微生物實驗三學校公共環(huán)境微生物的分離與純化.ppt

實驗三 學校公共環(huán)境微生物的分離與純化,林標聲,實驗三 學校公共環(huán)境微生物的分離與純化,一、實驗目的 通過本實驗的學習，使學生掌握微生物的分離與純化的原理與方法，熟練掌握微生物的染色方法以及微生物的計數(shù)等基本技能，為今后微生物的遺傳、生理以及分子生物學等學習打下基礎。,二、實驗原理-空氣中微生物的發(fā)布,空氣中微生物的主要來源于土壤、水體表面、動植物、人體及生產活動、污水污物處理等，其組成濃度不穩(wěn)定，種類多樣，有細菌、真菌、病毒、噬菌體等?？諝馕⑸锸谴髿馕廴疚镏弧？諝馕⑸锿皆趹腋☆w粒物上，隨風飄蕩，可導致人類和動植物某些疾病的發(fā)生與傳播，且常與環(huán)境的其他污染物協(xié)同作用，致使環(huán)境惡化，空氣質量降低?？諝馕⑸锏臐舛仁窃u價空氣質量的重要指標之一。,實驗原理-空氣中微生物的發(fā)布,校園是學生集中生活學習的區(qū)域，采用微生物學方法，檢測校園空氣微生物的時空分布，可進一步了解校園空氣污染現(xiàn)狀，對于防止呼吸道疾病的傳播，保護學生身體健康具有重要的現(xiàn)實意義。 土壤、水樣、食品等,三、實驗器材,（一）主要儀器 高壓蒸汽滅菌鍋、生化培養(yǎng)箱、電子分析天平、干燥箱、顯微鏡、超凈工作臺 （二）主要試劑 牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、可溶性淀粉、KNO3、KH2P04、K2HP04.3H20、MgS04.7H20、FeS04. 7H20、K2HP04、蔗糖、葡萄糖、鏈霉素、孟加拉紅溶液、堿性美蘭染液、革蘭氏染色液、香柏油、二甲苯等,四、實驗方法和步驟,1. 培養(yǎng)基的配制（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基） 2. 選定采樣點（教學樓、宿舍、圖書館、食堂、體育館、操場等） 3. 不同采樣時間進行采樣（上午、中午、下午各1次），每次采樣時間分5分鐘、10分鐘、30分鐘（平皿暴露時間）采樣。 4. 采樣的平皿進行培養(yǎng) 5. 菌落計數(shù) 6. 菌落鑒別 7. 作出校園空氣微生物分布圖（數(shù)量、種類）,實驗設計方案,（1）空氣 將一個牛肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當時做實驗的實驗室，移去皿蓋，使瓊脂表面暴露在空氣中，5min后蓋上皿蓋 （2）超凈工作臺 將一個牛肉膏蛋白胨瓊脂平板放在超凈工作臺上，移去皿蓋，使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在超凈工作臺內的空氣中，15min后蓋上皿蓋,采樣空氣中細菌總數(shù)計算公式,空氣的細菌數(shù)= W* 1000/ (Q * T) 式中：W-平皿細菌數(shù)，Q-流量:L/min，T-采樣時間：min,實驗設計方案,（3）手指（洗手前與洗手后） A 分別在兩個瓊脂平板上標明洗手前、后，并用記號筆在皿底劃分三個區(qū)域 B 移去皿蓋，同組的三個人將未洗過的手指分別在三個區(qū)域的瓊脂平板表面輕輕的來回畫線。 C 用肥皂和刷子用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來回移動，蓋上皿蓋 （4）頭發(fā) 在揭開皿蓋的瓊脂平板上方，用手將頭發(fā)用力搖動數(shù)次，使細菌降落倒瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。,實驗設計方案,（3）土壤樣品 采集不同的土壤樣品，稱1g溶解于100mL的無菌生理鹽水中（0.85%NaCl），梯度稀釋，取0.2mL稀釋液涂布于含牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板中，37培養(yǎng)24h，計數(shù)。 （4）其他樣品 如魚丸、方便面調味料等，各取1g，搗碎后，溶于100mL的無菌生理鹽水，剩余操作同上 （5）水樣品微生物檢測：取100mL水檢測，其余步驟同上,0.9,0.1,0.9ml,分離純化基本流程,每克含菌樣品中微生物的活細胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU （同一稀釋度平板上菌落平均數(shù) 5稀釋倍數(shù)）/含菌樣品克數(shù),傾注平板,倒置培養(yǎng),培養(yǎng)的時候培養(yǎng)基會有水分蒸發(fā)上去的嘛，當水蒸氣累積到一定的程度會聚成水滴，倒流到培養(yǎng)中的細菌中，沖散菌體，不利于培養(yǎng)觀察。 倒置培養(yǎng)可以防止水蒸氣蒸發(fā),分離純化,純化（平板劃線法） 倒平板劃線培養(yǎng)挑菌落純種（純培養(yǎng)）,移接斜面 常用的接種方法 劃線接種 點接種 穿刺接種 涂布接種 液體接種 注射接種,平板劃線分離的方法 1.斜線法 2.曲線法 3.方格法 4.放射法 5.四格法,四、實驗結果,1. 空氣中微生物數(shù)量、性質（革蘭氏染 色）、分離保存 2. 頭發(fā)、手指等一些物品表面的微生物數(shù)量、性質（革蘭氏染 色） ，分離保存 3. 每g樣品中（土壤、水樣、食品）中的微生物數(shù)量、性質（革蘭氏染 色） 、分離保存。,思考題,1. 影響校園環(huán)境空氣中微生物分布的因素 有哪些？ 2、如何進一步改進本實驗？,實