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重點(diǎn)強(qiáng)化練731(2019青島檢測(cè))利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如下圖所示,下列敘述正確的是()A過(guò)程所需的逆轉(zhuǎn)錄酶可取自于抗農(nóng)藥馬拉硫磷小菜蛾的任一細(xì)胞B過(guò)程利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需使用耐高溫的解旋酶和引物對(duì)C過(guò)程常用Ca2處理大腸桿菌使其成為易于吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞D過(guò)程可利用抗原抗體雜交技術(shù)鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞2下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),使之更加符合人類(lèi)的需要B蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改變其結(jié)構(gòu)C蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生自然界中不存在的新型蛋白質(zhì)分子D蛋白質(zhì)工程與基因工程密不可分,又稱(chēng)為第二代基因工程3下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶的敘述正確的是()A用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個(gè)DNA分子中部,獲得一個(gè)目的基因時(shí),被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)B限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列越短,則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大CCATG和GGATCC序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的黏性末端堿基數(shù)不同D只有用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒,才能形成重組質(zhì)粒4(2018天津一中月考)限制酶是一種核酸切割酶,可辨識(shí)并切割DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶BamH、EcoR、Hind以及Bgl的識(shí)別序列。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位,其中哪兩種限制酶所切割出來(lái)的DNA片段末端可以互補(bǔ)黏合?其正確的末端互補(bǔ)序列為()ABamH和EcoR;末端互補(bǔ)序列AATTBBamH和Hind;末端互補(bǔ)序列GATCCEcoR和Hind;末端互補(bǔ)序列AATTDBamH和Bgl;末端互補(bǔ)序列GATC5干擾素是治療癌癥的重要藥物,它必須從血液中提取,每升人血中只能提取0.5g,所以?xún)r(jià)格昂貴。美國(guó)加利福尼亞的某生物制品公司用如下方法(如圖所示)生產(chǎn)干擾素。從上述方式中可以看出該公司生產(chǎn)干擾素運(yùn)用的方法是()A個(gè)體間的雜交B基因工程C蛋白質(zhì)工程D器官移植6北極比目魚(yú)中有抗凍基因,其編碼的抗凍蛋白具有1個(gè)由11個(gè)氨基酸組成的重復(fù)序列,該序列重復(fù)次數(shù)越多,抗凍能力越強(qiáng)。下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖,有關(guān)敘述正確的是()A過(guò)程獲取的目的基因,可用于基因工程和比目魚(yú)基因組測(cè)序B將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因,可能得不到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C過(guò)程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因,需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù),可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在與否及其是否表達(dá)7(2018天津六校高三聯(lián)考)繼在上海和安徽首次發(fā)現(xiàn)H7N9禽流感病例,我國(guó)多地出現(xiàn)禽流感疫情,為此某研究小組為了研制預(yù)防H7N9禽流感病毒的疫苗,開(kāi)展了前期研究工作,其簡(jiǎn)要的操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A過(guò)程不需使用Taq酶B步驟所依據(jù)的理論基礎(chǔ)之一是DNA分子結(jié)構(gòu)的相似性C步驟可將重組質(zhì)粒導(dǎo)入所有的大腸桿菌D檢驗(yàn)Q蛋白的免疫反應(yīng)特性,可用Q蛋白與患禽流感康復(fù)的雞的血清進(jìn)行抗原抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)8(2019北京質(zhì)檢)DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的正確操作步驟是()A制備雞血細(xì)胞液提取細(xì)胞核物質(zhì)溶解核內(nèi)的DNA析出并濾取DNA黏稠物DNA的再溶解提取較純凈的DNA鑒定DNAB制備雞血細(xì)胞液提取細(xì)胞核物質(zhì)溶解并析出DNADNA的再溶解提取較純凈的DNA鑒定DNAC制備雞血細(xì)胞液溶解DNA提取細(xì)胞核中的DNADNA的再溶解提取較純凈的DNADNA的鑒定D制備雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)提取液溶解DNA并析出提取較純凈的DNADNA的鑒定9(2018長(zhǎng)春普通高中高三一模)肺細(xì)胞中的let7基因表達(dá)減弱,癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng),會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá),發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)進(jìn)行過(guò)程時(shí),需用相關(guān)酶切開(kāi)載體以插入let7基因,該酶破壞的化學(xué)鍵是_。重組載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,該部位稱(chēng)為_(kāi),同時(shí),重組載體還應(yīng)有_,以驅(qū)動(dòng)自身復(fù)制以及_,以鑒別受體細(xì)胞是否含有目的基因。(2)進(jìn)行過(guò)程時(shí),當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到表面_時(shí),需用_酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞并進(jìn)行_后繼續(xù)培養(yǎng)。(3)研究發(fā)現(xiàn),let7基因影響癌基因RAS表達(dá)的機(jī)理如圖2所示。據(jù)圖分析,肺癌細(xì)胞增殖受到抑制,可能是由于細(xì)胞中_含量減少引起的,作出該假設(shè)的依據(jù)是_。10(2018德州高三期末)真核生物基因中通常含有內(nèi)含子,而原核生物基因中沒(méi)有,原核生物沒(méi)有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。下圖表示從基因文庫(kù)提取胰島素基因的過(guò)程?;卮鹣铝袉?wèn)題:(1)過(guò)程用到的酶為_(kāi),與基因組文庫(kù)中的基因相比,cDNA文庫(kù)中獲得的目的基因_(填“不含有”或“含有”)啟動(dòng)子。(2)過(guò)程的目的是_。(3)過(guò)程需將纖維素膜上的細(xì)菌_,釋放出DNA,再用32P標(biāo)記的_作為探針進(jìn)行雜交。依據(jù)雜交結(jié)果,應(yīng)選取培養(yǎng)基上_(填字母)菌落繼續(xù)培養(yǎng),才能獲得含有胰島素基因的受體菌。(4)與從基因組文庫(kù)獲取目的基因相比,圖示方法獲得的目的基因在受體菌中更容易表達(dá),原因是_。11(2019武漢一中模擬)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?,F(xiàn)有Msp、BamH、Mbo、Sma4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由_連接。(2)若用限制酶Sma完全切割圖1中的DNA片段,產(chǎn)生的末端是_末端,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為_(kāi)。(3)若圖1中虛線(xiàn)方框內(nèi)的堿基對(duì)被TA堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶Sma完全切割,產(chǎn)物中共有_種不同長(zhǎng)度的DNA片段。(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是_。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加_的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè),部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá),其最可能的原因是_。12絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因,可以合成一種抗TMV蛋白,葉片對(duì)TMV具有抗感染性。煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物,由于TMV的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草,主要流程如圖所示:(1)科學(xué)家首先從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA,然后合成目的基因。圖中過(guò)程表示_,獲得的DNA必須在兩側(cè)添加_和_。(2)過(guò)程構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí),必須使用_和_兩種工具酶。(3)由圖分析,在過(guò)程構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有卡那霉素抗性基因作為_(kāi),重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的方法是_。(4)在過(guò)程培養(yǎng)基中除含有卡那霉素及植物必需的各種營(yíng)養(yǎng)成分外,還必須添加_,以保證受體細(xì)胞能培養(yǎng)成再生植株。(5)過(guò)程可采取_的方法,檢測(cè)植株是否合成了抗TMV蛋白。在個(gè)體水平的鑒定過(guò)程中,可通過(guò)_的方法來(lái)確定植株是否具有抗性。答案精析1C2B由于基因決定蛋白質(zhì),因此,要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造,最終還必須通過(guò)改造基因來(lái)完成,而不是直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作,B項(xiàng)錯(cuò)誤。3B用限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子中部獲得一個(gè)目的基因時(shí),需剪切2次,被水解的磷酸二酯鍵有4個(gè),A項(xiàng)錯(cuò)誤;限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列越短,則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大,B項(xiàng)正確;CATG和GGATCC序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的黏性末端均有4個(gè)堿基,C項(xiàng)錯(cuò)誤;切割目的基因和載體并非只能用同一種限制性核酸內(nèi)切酶,如果用不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子所產(chǎn)生的末端也存在互補(bǔ)關(guān)系,則兩末端也可連接形成重組質(zhì)粒,D項(xiàng)錯(cuò)誤。4D5B從圖中可以看出整個(gè)過(guò)程為將人的淋巴細(xì)胞中控制干擾素合成的基因與質(zhì)粒結(jié)合后導(dǎo)入酵母菌,并從酵母菌產(chǎn)物中提取干擾素,這項(xiàng)技術(shù)為基因工程。6B7C步驟是人工以RNA為模板形成DNA的過(guò)程,為反轉(zhuǎn)錄,不需使用Taq酶,A項(xiàng)正確;步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建,所依據(jù)的理論基礎(chǔ)之一是DNA分子結(jié)構(gòu)的相似性,B項(xiàng)正確;步驟需用Ca2處理大腸桿菌,使其處于感受態(tài)之后,才能將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌,C項(xiàng)錯(cuò)誤;患禽流感康復(fù)的雞的血清中含有相應(yīng)的抗體,可以與Q蛋白進(jìn)行抗原抗體雜交,以此可以檢測(cè)Q蛋白的免疫反應(yīng)特性,D項(xiàng)正確。8AB項(xiàng)漏掉了DNA溶解前要過(guò)濾;C項(xiàng)提取細(xì)胞核中DNA敘述欠妥,應(yīng)是提取核物質(zhì),并且應(yīng)放在溶解DNA之前;D項(xiàng)敘述明顯有誤。9(1)磷酸二酯鍵啟動(dòng)子復(fù)制原點(diǎn)標(biāo)記基因(2)相互接觸胰蛋白(或膠原蛋白)分瓶(3)RAS蛋白據(jù)圖分析可知,RASmRNA和沒(méi)有翻譯功能的miRNA結(jié)合后能抑制RAS基因的翻譯,所以細(xì)胞中RAS蛋白質(zhì)的含量減少解析(1)過(guò)程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建,在該過(guò)程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割,以便于目的基因的插入,該酶切割的是DNA分子中的磷酸二酯鍵。重組載體上的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,復(fù)制原點(diǎn)可以啟動(dòng)載體的自我復(fù)制,標(biāo)記基因可以鑒別受體細(xì)胞是否含有目的基因。(2)過(guò)程表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞的過(guò)程,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),需用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞并進(jìn)行分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。(3)據(jù)圖2可知,let7基因影響RAS基因表達(dá)的機(jī)理是let7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RASmRNA結(jié)合,使RAS基因翻譯受到抑制,引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少,進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制。10(1)反轉(zhuǎn)錄酶不含有(2)使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并遺傳給后代,同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)并發(fā)揮作用(3)裂解目的基因(或胰島素基因)a(4)cDNA中不含有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄出的RNA不需要經(jīng)過(guò)加工,可直接作為合成蛋白質(zhì)的模板解析(1)據(jù)題圖分析可知,過(guò)程表示反轉(zhuǎn)錄過(guò)程,需要反轉(zhuǎn)錄酶的催化;該過(guò)程獲得cDNA為部分基因文庫(kù),由于其中目的基因是mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的,不含有啟動(dòng)子。(2)過(guò)程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建,目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并遺傳給后代,同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)并發(fā)揮作用。(3)過(guò)程需將纖維素膜上的細(xì)菌裂解,釋放出DNA,再用32P標(biāo)記的目的基因作為探針進(jìn)行雜交。依據(jù)雜交結(jié)果中雜交帶出現(xiàn)的位置可知,應(yīng)選取培養(yǎng)基上a菌落繼續(xù)培養(yǎng),才能獲得含有胰島素基因的受體菌。(4)圖示方法獲得的目的基因在受體菌中更容易表達(dá),是因?yàn)閏DNA中不含有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄出的RNA不需要經(jīng)過(guò)加工,可直接作為合成蛋白質(zhì)的模板。11(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖(2)平537bp、790bp、661bp(3)4(4)BamH抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接解析(1)一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個(gè)堿基之間是通過(guò)“脫氧核糖磷酸脫氧核糖”相連的。(2)由Sma的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)可見(jiàn),其切割后產(chǎn)生的是平末端,圖1中DNA片段有兩個(gè)Sma的識(shí)別序列,故切割后產(chǎn)生的產(chǎn)物長(zhǎng)度為537(5343)bp、790(79633)bp和661(6583)bp三種。(3)圖示方框內(nèi)發(fā)生堿基的替換后,形成的d基因失去了1個(gè)Sma的識(shí)別序列,故D基因、d基因用Sma完全切割后產(chǎn)物中除原有的3種長(zhǎng)度的DNA片段外,還增加一種(537790)bp的DNA片段。(4)目的基因的兩端都有BamH的識(shí)別序列,質(zhì)粒的抗生素A抗性基因上也有BamH的識(shí)別序列,故應(yīng)選用的限制酶是BamH,此時(shí)抗生素B抗性基因作為標(biāo)記基因,故篩選時(shí)培養(yǎng)基中要添加抗生素B。若重組質(zhì)粒已導(dǎo)入了受體細(xì)胞卻不能表達(dá),很可能是因?yàn)?
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