GB19192-2003隱形眼鏡護理液衛(wèi)生要求.pdf

I CS 1 1 . 0 4 0 . 7 0C 5 9巧8中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準 GB 1 91 9 2 - 2 0 0 3i d t I S O / D I S 1 1 9 8 0 : 1 9 9 6 I S O/ DI S 1 1 9 8 1 : 1 9 9 6隱形眼鏡護理液衛(wèi)生要求H y g i e n i c r e q u i r e m e n t f o r c o n t a c t l e ns c a r e s o l ut i o n2 0 0 3 - 0 6 - 1 3 發(fā)布2 0 0 4 - 0 2 - 0 1 實施身+ fP k M A f M) * w K A6-:ff & 5 & A L P 發(fā) “GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3前言 隱形眼鏡護理L伙. JI i. 生質量直接關系到配戴者的眼睛健康。根據(jù) 中華人民共和國傳染病防治法 、 中華人民共和國傳染病防治法實施辦法 和 消毒管理辦法 ， 特制定本標準。 本標準等同采用 I S O / D I S 1 1 9 8 1 : 1 9 9 6 與 I S O/ D I S 1 1 9 8 0 : 1 9 9 6 ， 并根據(jù)國際標準的基本原理、 試驗方法與評價標準， 選擇適應我國具體情況的技術要求、 試驗菌株與培養(yǎng)方法， 參照采用 I S O/ C D 1 4 7 2 9 :1 9 9 6 , I S O / C D 1 4 7 3 0 : 1 9 9 6 , I S O / DI S 1 3 2 1 2 : 1 9 9 6與I S O / D I S 1 4 5 3 4 : 1 9 9 6 e 本標準第四章( 對茄科鐮刀霉菌的消毒效果除外) 為強制性， 其余各章為推薦性。 本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口。 本標準由上海市疾病預防 控制中心負責起草， 蘇州中化藥品工業(yè)有限公司、 北京博士倫眼鏡護理產(chǎn)品有限公司、 眼力健制藥有限公司參加起草。 本標準主要起草人: 沈偉、 何靜芳、 仲偉鑒、 潘希和、 王彩娟、 桑蔚、 孫偉之。中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準隱形眼鏡護理液衛(wèi)生要求GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3H y g i e n i c r e q u i reme n t f o r c o n t a c t l e n s c a r e s o l u t i o ni d t I S O/ D I S 1 1 9 8 0: 1 9 9 6 I S O/ D I S 1 1 9 8 1 : 1 9 9 6范 圍 本標準規(guī)定了隱形眼鏡( 硬性鏡和/ 或軟性鏡) 護理液的定義、 技術要求、 試驗方法、 檢驗規(guī)則以及包裝、 標志與使用說明等要求。 本標準適用于隱形眼鏡專用護理液產(chǎn)品。2 引用標準 下列標準所包含的條文， 通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時， 所示版本均為有效。所有標準都會被修訂， 使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。 G B 1 5 9 7 9 -2 0 0 2 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準 I S O / D I S 1 1 9 8 0 : 1 9 9 6 光學儀器與光學器材隱形眼鏡及其護理產(chǎn)品 臨 床研究指導 I S O / D I S 1 1 9 8 1 : 1 9 9 6 光學儀器與光學器材 隱形眼鏡和隱形眼鏡護理產(chǎn)品 隱形眼鏡及 其護理產(chǎn)品物理相容性試驗方法 中華人民共和國藥典1 9 9 5 年版二部“ 澄清度檢查法” 與“ 無菌檢查法” 中華人民共和國衛(wèi)生部 消毒技術規(guī)范 ( 第三版) 第一分冊 實驗技術規(guī)范 ( 1 9 9 9 ) “ 消毒劑毒理 學實驗技術 ”定義 本標準采用下列定義。3 . 1 隱形眼鏡護理液c o n t a c t le n s c a r e s o l u t i o n 專用于隱形眼鏡護理的， 具有清潔、 消毒、 沖洗或保存鏡片， 中和清潔劑或消毒劑， 物理緩解( 如潤滑) 隱形眼鏡引起的眼部不適等功能的溶液或可配制成溶液使用的可溶性固態(tài)制劑， 包括使用時可直接或非直接接觸眼球的產(chǎn)品。 隱形眼鏡護理液可分單一功能型與多功能型。單一功能型隱形眼鏡護理液系僅具有上述一種功能的產(chǎn)品; 多功能型隱形眼鏡護理液系同時具有清潔、 消毒、 沖洗、 保存四種功能的產(chǎn)品。3 . 2 多次量產(chǎn)品 m u l t i d o s e p r o d u c t s 最小包裝容器內的護理液容量能使用一次以上的產(chǎn)品。3 . 3 一次量產(chǎn)品s i n g l e d o s e p r o d u c t s 最小包裝容器內的護理液容量只能使用一次的產(chǎn)品。3 . 4 清潔c l e a n i n g 去除蛋白質、 有機物、 污物等的處理。3 . 5消毒d i s i n f e c t i o n中華人民共和國國家質f監(jiān)督檢驗檢疫總局 2 0 0 3 - 0 6 - 1 3批準2 0 0 4 - 0 2 - 0 1 實施 1G B 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 殺滅或清除病原微生物使其達到無害化的處理。3 . 6 中和n e u t r a l i s a t i o n 消除消毒劑和/ 或抗微生物劑抑/ 殺菌活性的處理。3 . 7 有效成分 a c t i v e i n g r e d i e n t 產(chǎn)品中具有清潔、 消毒、 中和等功能的組分。3 . 8 拋棄日 期 d i s c a r d d a t e 多次量產(chǎn)品開封后的最長使用期限。3 . 9 有效期 v a l i d d a t e 自生產(chǎn)之 日起， 未開封的具有清潔、 消毒、 中和等功能的產(chǎn)品保持其上述功能的最長有效使用期限。3 . 1 0 保質期g u a r a n t e e d a t e 自生產(chǎn)之 日 起， 未開封的無上述功能的產(chǎn)品維持其最低有效成分含量的最長使用期限。4 技 術要求隱形眼鏡護理液技術要求應符合表 1 中的要求。 表 1 隱形眼鏡護理液技術要求項 目 名 稱要求適用理 化 性 能 外 觀澄 清 液 體液態(tài)成品原液與固態(tài)成品使用液p H6 . 5 7 . 8直接與眼接觸的產(chǎn)品原液或使用液滲透壓( mo s m / k g H2 O )2 6 0 - 3 4 0直接與眼接觸的產(chǎn)品原液或使用液有 效 成 分 含 量在標示含量范圍內所 有 產(chǎn) 品過氧化氫殘留量/ ( mg / k g H2 O )( 3 0以過氧化氫為有效成分的產(chǎn)品與鏡片的物理相容性用護理液處理前后， 鏡片的物理參數(shù) 應 一 致直接與鏡片接觸 的產(chǎn)品原液 或使用 液微 生 物 活菌計數(shù)/ ( c f u / g )_ 9 9 . 9 0綠 膿 桿 菌) 9 9 . 9 0白色 念 珠 菌) 9 0 . 0 0茄科鐮刀霉菌) 9 0 . 0 0安 全 性 急性經(jīng)口毒性5 0 0 0 mg / k g所 有 產(chǎn) 品致 突 變 試 驗無 致 突 變 性 或 遺 傳 毒 性G B 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3表 1 ( 完)項 目名 稱要求適用皮 膚 刺 激 無 刺 激 性直 接 與 眼 接 觸 的 產(chǎn) 品 原 液 或 使 用 液眼 刺 激無 刺 激 性皮 膚 變 態(tài) 反 應極 輕細胞 毒 性 “無 細 胞 毒 性穩(wěn) 定 性 成 品 穩(wěn) 定 性符合產(chǎn)品標識有效期或保質期所 有 產(chǎn) 品開封產(chǎn)品拋棄日期符合產(chǎn)品標識拋棄日期多 次 量 產(chǎn) 品臨 床 試 驗無 不 良 反 應含 有 新 成 分 的各 種 產(chǎn) 品 ; 或 有 效 成 分與 已 上 市 產(chǎn) 品 濃 度 不一 致 的 產(chǎn) 品關有效成分為過氧化氫的護理液 用中和后產(chǎn)物進行測定5試驗方法 隨機抽取三個批號的最小容量包裝產(chǎn)品進行測試， 每個批號至少抽取三件， 三分之一用于檢測， 三分之一必要時復測， 三分之一留樣。5 . 1 理化指標5 . 1 . 1 外觀 按中華人民共和國藥典( 1 9 9 5年版二部) “ 澄清度檢查法” 測試， 應符合表1中的相應要求。5 . 1 . 2 p H 取試樣 2 0 m L， 在溫度( 2 5 士1 ) 時用已校正的酸度計進行測定， 應符合表 1中的相應要求。5 . 1 . 3 滲透壓 取 0 . 5 ml試樣， 用滲透壓計測定。以蒸餾水或已知校正值的溶液做校正， 以三次讀數(shù)的平均值為測定結果， 應符合表 1中的相應要求。5 . 1 . 4 有效成分含量 按國家標準、 中華人民共和國藥典、 行業(yè)標準的順序選擇測定方法。每份試樣平均測三次， 取其平均值， 應符合表 1 中的相應要求。5 . 1 . 5 過氧化氫殘留量 將護理液按說明書規(guī)定的方法和最短作用時間進行中和， 取中和后樣液5 . 0 mL至 1 5 0 m L錐形瓶內， 加入 1 0 %硫酸 5 m工及蒸餾水 1 0 ml ， 以。 . 0 0 2 mo l / I高錳酸鉀標準溶液滴定， 穩(wěn)定搖動， 滴定至粉紅色并至少保持 1 5， 為終點。同時作空白對照按式( 1 ) 計算過氧化氫殘留量， 應符合表 I 中的相應要求 。H, 0, ( mg / k gHz 0)=( V一V o ) XX 1 7 0 . 10 . 0 0 2 X 5 0. . . . . . . . . . . . . ( 1 )式中: V 樣品消耗 0 . 0 0 2 m o l / L高錳酸鉀溶液的體積， mL ; V空白消耗 。 . 0 0 2 m o l / I高錳酸鉀溶液的體積， mL ; c 高錳酸鉀標準溶液的摩爾濃度。5 . 16 與鏡片的物理相容性 按I S O / D I S 1 1 9 8 1 方法測試， 應符合表1 中 的相應要求。5 . 2 微生物指標5 . 2 . 1固態(tài)樣 品處理GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 精確稱取 2 . 0 0 0 g試樣， 放入2 0 . 0 mL 0 . 0 3 mo l / L磷酸鹽緩沖液( P B S ) 內( 如產(chǎn)品中含有抑菌成分， 則用中和劑代替 P B S ) ， 完全溶解后取樣按下述方法進行檢測。5 . 2 . 2 活菌計數(shù) 取 1 . 0 ml樣液接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基， 每管平行接種兩個平M ， 于 3 5 C-3 7 培養(yǎng) 4 8 h ， 按式( 2 ) 計算平板上平均菌落數(shù) ， 應符合表1中的相應要求。 活菌計數(shù)( c f u / g ) =平板上平均菌落數(shù)X1 0 ， ( 2)5 . 2 . 3 致病菌 按G B 1 5 9 7 9 -1 9 9 5 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準 附錄A中的方法進行金黃色葡萄球菌、 綠膿桿菌、 大腸桿菌檢測， 應符合表 1中的相應要求。 注 1 :本試驗用中和劑必須通過附錄D( 標準的附錄) 中規(guī)定的懸液定量中和劑鑒定試驗。 注 2 :如找不到合適中和劑， 可按中華人民共和國藥典( 1 9 9 5 年版二部) “ 無菌檢查法” 中“ 薄膜過濾法， 處理樣液， 將 薄膜直接接種相應的培養(yǎng)基進行檢測。5 . 2 . 4 無菌檢查 按中華人民共和國藥典( 1 9 9 5年版二部) “ 無菌檢查法” 測試( 如產(chǎn)品中含有抑菌成分， 須先用薄膜過濾法處理) ， 應符合表 1 中的相應要求。5 . 3 消毒效果指標 見附錄A( 標準的附錄) ， 應符合表 1中的相應要求。5 . 4 安全性指標5 . 4 . 1 急性經(jīng)口毒性試驗、 致突變試驗、 皮膚刺激試驗、 眼刺激試驗、 皮膚變態(tài)反應試驗 按中華人民共和國衛(wèi)生部 消毒技術規(guī)范)(第三版) 第一分冊 實驗技術規(guī)范 ( 1 9 9 9 ) “ 消毒劑毒理學實驗技術” 測試， 應符合表 1中的相應要求。5 . 4 . 2 細胞毒性試驗 見附錄B ( 標準的附錄) ， 應符合表 1中的相應要求。5 . 5 穩(wěn)定性指標 見附錄c ( 標準的附錄) ， 應符合表 1中的相應要求。5 . 6 臨床試驗5 . 6 . 1 須進行臨床試驗的產(chǎn)品: a ) 含有新成分的各種護理液: 須進行 6 0位受試者 3 個月的臨床試驗; b )有效成分高于已上市產(chǎn)品濃度的各種護理液: 須進行 3 0 位受試者 1 個月的臨床試驗; c )有效成分低于已上市產(chǎn)品濃度的眼內溶液以及具有清潔、 消毒或中和作用的護理液: 須進行3 0位受試者 1 個月的臨床試驗。5 . 6 . 2 試驗對照: 必須設與受試者等量的配對對照。5 . 6 . 3 試驗方法: 按 I S O / D I S 1 1 9 8 。 方法進行， 應符合表 1 中的相應要求。6 檢驗規(guī)則 出廠檢驗出廠檢驗項目， 包括外觀、 p H、 滲透壓、 有效成分含量、 活菌計數(shù)、 致病菌、 無菌檢查。定期檢驗定期檢驗項目， 過氧化氫殘留量、 消毒效果每半年檢驗一次; 安全性、 穩(wěn)定性每兩年檢驗一次 型式檢驗m xYr . 粉騎項目。 向括本標準技術要求的個部內容。在下列情形之一時， 應進行型式檢驗。新產(chǎn) 品 ;當原料、 工藝、 配方有重大改變， 可能影響產(chǎn)品性能時;GB 1 91 9 2 - 2 0 0 3 一 停產(chǎn)六個月以_ L 重新恢復生產(chǎn)時; 衛(wèi)生主管部門提出進行型式檢驗時。6 . 4 致突變試驗規(guī)定6 . 4 . 1 我國首創(chuàng)或根據(jù)國內外文獻報道首次進行生產(chǎn)的新護理液: 必須做三項致突變試驗。6 . 4 . 2 從國外進口在我國銷售、 或國外已批準生產(chǎn)現(xiàn)由我國生產(chǎn)的護理液: 至少做兩項致突變試驗( 基因水平和染色體水平) 。64 . 3 與國內已獲準生產(chǎn)的護理液屬同一類的產(chǎn)品: 至少做一項致突變試驗。6 . 4 - 4寧期檢編與型式檢驗不少做 一項致 賽杏試驗7 包裝、 標志與使用說明7 1 包裝7 . 1 . 1 與隱形眼鏡護理液直接接觸的包裝材料: 應安全無害， 不影響產(chǎn)品在有效期內的衛(wèi)生質量。7 . 1 . 2 隱形眼鏡護理產(chǎn)品的運輸包裝: 應能保護產(chǎn)品在運輸、 貯存過程中不受損壞。72標志7 . 2 . 1 銷售包裝標志: 應用中文標明產(chǎn)品名稱、 主要有 效成分、 凈含量、 生產(chǎn)批號、 有效期或保質期、 制造商名稱與地址、 批準文號、 執(zhí)行標準號， 以及必要的使用說明與注意事項。進口產(chǎn)品還應標明經(jīng)銷商名稱與地址.7 . 2 . 2 運輸包裝標志: 應用中文標明產(chǎn)品名稱、 規(guī)格與數(shù)量、 生產(chǎn)批號、 有效期或保質期、 制造商名稱與地址、 批準文號、 執(zhí)行標準號， 以及必要的注意事項。進口產(chǎn)品還應標明經(jīng)銷商名稱與地址。7 . 3 使用說明7 . 3 . 1 每一銷售包裝內均應附有使用說明。7 . 3 . 2 使用說明必須用明確的中文標明如下內容: 產(chǎn)品名稱與劑型、 主要有效成分與含量、 性能、 適用范圍與禁忌、 詳細使用方法與 步驟、 不良 反應或副 作用、 貯存條件、 有效期或保質期， 以及注憊事項。7 . 3 . 3 一次量產(chǎn)品的使用說明應寫明“ 只能使用一次” ; 多次量產(chǎn)品說明應寫明“ 每次使用后必須立即關閉容器” ， 并標明拋棄日期。GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 附錄A ( 標準的附錄)消毒效果試驗方法Al目的 用于確定隱形眼鏡護理液是否具有消毒功能。A2 測試 方法A 2 . 1 懸液定量殺菌試驗A 2 . 1 . 1 試驗微生物 a )細菌: 大腸桿菌( A T C C 8 7 3 9 或 8 0 9 9 ) 金黃色葡萄球菌( A TC C 6 5 3 8 ) 綠膿桿菌( A T C C 9 0 2 7 ) b )酵母菌: 白色念珠菌( A T C C 1 0 2 3 1 ) c )霉菌: 茄科鐮刀霉菌( A T C C 3 6 0 3 1 )A 2 . 1 . 2 操作程序A 2 . 1 . 2 . 1 取菌種3 一1 4代營養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物( 1 8 h -2 4 h ) ， 用 0 . 0 3 mo l / L磷酸鹽緩沖液( P B S ) 洗下， 稀釋成含菌量為 1 X 1 0 c f u / mL - - 1 X 1 0 H c f u / mI的菌懸液。A 2 . 1 . 2 . 2 從三批試樣中分別吸取 1 0 . 0 mL加人三支滅菌試管中， 置2 0 0C-2 5 水浴5 mi nA 2 . 1 . 2 . 3 在試管中分別加人 0 . 1 m L菌懸液， 使最終含菌量為 1 X 1 0 , c f u / m 1 . -1 X 1 0 c f u / mi ， 混勻， 并開始計時。A 2 . 1 . 2 . 4 分別于四個不同作用時間( 推薦最短消毒時間的 2 5 %, 5 0 %, 7 5 環(huán), 1 0 0 %) ， 各取 1 . 0 ml菌藥混合液移人 9 . 0 mL中和劑中， 混勻。A 2 . 1 . 2 . 5 中和1 0 m i n 后， 吸 取其原液或1 0 倍系列稀釋液1 . 0 m L 分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基( 細菌 、沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基( 酵母菌) 或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基( 霉菌) ， 每管接種兩塊平板 細菌與醉母菌分別于 3 5 C-3 7 C培養(yǎng)4 8 h ( 細菌) 或 7 2 h ( 酵母菌) ， 霉菌于2 0 0C - 2 5 培養(yǎng)1 0 d -1 4 d ， 作活菌計數(shù)， 取其平均值A 2 . 1 . 2 . 6 以 0 . 0 3 m o l / L P B S代替樣品， 按上述同樣方法加菌進行活菌計數(shù)作為陽性對照。取 P B S ,中和劑各 1 . 0 mL分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作為陰性對照A 2 . 1 . 2 . 7 按式( A I ) 計算每種菌每個作用時間點的殺滅率:殺滅 率二陽性對照組活菌數(shù) 一試驗 組活菌數(shù)陽性對照組活菌數(shù)X 1 0 0 % 0 。 (Al)A 2 . 1 . 2 . 8 試驗所選中和劑必須通過附錄 D中規(guī)定的懸液定量中和劑鑒定試驗， 并且陰性對照必須無菌生長， 否則重新測試A 2 . 2 有機物對消毒效果影響試驗A 22 . 1 試驗微生物 任選A 2 . 工1 中的 一種細菌進行測試。A 2 . 2 . 2 操 作程序A 2 . 2 . 2 . 1 取菌種 3 1 4 代營養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物( 1 8 h -2 4 h ， 用 0 . 0 3 mo l / L P A S洗下并稀釋，加人適量無菌小牛血清， 使最終含血清量為 1 0 %， 含菌量為 1 X 1 0 c f u / ml . -l X 1 0 c f u / ml的菌懸液。 6GB1 91 9 2 - 2 0 0 3A 2 . 2 . 2 . 2 以懸液定量殺菌試驗確定的最低有效濃度所需的最短作用時間為試驗時間起點， 以后按等差或等倍組距再選擇三個作用時間取樣檢測。A 2 . 2 . 2 . 3 以下步驟按A2 . 1 . 2 . 2 -A2 . 1 . 2 . 8 進行。A 2 . 2 . 3 評價規(guī)定 達到合格的最短有效作用時間與懸液定量殺菌試驗結果相同， 為有機物對產(chǎn)品殺菌作用無明顯影響; 如最短有效作用時間延長一倍或以上為有影響。A 2 . 3 模擬現(xiàn)場試驗( 鏡片定量殺菌試驗)A 2 . 3 . 1 試驗微生物 根據(jù)懸液定量殺菌試驗結果， 選擇抗力最強的一種細菌與酵母菌進行測試。A 2 . 3 . 2 試驗鏡片A 2 . 3 . 2 . 1 鏡片類型: 分低含水非離子型與高含水離子型。A 2 . 3 . 2 . 2 試驗鏡片必須是未使用過的新鏡片。A 2 . 3 . 2 . 3 鏡片應凹面向上放人無菌培養(yǎng)皿內， 在凹凸兩面頂點各接種 0 . 0 1 m L菌液。A 2 . 3 . 3 操作程序A 2 . 3 . 3 . 1 將試驗鏡片( 每組四片低含水非離子型與四片高含水離子型) 以及陽性對照鏡片( 各兩片)分別放置于滅菌培養(yǎng)皿中， 取試驗菌液 。 . 0 2 mI接種于鏡片上( 染菌量為 2 X 1 0 c f u / 片一1X1 0 c f u / 片) ， 于 2 0 0C - - 2 5 0 C 吸收 5 mi n -1 0 mi n eA 2 . 3 . 3 . 2 按生產(chǎn)商所提供的鏡片消毒的詳細說明處理試驗鏡片， 包括清潔、 消毒、 沖洗、 貯存的所有步驟 。A 2 . 3 . 3 . 3 處理完畢， 立即以無菌操作方法分別將試驗鏡片移人 5 . 0 mL中和劑試管內， 振搖， 使鏡片上的殘留菌被充分洗脫在中和劑中。A 2 . 3 . 3 . 4 按A2 . 1 . 2 . 5的方法進行活菌計數(shù)。A 2 . 3 . 3 . 5 將未經(jīng)處理的陽性對照鏡片以無菌操作方法分別移人 5 . 0 mL 0 . 0 3 m o l / L P B S試管內， 振搖， 充分洗脫鏡片上殘留菌， 再按 A2 . 1 . 2 . 5的方法進行活菌計數(shù)。A 2 . 3 . 3 . 6 取 0 . 0 3 m o l / L P B S 、 中和劑各 1 . 0 mL分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作為陰性對照。A 2 . 3 . 3 . 7 按式( A 2 ) 計算每種鏡片上每種菌的消除率:消除率 二陽性對照組活菌數(shù)一試驗組活菌數(shù)陽性對照組活菌數(shù)X1 0 0% (A2)A 2 . 3 . 3 . 8 試驗所選中和劑必須通過附錄D中規(guī)定的載體定量中和劑鑒定試驗， 并且陰性對照必須無菌生長， 否則重新測試。A 2 . 3 . 4 評價規(guī)定 對細菌的消除率)9 9 . 9 0 0 0 ， 對酵母菌的消除率)9 0 . 0 0 %為合格。GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 附錄B ( 標準的附錄)細胞毒性試驗與評價方法B1目的 將一定量受試物加人細胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)細胞， 通過對細胞生長和增殖的影響來評價護理液對哺乳動物 細胞的潛在毒性作 用。B2 試 劑 a ) P 1 性對照: 6 4 g / 1 苯酚溶液 b )陰性對照: 下述培養(yǎng)基。 c )細胞株: 推薦使用 1 , 9 2 9 細胞( 小鼠成纖維細胞) ， 試驗用細胞為傳代 4 8 h -7 2 h生長旺盛的細胞。 d ) 培養(yǎng)基: E a g l e s ME N加人體積分數(shù)為 1 0 %的小牛血清。 e )磷酸鹽緩沖液( P B $ ) o 無鈣鎂磷酸鹽緩沖液1 0 0 . 0 m L 酚紅溶液1 0 . 0 ml . 2 0 0 g / L氯化鎂溶液0 . 5 m L 1 0 0 g / L氯化鈣溶液1 . 0 m L 水加至 1 0 0 0 m LB 3 試驗步驟B 3 . 1 細胞懸液制備: 用細胞培養(yǎng)基配制 4萬個/ mL細胞懸液分注于試管內( 1 m L / 管) ， 陰性對照組1 3 管( 1 管備用) ， 材料組 1 0 管( 1 管備用) ， 必要時設陽性對照組 3 管， 置3 7 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 4 h ,B 3 . 2 受試物制備: 取 。 . 2 mL受試物加人細胞培養(yǎng)液中， 3 7 培養(yǎng)2 4 h ,B 3 . 3 受試液交換: 2 4 h 后， 每管舍棄原培養(yǎng)液， 陰性對照組 9管用新鮮培養(yǎng)液交換， 陽性對照組用含6 4 g / L苯酚的細胞培養(yǎng)液交換， 受試物組用含體積分數(shù)為 5 0 %受試液的新鮮培養(yǎng)液進行交換， 并對三支陰性對照管進行細胞計數(shù)， 其余置 3 7 1C繼續(xù)培養(yǎng)。B 3 . 4 細胞計數(shù)與吸光度測定B 3 . 4 . 1 分別于2 . 4 . 7 天將對照組和試驗組各三管進行細胞計數(shù)或吸光度測定， 以判斷細胞的增殖度 。B 3 . 4 . 2 細胞計數(shù)法: 用含構椽酸鈉的結晶紫羅蘭染色， 血球計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)， 上下限不得超過1 0 %， 否則重新計數(shù)。8 3 . 4 . 3 分光光度計測定吸光度法( 仲裁法) : 棄去原細胞培養(yǎng)液， 用 P B S洗滌， 體積分數(shù)為 1 0 %的甲醛溶液固定1 0 mi n ， 水洗( 2 -3 ) 次， 加5 g / L結晶紫羅蘭 1 . 5 m1染色 3 m i n ， 水洗( 2 .3 ) 次， 加 1 0 g / L十二烷基硫酸鈉3 . 5 m L， 用分光光度計在波長 5 8 8 n m 下測定吸光度。B 4 結果計算B 4 . 1 細胞計數(shù)法: 細胞計數(shù)經(jīng) 9 5 %可信度的數(shù)理統(tǒng)計， 得上限、 平均數(shù)、 下限， 通過細胞計數(shù)計算相對增殖度 ( RGR) ， 見式 ( Bl ) oGB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3RGR= 試驗組平均值陰性對照組平均值X1 0 0 %(B1 )B 4 . 2 吸光度測定法: 相對增殖度計算見式( B 2 ) .RGR-一1a of f A AM二空 魚LX f i a& AfA-陰性對照組吸光度 一空 白對 照吸光度X1 0 0 %( B 2 )B 4 .毒性評定: 按表 B I 規(guī)定把 R GR值轉換成六級反應以評定護理液毒性程度。 表 B I 反應分級標準反 應相 對 增 殖 度O 級妻 1 0 01 級一-一一-一一 7 5 - - 9 92 級5 0- 7 43 級2 5 - 494 級工 2 45 級0評價 規(guī)定試驗結果為0級或 1 級反應為合格。試驗結果為 2 級反應的， 應結合細胞形態(tài)分析， 綜合評價。試驗結果為3 - 5 級反應為不合格。 .1.六之八 .戶0七.匕JSBBB肚GB1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 附錄C ( 標準 的附錄)穩(wěn)定性試 驗方法成 品穩(wěn)定 性試驗1目的用于確定隱形眼鏡護理液成品的有效期。2測試方法2 . 1 自然留樣法將試樣放置 2 5 士2 室溫條件下， 定期( 開始、 3月、 6月， 以后每 6 個月一次) 取樣檢測其理化性CCC1C1能( 與鏡片物理相容性除外) 、 微生物情況， 以及選擇附錄B中抗力最強的一種細菌進行消毒效果試驗。Cl . 2 . 2 加速試驗法 將試樣放置 4 5 士2 與相對濕度( 7 5 士5 ) %條件下， 定期 ( 開始、 3月、 6月) 取樣檢測， 指標同C l . 2 . 1 0C l . 3 評價規(guī)定C l . 3 . 1 至少應進行 6 個月的自然留樣與加速試驗。C l . 3 . 2 各項檢測結果均應符合表 1中的相應要求。C l . 3 . 3 自然留樣法可直接確定產(chǎn)品有效期。C l . 3 . 4 加速試驗可根據(jù)溫度與自然留樣法溫度差( x ) 計算加速因數(shù)， 計算公式為: 加速因數(shù)=2 . 0 0 ( 當 z =2 0時， 2 . 0 =4 ) 。然后用加速因數(shù)乘以試驗時間推測產(chǎn)品有效期， 但不得超過兩年C 2 開封產(chǎn)品拋棄日期試驗C 2 . 了目的 用于確定多次量隱形眼鏡護理產(chǎn)品開封后的拋棄日 期。C 2 . 2 測試方法C 2 . 2 . 1 試驗微生物: 選擇消毒效果試驗( 附錄 B ) 中抗力最強的一種細菌與一種酵母菌( 白色念珠菌)C 2 . 2 . 2 接種日期: 試驗開始、 第 2周， 擬拋棄 日 期的 2 5 0 0 , 5 0 0 0 , 7 5 %, 1 0 0 %eC 2 . 2 . 3 取樣日期: 第 1 , 2 , 3 , 4 周， 擬拋棄日期的 2 5 0 0 , 5 0 0 0 , 7 5 0 0 , 1 0 0 %， 擬拋棄日期后 2 周。C 2 . 2 . 4 操作程序C 2 . 2 . 4 . 1 每種菌每批次取試樣 5 0 m L于滅菌試管內， 加人 。 . 5 mL含菌量為 1 0 , c f u / m L菌懸液， 混勻， 使最終菌量為1 0 6 c f u / ml， 置于2 0 0C -2 5 0C。如產(chǎn)品對光敏感， 應遮光貯存C 2 . 2 . 4 . 2 在上述取樣日期， 每管吸取 1 . 0 ml試樣移人 9 . 0 mL中和劑中， 混勻。C 2 . 2 . 4 . 3 中和 1 0 m i n后， 取樣液或 1 0 倍系列稀釋液 1 . 0 mL分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基( 細菌) 或沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基( 酵母菌) ， 每管接種兩個平皿， 于 3 5 C-3 7 培養(yǎng) 4 8 h ( 細菌) 或 7 2 h ( 酵母菌) ， 進行活菌計數(shù)， 取平均值。C 2 . 2 . 4 . 4 分別以0 . 0 3 m o l l. P B S與中和劑代替試樣， 按上述方法加菌進行活菌計數(shù)作為陽性對照與中和劑對照; 同時分別用 1 . 0 mL 0 . 0 3 mo l / L P B S 與中和劑接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基以及未接種的上述培養(yǎng)基作陰性對照。C 2 . 2 . 4 . 5 在上述再接種 日 期( 2周及以后) ， 在試樣中加人 。 . 5 mL含量為 1 0 5 c f u / mL菌懸液， 混勻，使最終菌量為 1 0 c f u / m工 。在再接種前取樣進行活菌計數(shù)。 1 0GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3C2 . 2 . 4 . 6 計算每種菌的減少率: 減少率=評價規(guī)定陽性對照組活菌數(shù)一試驗組活菌數(shù) 陽性對照組活 菌數(shù)X1 0 0 % 。 。 一 (C1)C2 . 2 . 5 a 1 陰性對照無菌生長， 中和劑對照活菌數(shù)達到陽性對照活菌數(shù)的5 。 %以 上， 否則 應重新測試。 6 )在第 1 4 天， 細菌減少率)9 9 . 9 0 0 0 . 酵母菌減少率)9 0 . o %， 并且在以后至拋棄日期細菌與酵母菌的活菌計數(shù)不再增加。GB1 9 1 9 2 - 2 0 0 3 附錄D ( 標準 的附錄)中和荊 鑒定試 驗目的用于確定所選用中和劑是否適用于擬進行的細菌或酵母菌殺滅試驗。試驗 微生物細菌( 以下任選一種) : 大腸桿菌( AT C C 8 7 3 9 或 8 0 9 9 ) 金黃色葡萄球菌( A T C C 6 5 3 8 ) 綠膿桿菌( AT C C 9 0 2 7 )酵母菌: 白色念珠菌( A T C C 1 0 2 3 1 )試驗分 組D 3 . 1 懸液定量中和劑鑒定試驗D 3 . 1 . 1 第 1 組。吸取試樣1 0 . 0 mL于試管內， 置2 0 0C- - 2 5 水浴中5 m i n后， 加人 0 . 1 mL菌懸液混勻。作用至預定時間， 吸此樣液 1 . 0 mL加于含有 9 . 0 mL 0 . 0 3 m o l / L P B S的試管中混勻。吸取該最終樣液 1 . 0 mL， 接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 1 . 2 第 2 組。吸取試樣 1 0 . 0 mL于試管內， 置2 0 0C-2 5 水浴中5 m i n后， 加人。 . 1 mL菌懸液混勻。作用至預定時間， 吸此樣液 1 . 0 mL加于含有 9 . 0 mI, 0 . 0 3 m o l / I ， 中和劑溶液的試管中混勻， 作用1 0 m in 。吸 取該最終樣液1 . 0 m L ， 接 種于平皿中， 做活菌 計數(shù)。 如平板生長菌落數(shù)超過 3 0 0個， 應以0 . 0 3 m o l / L P B S對上述最終樣液作適宜稀釋后， 再次進行活菌計數(shù) 。D 3 . 1 . 3 第 3 組。吸取中和劑1 0 . 0 mL于試管內， 置2 0 0 C -2 5 水浴中5 m i n 后， 加人0 . 1 ml菌懸液混勻。作用 1 0 min 。吸取該最終樣液 1 . 0 mL， 用中和劑做 1 0 倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 各取1 . 0 mL ， 分別接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 1 . 4 第4組。吸取中和產(chǎn)物溶液( 以1 份消毒劑加9 份中和劑， 作用 1 0 mi n 配制而成) 1 0 . 0 mL于試管內， 置 2 0 0 C -2 5 水浴 中5 m i n后， 加人 0 . 1 m L菌懸液混勻作用 1 0 mi n 。吸取該最終樣液1 . 0 ml ， 用中和產(chǎn)物溶液做 1 0 倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 各取 1 . 0 mL ， 分別接種于平皿中， 做活菌計數(shù) 。D 3 . 1 . 5 第 5組。吸取 0 . 0 3 m o l / L P B S 1 0 . 0 mL于試管內， 置 2 0 0C -2 5 0 C水浴中 5 mi n后， 加人0 . 1 mL 菌懸液混勻。作用 1 0 m i n 。吸取該最終樣液 1 . 0 m L， 用。 . 0 3 m o l / L P B S做 1 0 倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 各取 1 . 0 m工 _ ， 分別接種于平皿中， 做活菌計數(shù)口D 3 . 1 . 6 第 6組吸取試驗所用同批次 。 . 0 3 m o l / l . P B S 1 . 0 mL ， 接種于平皿中. 做活菌培養(yǎng)計數(shù)。D 3 . 1 . 7 第 7 組。吸取試驗所用同批次中和劑 1 . 0 ml - ， 接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 1 . 8 第 8 組。將未接種的試驗用培養(yǎng)基平板直接置溫箱內培養(yǎng)。D 3 . 2 載體定量中和劑鑒定試驗D 3 . 2 . 1 第 1 組。吸取試樣5 . 0 mL于無菌小平皿內， 將其置 2 0 0 C -2 5 水浴中5 m i n后， 用無菌鑷子夾人一菌片( 布載體) ， 并使浸透于試樣中。待作用至試驗預定的時間， 立即用無菌鑷子取出菌片移人含5 . 0 mL 0 . 0 3 mo l / L P B S 試管中， 作用 1 0 m i n 。將試管振打8 0 次， 吸取該最終樣液 1 . 0 m工 一 ， 接種于平 t 2GB 1 9 1 9 2 - 2 0 0 3皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 2 . 2 第 2 組。吸取試樣 5 . 0 m L于無菌小平皿內， 將其置 2 0 1 C -2 5 水浴中5 mi n后， 用無菌鑷子夾人一菌片， 并使浸透于試樣中。待作用至試驗預定的時間， 立即用無菌鑷子取出菌片移人含 5 . 0 mL中和劑試管中， 將試管振打8 0 次。作用 1 0 m i n 。吸取該最終樣液 1 . 0 ML ， 接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。 如平板生長菌落數(shù)超過 3 0 0 個， 應重新吸取該最終樣液 0 . 5 mL ， 用 0 . 0 3 mo l / L P B S做適當稀釋，選適宜稀釋度懸液， 吸取 1 . 0 mL ， 分別接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 2 . 3 第 3 組。吸取中和劑 5 . 0 mL于無菌小平皿內， 將其置 2 0 C-2 5 水浴中5 mi n 后， 用無菌鑷子夾人一菌片， 并使浸透于中和劑內， 作用 1 0 mi n 。立即用無菌鑷子取出菌片移人含 5 . 0 m L中和劑試管中， 將試管振打8 0次， 混勻。吸取該最終樣液 1 . 0 mL， 用中和劑做 1 0 倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 吸取 1 . 0 m L， 分別接種于平皿中. 做活菌計數(shù)。D 3 . 2 . 4 第 4組。吸取中和產(chǎn)物溶液( 以浸有消毒劑的載體置 5 . 0 ml. 中和劑內， 作用 1 0 m i n ) 5 . 0 m L于無菌小平皿內， 將其置 2 0 0C -2 5 水浴中 5 mi n后， 用無菌鑷子夾人一菌片， 并使浸透于中和產(chǎn)物中。作用 1 0 m i n ， 用無菌鑷子取出菌片， 移人含 5 . 0 mL中和產(chǎn)物溶液的試管中， 將試管振打 8 0 次， 混勻。吸取該最終樣液 1 . 0 mL ， 用中和產(chǎn)物溶液做 1 0倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 吸取 1 . 0 m L， 分別接種于平皿中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 2 . 5 第 5組。吸取0 . 0 3 m o l / L P B S 5 . 0 m L于無菌小平皿內， 將其置 2 0 C - - 2 5 水浴中5 mi n后， 用無菌攝子夾人一菌片， 并使浸透于 。 . 0 3 m o l / L P B S中。作用 1 0 mi n ， 立即用無菌鑷子取出菌片移人含 5 . 0 m L 0 . 0 3 m o l / L P B S的試管中， 將試管振打 8 0次， 混勻。吸取該最終樣液 1 . 0 mL ， 用0 . 0 3 mo l / L P B S 做 1 0 倍系列稀釋， 選適宜稀釋度懸液， 吸取 1 . 0 mL ， 分別接種于平a中， 做活菌計數(shù)。D 3 . 2 . 6 第 6 組。吸取試驗所用同批次。0 3