實(shí)驗(yàn)九 土壤微生物的分離與計(jì)數(shù).ppt

1、實(shí)驗(yàn)九 土壤微生物的分離與計(jì)數(shù) 涂布平板法,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)利用平板分離法從土壤分離微生物的基 本操作。 2、掌握微生物平板計(jì)數(shù)的方法。,二、實(shí)驗(yàn)原理,土壤是微生物生活的大本營 根據(jù)某微生物的生長條件（營養(yǎng)，酸堿度，溫度，氧氣等）而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑造成只利于該菌生長，而抑制其他菌生長；用稀釋涂布平板法獲得單菌落（并不能絕對保證是純培養(yǎng)，需要結(jié)合觀察其菌落特征、個(gè)體特征，進(jìn)一步分離純化）。,樣品充分混勻；,同一稀釋度三個(gè)以上重復(fù)， 取平均值；,每個(gè)平板上的菌落數(shù)目合適， 便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。,一般用菌落形成單位（colony forming units， CFU）來表示 原

2、樣品中的細(xì)胞數(shù)。,三、實(shí)驗(yàn)材料,1、土樣：選擇某一生境土壤，去表層土，挖520cm深度 的土壤數(shù)10g，裝入已滅菌的牛皮紙袋。 2、培養(yǎng)基: 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：細(xì)菌 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏1號）：放線菌每300ml培養(yǎng)基加入1ml3%的重鉻酸鉀抑制細(xì)菌和霉菌生長 馬丁氏培養(yǎng)基：真菌孟加拉紅抑制細(xì)菌和放線菌,1、倒平板 2、土壤菌懸液的制備,四、實(shí)驗(yàn)方法,10g土樣 + 90ml無菌水 振蕩20min,3、梯度稀釋 取1ml土壤菌懸液移入含9ml無菌水的試管中，吹吸均勻，為稀釋10倍的樣品，依次進(jìn)行梯度稀釋10-110-6,4、涂布：取0.1ml適當(dāng)濃度的稀釋液涂布于相應(yīng)平板，每個(gè) 稀釋度做3個(gè)平行，每種菌需要做9塊平板，及時(shí) 標(biāo)記，涂布后靜置10分鐘。,5、培養(yǎng) 將細(xì)菌、真菌、放線菌培養(yǎng)基倒置于30培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5d。 6、計(jì)數(shù) 7、挑菌（純化） 將培養(yǎng)后長出的單菌落數(shù)量、形態(tài)、培養(yǎng)特征進(jìn)行觀察，分別挑取單菌落于相應(yīng)平板上劃線、分離， 培養(yǎng)，檢查菌落是否一致、單純（也可以用顯微鏡涂片染色鏡檢是否是單一的微生物），如有雜菌需進(jìn)一步純化、分離。,每毫升菌落形成單位同一稀釋度的三次重復(fù)平均數(shù)稀釋倍數(shù) 5,平板計(jì)數(shù),五、思考題,1、記錄利用稀釋涂布法對土壤樣品進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)的結(jié)果。,每克含菌樣品中細(xì)