(cè)完以后把檢測(cè)表面擦干凈即可，保證樣品間無(wú)交叉污染，也

4、不干擾后續(xù)檢測(cè) 4.全波長(zhǎng)190-840nm，分辨率1nm，對(duì)于任何一個(gè)樣品的測(cè)量，儀器都自動(dòng)給出全波長(zhǎng)的掃描結(jié)果190-840nm 5.使用方便快速，1個(gè)樣品只需5秒 6.無(wú)需預(yù)熱，直接測(cè)量,二.軟件,(1)在使用儀器進(jìn)行樣品檢測(cè)前，需要使用USB連接線把儀器和電腦相連，把12V的電源線接到儀器背面的插口上，并連接電源。,任務(wù)欄,工具欄,功能選擇,使用NanoDrop 2000/2000c分光光度計(jì)可以方便的使用微量樣品進(jìn)行紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)。NanoDrop 2000可以應(yīng)用于如下檢測(cè)：,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,1.核酸的濃度和質(zhì)量 2.篩選有效的熒光標(biāo)記雜交探針 3

5、.功能同普通的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 4.檢測(cè)細(xì)胞懸液的光散射 5.蛋白定量 6.蛋白定量(主要檢測(cè)還有還原劑或去污劑的總蛋白含量) 7.檢測(cè)非純蛋白的濃度 8.蛋白的濃度和熒光染料的濃度 9.蛋白A280檢測(cè) 10.編輯新程序 11.蛋白定量(區(qū)別于5，測(cè)試濃度較低),例：核酸,Sample ID-輸出樣品名稱 Type-DNA-50做dsDNA檢測(cè)，RNA-40做RNA檢測(cè)，ssDNA-33做單鏈DNA Conc-結(jié)果 A260顯示10mm光程下的260nm處的吸光值 A280顯示10mm光程下的280nm處的吸光值。 260/280260nm和280nm處的吸光值的比值（DNA1.8RNA

6、2.0）,核酸濃度檢測(cè) 1 在主菜單中選擇核酸模式，如果顯示波長(zhǎng)校準(zhǔn)窗口，放 下基座臂點(diǎn)擊OK。 2 選擇檢測(cè)的樣品類型，默認(rèn)的設(shè)定為DNA-50。 3 選擇濃度單位，默認(rèn)的為ng/ul。 4 默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，重新選擇一個(gè)校準(zhǔn)波長(zhǎng)或者 去選擇Baseline來(lái)不選擇校準(zhǔn)波長(zhǎng)。 5 選擇Add to Report自動(dòng)把檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中 去，默認(rèn)設(shè)置是把每個(gè)樣品都添加到報(bào)告中。要把樣 品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，在檢測(cè)前必須選上Add to report。 6選擇Overlay spectra可以在同一時(shí)間顯示多個(gè)光譜。 7使用合適的液體建立空白對(duì)照，空白對(duì)照液體是溶解目標(biāo)分子的液體?？瞻讓?duì)照液體的pH值和離子濃度應(yīng)和檢測(cè)樣品一樣。,注意： 1.每次檢測(cè)的樣品都必須是新加的。 2.使用干凈的無(wú)塵紙擦干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)了。,Oligo Calc 用來(lái)計(jì)算特定核酸序列的分子量，消光系數(shù)，濃度因子 要使用Oligo Calc： 1.使用如下方法來(lái)輸入一個(gè)堿基序列： 使用堿基序列顯示框下的按鍵。鍵盤（僅僅能使用A，C，G，T，和U來(lái)輸入堿基）復(fù)制和粘貼一個(gè)序列到顯示框（僅僅能使用A，C，G，T，和U來(lái)輸入堿基）清除堿基序列框中的序列，點(diǎn)擊序列框右側(cè)的Clear鍵，單個(gè)可以手動(dòng)來(lái)刪除。 2.選擇磷酸化程度，可以選擇：DNA單磷酸化，RN