生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價征求意見稿編制說明.doc

生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范編 制 說 明（征求意見稿）生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范國家標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組二一九年一月目 錄一、任務(wù)來源1二、目的和意義1三、標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)和原則2四、 標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容3五、主要工作過程3六、與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系4七、標(biāo)準(zhǔn)屬性的建議4八、貫徹國家標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議5生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范國家標(biāo)準(zhǔn)編 制 說 明 （征求意見稿）一、任務(wù)來源本國家標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)列入國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會國家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于下達2018年第二批國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃的通知（國標(biāo)委綜合201841號），項目編號“20182187-T-424”。 本項任務(wù)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口，定于2019年完成。本標(biāo)準(zhǔn)由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位共同完成。二、目的和意義目前，雜環(huán)類農(nóng)藥在中國被大量生產(chǎn)和廣泛使用，由此引發(fā)的水污染、植物性產(chǎn)品污染和食品污染等日益嚴(yán)重。為了解決此類問題，科學(xué)界已經(jīng)研究了許多降解雜環(huán)類農(nóng)藥的方法，以去除環(huán)境中的污染和產(chǎn)品中的殘留。其中，用于降解雜環(huán)類農(nóng)藥的生物產(chǎn)品，包括酶制劑產(chǎn)品和微生物制劑產(chǎn)品已被初步商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。然而迄今為止，中國尚未制訂相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，使得該類產(chǎn)品的相關(guān)管理部門和使用者無法對其降解功效做出客觀評價。本標(biāo)準(zhǔn)的制訂目的和意義即在于此，建立生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范，為該類產(chǎn)品的監(jiān)管和使用提供依據(jù)。國內(nèi)外已有一些雜環(huán)類農(nóng)藥的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)：GB 21523-2008 雜環(huán)類農(nóng)藥工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)；SN/T 1591-2005 進出口茶葉中9種有機雜環(huán)類農(nóng)藥殘留量的檢驗方法；SN/T 1972-2007 進出口食品中莠去津殘留量的檢測方法 氣相色譜-質(zhì)譜法；SN/T 1605-2005 進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵蜱、利谷隆殘留量檢驗方法 高效液相色譜法，但是對于酶制劑和菌劑降解雜環(huán)類農(nóng)藥的功效，尚無評價技術(shù)規(guī)范。三、標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)和原則（一）標(biāo)準(zhǔn)制定原則1、實用性原則本標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范的規(guī)定，是在充分調(diào)研了我國雜環(huán)類農(nóng)藥目前的實用情況，目前一些毒性大的雜環(huán)類農(nóng)藥已被禁用，但一些低毒的仍在的使用，另外瓜果蔬菜中農(nóng)藥超標(biāo)，農(nóng)藥違禁使用也經(jīng)常發(fā)生。通過收集相關(guān)資料和文獻，分析了我國雜環(huán)類農(nóng)藥水解酶和降解菌的研究和使用情況，并對一些酶制劑和降解菌的生產(chǎn)廠家和企業(yè)進行走訪了解，在此基礎(chǔ)上進行的標(biāo)準(zhǔn)編寫。因此本標(biāo)準(zhǔn)即符合我國目前的實際情況，同時也兼具先進性和可操作性。2、協(xié)調(diào)性原則本標(biāo)準(zhǔn)編寫過程中注意了降解雜環(huán)類農(nóng)藥的生物產(chǎn)品領(lǐng)域相關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)問題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。目前與制訂該標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的法律法規(guī)和強制性標(biāo)準(zhǔn)：GB 21523-2008 雜環(huán)類農(nóng)藥工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)為本標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供了主要雜環(huán)類農(nóng)藥定量檢測方法的參考，從而衡量生物產(chǎn)品處理前后的濃度變化，以此計算降解效率。3、前瞻性原則本標(biāo)準(zhǔn)在兼顧當(dāng)前我國雜環(huán)類降解生物產(chǎn)品的現(xiàn)實情況的同時，還考慮到了雜環(huán)類降解生物產(chǎn)品行業(yè)快速發(fā)展的趨勢和需要，在標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)了個別前瞻性條款，作為對行業(yè)發(fā)展的引導(dǎo)。（二）標(biāo)準(zhǔn)編制參考的依據(jù)1、標(biāo)準(zhǔn)編寫遵循GB/T1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則的有關(guān)要求。2、標(biāo)準(zhǔn)編寫內(nèi)容參考的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，包括：GB/T 6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。GB 21523-2008 雜環(huán)類農(nóng)藥工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1591-2005 進出口茶葉中9種有機雜環(huán)類農(nóng)藥殘留量的檢驗方法SN/T 1972-2007 進出口食品中莠去津殘留量的檢驗方法 氣相色譜-質(zhì)譜法SN/T 1605-2005 進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵蜱、利谷隆殘留量檢驗方法 高效液相色譜法GB/T 6682 分析實驗室用水和試驗方法GB/T 15818 培養(yǎng)基配制方法3、法律、法規(guī)及文件中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法實施條例國家標(biāo)準(zhǔn)化體系建設(shè)發(fā)展規(guī)劃（20162020年）深化標(biāo)準(zhǔn)化工作改革方案“十三五”生物技術(shù)創(chuàng)新專項規(guī)劃生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃“十三五”技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)科技創(chuàng)新規(guī)劃國家創(chuàng)新驅(qū)動發(fā)展戰(zhàn)略綱要國家中長期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（20062020年）“十三五”國家科技創(chuàng)新規(guī)劃4、 標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容1、最佳反應(yīng)條件確定微生物產(chǎn)品和酶生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥的物質(zhì)基礎(chǔ)是酶，其反應(yīng)本質(zhì)是酶促反應(yīng)。酶促反應(yīng)又稱酶催化，指的是由酶作為催化劑進行催化的化學(xué)反應(yīng)。而反應(yīng)溫度、反應(yīng)體系pH值、酶的濃度、底物濃度、酶的抑制劑、酶的激活劑、反應(yīng)產(chǎn)物等影響因素對酶促反應(yīng)效果具有很大影響。底物濃度的改變，對酶反應(yīng)速度的影響比較復(fù)雜。在一定的酶濃度下，當(dāng)?shù)孜餄舛容^低時（底物濃度從0逐漸增高），反應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系呈正比關(guān)系；隨著底物濃度的增加，反應(yīng)速度不再按正比升高；如果再繼續(xù)加大底物濃度，反應(yīng)速度卻不再上升，趨向一個極限。pH對酶促反應(yīng)速度的影響。酶反應(yīng)體系的pH可影響酶分子特別是活性中心上必需基團的解離程度和催化基團中質(zhì)子供體或質(zhì)子受體所需的離子化狀態(tài)，也可影響底物和輔酶的解離程度，從而影響酶與底物的結(jié)合。只有在特定的pH條件下，酶、底物和輔酶的解離情況，最適宜于它們互相結(jié)合，并發(fā)生催化作用，使酶促反應(yīng)速度達最大值，這種pH值稱為酶的最適pH?；瘜W(xué)反應(yīng)的速度隨溫度增高而加快，但酶是蛋白質(zhì)，可隨溫度的升高而變性。在溫度較低時，前一影響較大，反應(yīng)速度隨溫度升高而加快。但溫度超過一定范圍后，酶受熱變性的因素占優(yōu)勢，反應(yīng)速度反而隨溫度上升而減慢。常將酶促反應(yīng)速度最大的某一溫度范圍，稱為酶的最適溫度。不同的微生物產(chǎn)品和酶生物產(chǎn)品的作用于雜環(huán)類農(nóng)藥降解反應(yīng)時，依據(jù)不同的特性，其最適pH、最適溫度和底物（微生物產(chǎn)品和酶產(chǎn)品）濃度也不同，也就是說，不同微生物產(chǎn)品和酶生物產(chǎn)品的最佳反應(yīng)條件也不同。為了使本標(biāo)準(zhǔn)中待測微生物產(chǎn)品和酶生物產(chǎn)品均能在其最佳反應(yīng)條件下進行酶降解反應(yīng)，在正式試驗前，設(shè)計正交試驗，對待測物微生物和酶生物產(chǎn)品的最佳反應(yīng)條件進行確定。正交試驗中因素宜選擇反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH、微生物菌量或酶用量、反應(yīng)時間、反應(yīng)轉(zhuǎn)速（微生物生長的通氣量要求）等，確定最佳反應(yīng)條件。2、試樣制備一般來說市場上微生物產(chǎn)品有可能為固體顆粒狀，為保證微生物產(chǎn)品能夠均勻分散在液體基礎(chǔ)營養(yǎng)液中，宜先將微生物產(chǎn)品研磨粉碎。3、對照樣品設(shè)置本標(biāo)準(zhǔn)考慮到微生物和酶生物產(chǎn)品中可能有其他因素降解雜環(huán)類農(nóng)藥，因此，同時設(shè)置失活樣品組和空白樣品組?？瞻讟悠方M中不添加微生物和酶生物產(chǎn)品，失活樣品組中先將待測微生物產(chǎn)品和酶產(chǎn)品進行滅活處理。對于微生物產(chǎn)品，多數(shù)細(xì)菌、酵母菌和霉菌的營養(yǎng)細(xì)胞在50-60加熱10min即可殺死，酵母和霉菌的孢子需要溫度高一些，要80-9030min，但是，細(xì)菌的芽孢耐熱性極高。不同的滅菌方式的效果也不同，濕熱滅菌的殺菌溫度比干熱滅菌溫度要低，濕熱滅菌12130min就可以殺死全部菌，但干熱滅菌需要提高到140以上，而且時間也要大約2小時才有能殺死包括芽孢在內(nèi)的所有微生物。參照標(biāo)準(zhǔn)實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測（GB/T 27405）附錄D中廢棄物滅菌處理，要求121高壓滅菌至少30min。故本標(biāo)準(zhǔn)采用濕熱滅菌的方式，將微生物產(chǎn)品濕熱滅菌121 30min。酶是一種活性蛋白質(zhì)，凡能影響蛋白質(zhì)的理化因素都能影響酶的活性。因此，一切對蛋白質(zhì)活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性，受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。溫度、酸堿度、重金屬離子都能影響酶的活性。高溫、強酸、強堿等因素均可引起酶喪失催化能力。在高溫或者pH過高或者過低的時候變性，失去生物催化作用，而低溫的時候酶也會失去活性，但是可以恢復(fù)。各種酶在最適溫度范圍內(nèi)，酶活性最強，酶促反應(yīng)速度最大。在適宜的溫度范圍內(nèi)，溫度每升高10，酶促反應(yīng)速度可以相應(yīng)提高12倍。不同生物體內(nèi)酶的最適溫度不同。過高或過低的溫度都會降低酶的催化效率，即降低酶促反應(yīng)速度。最適溫度在60以下的酶，當(dāng)溫度達到6080時，大部分酶被破壞，發(fā)生不可逆變性；當(dāng)溫度接近100時，酶的催化作用完全喪失。本標(biāo)準(zhǔn)中采用加熱的方式使酶失活變性，為保證效果，加熱15min。4、培養(yǎng)基的確定本標(biāo)準(zhǔn)中需要將微生物產(chǎn)品加入到培養(yǎng)基中，但微生物產(chǎn)品中可能為細(xì)菌、酵母菌或霉菌的單一種類產(chǎn)品，也可能是多種菌種的混合產(chǎn)品，故無法確定某一種培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基溶液。依據(jù)調(diào)研的文獻資料顯示，本標(biāo)準(zhǔn)中按照GB/T 15818中方法配制，可基本滿足微生物的生長營養(yǎng)需求。另外，依據(jù)不同企業(yè)微生物產(chǎn)品的特殊性質(zhì)，可根據(jù)其特殊生長需要對培養(yǎng)基進行改良。5、農(nóng)藥底物種類的確定雜環(huán)類農(nóng)藥種類繁多，但是化學(xué)結(jié)構(gòu)共性很低。酶或微生物產(chǎn)品對其降解的機理各不相同，而且，不同的雜環(huán)類農(nóng)藥，其降解酶或降解微生物產(chǎn)品的研究和開發(fā)現(xiàn)狀也相差很大。因此，本標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合各種常見雜環(huán)類農(nóng)藥的降解酶或微生物產(chǎn)品的研究與開發(fā)現(xiàn)狀，選擇了6種雜環(huán)類農(nóng)藥莠去津、氯苯嘧啶醇、腐霉利、吡蟲啉、多菌靈和百草枯進行降解功效的評價。五、主要工作過程1、組成標(biāo)準(zhǔn)起草小組標(biāo)準(zhǔn)制定任務(wù)下達后，2018年6月，組成了標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，明確了任務(wù)要求，安排了工作進度，成立了標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組，會議研究討論了目前我國雜環(huán)類農(nóng)藥的應(yīng)用現(xiàn)狀，國內(nèi)外雜環(huán)類農(nóng)藥降解酶和降解菌的研究現(xiàn)狀，以及我國酶制劑產(chǎn)品和微生物類降解菌產(chǎn)品的生產(chǎn)和使用情況。明確了生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥試驗的技術(shù)路線、以及雜環(huán)類農(nóng)藥降解性生物產(chǎn)品相關(guān)政策文件及標(biāo)準(zhǔn)，明確了目標(biāo)和內(nèi)容，依據(jù)單位參與的人員的專業(yè)、技能、人數(shù)將任務(wù)合理分配。2、開展相關(guān)調(diào)研情況為了更好地制定本標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)制定工作的需求，項目組對生產(chǎn)農(nóng)藥降解酶制劑和微生物制劑的相關(guān)企業(yè)進行了走訪和調(diào)研，發(fā)現(xiàn)我國在生物產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評價體系方面存在空白，降解效果沒有統(tǒng)一的評價標(biāo)準(zhǔn)，不同廠家產(chǎn)品的降解效果無法進行對比，無法對市場上同類產(chǎn)品進行有效監(jiān)管。3、標(biāo)準(zhǔn)起草完善過程依據(jù)GB/T 1.12000標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則、GB/T 1.22002標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第2部分：標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)范性技術(shù)要素內(nèi)容的確定方法等標(biāo)準(zhǔn)編制要求，對生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)開展了研制工作，本標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組完成了生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范國家標(biāo)準(zhǔn)（草案）。2016年7月至2017年3月，標(biāo)準(zhǔn)起草單位組織相關(guān)技術(shù)人員對生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)項目進行了預(yù)研，初步建立了生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥的降解體系和檢測方法。2017年4月1日提交了項目建議書以及國家標(biāo)準(zhǔn)草案，進行申報立項。2018年6月26日國標(biāo)委綜合201841號文國家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于下達2018年第二批國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃的通知立項，項目編號為“20182187-T-424”。2018年7月至9月，起草生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范國家標(biāo)準(zhǔn)（草案）2018年10月組織開展生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范研討會，討論并解決標(biāo)準(zhǔn)研制過程中出現(xiàn)的主要問題，包括關(guān)鍵技術(shù)、標(biāo)準(zhǔn)書寫規(guī)范、研制進度等。2018年10月至11月針對研討會上意見措施，完善標(biāo)準(zhǔn)草案。在此基礎(chǔ)