藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標準有關(guān)物質(zhì)檢查常見問題討論余立.ppt

藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標準 -有關(guān)物質(zhì)檢查常見問題討論,余立 ,第一次飛躍,第二次飛躍,雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷,雜質(zhì)（Impurity）的定義與分類,任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 -中國藥典2010年版附錄對藥品雜質(zhì)的定義 原料藥中：化學(xué)結(jié)構(gòu)和該藥品不一樣的任何物質(zhì) 制劑中： 除原料藥和輔料外的任何其他成分 - ICH對雜質(zhì)的定義,雜質(zhì)按活性分類,雜質(zhì)按來源分類,雜質(zhì)來源,已鑒定雜質(zhì) Identified Impurity,特定雜質(zhì) Specified Impurity,潛在雜質(zhì) Potential Impurity,雜質(zhì)譜 Impurity Profile,已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì),在質(zhì)量標準中規(guī)定檢查并有自己限度標準的雜質(zhì)。已鑒定或未鑒定,理論推測在生產(chǎn)或貯藏過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)實際產(chǎn)品中不一定存在,存在于藥品中的所有雜質(zhì)組成或模式,新雜質(zhì)的研究 藥物雜質(zhì)的可能來源,1.原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、 阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F 2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、 氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵?霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氫阿奇霉素、 O-甲苯 磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去 二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮 基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯 4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮,阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種,附錄 F 藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則 附錄 A 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 指導(dǎo)原則,2010年版 藥典中的雜質(zhì)分析,Q3A新原料藥中的雜質(zhì) Q3B新制劑中的雜質(zhì),ICH中的雜質(zhì)分析,其他參考資料,化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則 ,有關(guān)物質(zhì)檢查的常用方法,適用多種 雜質(zhì) （定性定量）,主要用于沒有紫外吸收的雜質(zhì) （定性半定量）,適用不同的 特定雜質(zhì) （定性定量）,TLC,HPLC,其他方法,有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法,容量滴定,原子吸收,重量法,比色比濁,物理常數(shù),紫外,其他方法,物理常數(shù)測定法 旋光度- 檢查具有光學(xué)活性的雜質(zhì) 紫外分光光度法 雜質(zhì)吸光度-在特定波長具有紫外吸收的雜質(zhì) 容量滴定法 游離脂肪酸、過氧化物、還原糖 重量法 酸中不溶物、水中可溶物 比色比濁法 游離淀粉、碘化物、鐵鹽等；氯化物、硫酸鹽,有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法,有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法,原子吸收分光光度法： 檢查金屬雜質(zhì) 毛細管電泳法：抑肽酶中檢查去丙氨酸-去甘氨酸-抑 肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個特定雜質(zhì) 氣相色譜法：檢查揮發(fā)性雜質(zhì) 熱分析法：檢查不同晶型的雜質(zhì) 拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射 生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）,有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法,有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法,HPLC方法的建立與驗證,高效液相色譜法系用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。注入的供試品由流動相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離并依次進入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。,檢測器的種類,新方法,分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）,原方法,中國抗生素雜志，2009，34：734,在對已有方法比較的基礎(chǔ)上確定最佳分析方法,典型的HPLC方法測定有關(guān)物質(zhì),有關(guān)物質(zhì) 照高效液相色譜法（附錄 D）測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（pH6.3）取磷酸二氫鉀9.07g，加水1000ml使溶解，用無水磷酸氫二鈉溶液（9.46g1000ml）調(diào)節(jié)pH值至6.3，臨用前稀釋10倍-乙腈-甲醇（36：11：3）為流動相，流速每分鐘1.5ml；檢測波長為200nm；柱溫40。分別取前列地爾對照品溶液、前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對照品溶液各適量，按（1：1：1）比例混合，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗用溶液。取該溶液25l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)色譜系統(tǒng)，使前列地爾峰的保留時間約為1113分鐘，前列腺素A1峰與前列腺素B1峰的分離度應(yīng)符合要求；同時調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使前列腺素B1峰的高度約為滿量程的10%。,測定法 精密稱取本品適量，用乙腈-水（9：1）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液作為供試品溶液；精密量取含量測定項下的對照品溶液適量，用乙腈-水（9：1）稀釋制成每1ml中約含10g的溶液，作為前列地爾對照品溶液；另精密稱取前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對照品各適量，用乙腈-水（9：1）分別溶解并定量稀釋制成每1ml中約含15g和5g的溶液作為前列腺素A1和前列腺素B1的雜質(zhì)對照品溶液。精密量取供試品溶液、前列腺素A1、前列腺素B1雜質(zhì)對照品溶液和前列地爾對照品溶液各25l,分別注入液相色譜儀，記錄供試品溶液的色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。前列腺素A1和前列腺素B1均按外標法計算，分別不得過1.5%和0.5%；其他雜質(zhì)按主成分自身對照法計算，單個最大雜質(zhì)的峰面積不得過前列地爾對照品溶液的主峰面積（1.0%）；雜質(zhì)總量不得過2.0%（小于0.01%的色譜峰不計）。,HPLC方法的建立與驗證,溶劑的選擇：溶液穩(wěn)定性考察 - 溶解度高且穩(wěn)定 8小時不需提示 4小時提示臨用現(xiàn)配或立即進樣 2小時改換溶劑 - 無背景干擾或小 溶劑峰、倒峰 - 低毒價廉,檢測波長的選擇,檢測波長的選擇,主波長、低波長、雜質(zhì)波長、權(quán)衡波長,檢出雜質(zhì)的數(shù)與量 干擾因素 操作的便捷性,檢測波長的選擇,色譜柱的選擇,反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑 C18、 C8；氰基柱、氨基柱 正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑 硅膠柱 離子交換填充劑； 凝膠或高分子多孔微球； 手性鍵合填充劑,色譜柱的選擇-常見問題,色譜柱與流動相性質(zhì)不匹配 100%的水或Buffer最好選水相柱（AQ柱 ） 普通C18柱流動相中用到離子對試劑，用后應(yīng)好好沖 最好專用！ 因色譜柱填料性質(zhì)已與原來有所不同 在該柱上所摸索的色譜條件，可能在其它同類柱子上得不到重現(xiàn)！,流動相的選擇,-分離能力強 （各種有關(guān)物質(zhì)基本分離） -溫和穩(wěn)定 （pH、比例適中對柱傷害小，性質(zhì)穩(wěn)定） -配制簡單、易得價廉 -無毒環(huán)保,頭孢曲松鈉的流動相原來0.8%四庚基溴化銨乙腈溶液-水-磷酸鹽緩沖液-枸櫞酸緩沖液（500：440：55：5），由4種成分組成，需配制3種緩沖液； 后改為0.02mol/L正辛胺溶液-乙腈（73：27），用磷酸調(diào)節(jié)pH值為6.5，僅由2種成分組成,流動相的選擇,分離能力的考察,-粗產(chǎn)品溶液或配制各種雜質(zhì)混合物 （起始原料，中間體，副產(chǎn)物） - 強制降解 （酸、堿、光、熱、氧化）,二、HPLC方法的建立與驗證,強制降解的考察方法誤區(qū)： （酸、堿、光、熱、氧化） - 破壞條件過于強烈 （控制在主成分降低10%20%為宜） - 中和方法 - 目的不明確，結(jié)論不正確,分離能力的考察,二、HPLC方法的建立與驗證,- 不規(guī)定柱溫 （不需加溫且對溫度不敏感） - 25或30 （不需加溫但對溫度敏感，需保持恒溫） - 35 70 （需加溫且對溫度敏感，需保持恒溫） 作為耐用性試驗之一 且可與溶液穩(wěn)定性同時進行,柱溫的確定,溶液的配制,需要注意的幾點： - 需否避光？ - 可否超聲、加熱、多久？過濾？濾材？ - 濃度與線性范圍和檢測限是否匹配？ 棄20ml初濾液？用xx膜過濾？ 用聚四氟酰胺小瓶？ 機械振搖xx分鐘等等？,二、HPLC方法的建立與驗證,- 常用10l100l -過低誤差大，影響重現(xiàn)性 -太多過載，影響峰形與分離 - 配合溶液濃度保證檢測靈敏度,進樣體積的確定,色譜系統(tǒng)的適用性試驗,- 指標的應(yīng)用 -分離度的保證 -靈敏度的測試 - 精密度的要求,,Company Logo,系統(tǒng)適用性試驗要求,重復(fù)性,理論板數(shù),分離度,保留時間,拖尾因子,常用指標,分離度指標性物質(zhì)的選擇,- 難分離物質(zhì)對 - 最常出現(xiàn)的雜質(zhì) - 單獨規(guī)定限度的特定雜質(zhì) - 結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近且 不干擾測定的物質(zhì),二、HPLC方法的建立與驗證,-準確定量分析時通常兩峰間R1.5 -峰高峰谷比,分離度的要求,拖尾因子（T）的要求與應(yīng)用,為保證分離效果和測量精度用于評價色譜峰對稱性 的指標 T=W0.05h/2d1 式中W0.05h 為5峰高處的峰寬； d1 為5峰高出峰頂點至峰前沿 之間的距離 除另有規(guī)定外，峰高法定量時 T 應(yīng)在0.951.05 之間。 峰面積法測定時，若拖尾嚴重，將 影響峰面積的準確測量。峰前峰后有 緊鄰雜質(zhì)峰時，對拖尾因子作出規(guī)定。,重復(fù)性（RSD）的要求,用于評價連續(xù)進樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標法時，通常配制相當于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標溶液，配成3 種不同濃度的溶液，分別至少進樣2 次，計算平均校正因子。其相對標準偏差應(yīng)不大于2.0% 在質(zhì)量標準中如果沒有明確規(guī)定，就是2.0%,,Company Logo,特定雜質(zhì)峰定位的方法,雜質(zhì)對照品,混合對照品,臨時降解,相對保留時間+參考圖,峰定位,方法的驗證,驗證 定量 限度 - 準確度 + - -精密度 + - 重復(fù)性 + - 中間精密度 （+ ） - -專屬性 + + - 檢測限 （+ ） + - 定量限 + - - 線性范圍 + - -耐用性 + +,,Company Logo,雜質(zhì)含量的計算,對照品 外標法,主成分自 身對照法,加校正因 子的自身 對照法,面積歸一化法,對照品外標法,優(yōu)點,缺點,50%,定位 方便,定量準確,要求嚴,費用 高,70%,有條件時首選的方法,主成分自身對照法,優(yōu)點,缺點,50%,不需 定位,費用低,定量 粗,70%,沒條件時首選的方法,加校正因子的主成分自身對照法,優(yōu)點,缺點,50%,定位 方便,定量較 準確,需測定因子,定位難,70%,雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子差異大（超過0.91.1 ） 且對照品昂貴時選用的方法,面積歸一化法,優(yōu)點,缺點,50%,不需 定位,費用低,定量粗,70%,不提倡使用的方法,影響多 重復(fù)性差,,Company Logo,特定雜質(zhì) 非特定雜質(zhì),有效雜質(zhì)寬管,毒性雜質(zhì)嚴控,雜質(zhì)限度的規(guī)定,單個不得過 0.10%,根據(jù)生產(chǎn)現(xiàn)狀,雜質(zhì)限度的規(guī)定,毒性雜質(zhì)嚴控： -遵守公認標準 -不超越前期標準 -以相關(guān)安全實驗數(shù)據(jù)為科學(xué)依據(jù) -以保證臨床安全為根本目的,雜質(zhì)限度的規(guī)定,有效雜質(zhì)寬管： -不能不管（三磷酸腺苷二鈉、頭孢拉定） -不超越前期標準 -以投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學(xué)依據(jù),雜質(zhì)限度的規(guī)定,非特定雜質(zhì)： -不超越前期標準 -一般不得過0.10%（2010年版） - 以安全實驗和投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科 學(xué)依據(jù),輔料影響的排除-有關(guān)物質(zhì)檢查,前沿色譜峰，易排除 少峰，可定位，能排除 多峰，難定位，不能排除,輔料對測定的干擾,輔料對測定的干擾,1、避免使用 （輔料或方法） 2、不排除可以（默認或校正） 3、排除輔料干擾方法要明確、易重現(xiàn)、具 可操作性、配混合液 4、保證特定雜質(zhì)（最具代表性降解產(chǎn)物） 檢出效果-不得已的最后一招,比較研究的標尺問題 -購買的對照品/標準品,對照品/標準品,權(quán)威性,真實性,準確性,-發(fā)票、標簽、批號、分析報告單、鹽基/堿基、水分,詳細精制方法、質(zhì)量檢驗報告 標定方法與結(jié)果,詳細提取精制方法、質(zhì)量檢驗 報告、標定方法與結(jié)果,詳細合成精制方法、質(zhì)量檢驗報告、標定方法與結(jié)果,純化精制,提取精制,合成精制,比較研究的標尺問題 -非購買的對照品/標準品,建立標準時要考慮的問題,Growth,2008 2007 2006,2005 2004 2003,2002 2001 2000,數(shù)據(jù)標定：用正確的方法由至少3位實驗者，不同儀器進行不少于10個數(shù)據(jù)的測定,待標品質(zhì)量考察：證明不僅是對的而且還是好的,對數(shù)據(jù)進行數(shù)理統(tǒng)計處理,比較研究的標尺問題 -對照品/標準品的標定,標定者 測定結(jié)果（%） n 均值（%） RSD（%） 1. 98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17% 5 99.11% 0.17% 2. 98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98% 5 99.04% 0.12% 3. 99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18% 5 99.06% 0.09% 經(jīng)Corchan檢驗，三位標定者的方差沒有差異，均來自同一正態(tài)分布。用Dixon法檢驗15組數(shù)據(jù)中的最大值99.25%，最小值98.82% 均非離群值。 T1-0.05S 置信區(qū)間 = X = 99.080.068 n1/2 標定結(jié)果的置信區(qū)間為99.1599.01%，因此，本批對照品的色譜純度總均值為99.08%。,對比研究對比檢驗 研究項目 原執(zhí)行標準 考察方法 原法定標準,比較研究的范圍與方法 -考察項目與方法的選擇原則,物料不同原料、輔料 分析對象 工藝不同路線、中間體 設(shè)備不同質(zhì)材、參數(shù)精度 不全面沒的學(xué)（復(fù)方無有關(guān)物質(zhì)） 已有標準不完善不應(yīng)學(xué)（地標升國標標準） 不適用不能學(xué)（廠送設(shè)備）,為什么呢？,產(chǎn)品生產(chǎn)個性 應(yīng)關(guān)注 標準隱性變化 同類最新動態(tài),如何在已有標準基礎(chǔ)上變化拓展,雜質(zhì)研究技術(shù),柱串聯(lián)技術(shù) 適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過將一根SCX（陽離子交換）短柱與一根MG C18長柱串聯(lián)就可以簡單達到將其分離的目的。 原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會由于SCX短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會毫無阻礙的通過短柱進入C18長柱中，從而成功分離；然后由于MGC18長柱中疏水性基團間的相互作用而對中性物質(zhì)有強保留作用，但對帶負電荷物質(zhì)無強保留作用，這樣帶負電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡單被分開了 如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換短柱與C18長柱前接一根NH2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進行三根串聯(lián)，也可以使帶負電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達到更好的分離效果。,毒性快速評價平臺,斑馬魚毒性快速評價平臺，對雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進行評價。 優(yōu)點： 雜質(zhì)用量少 無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu) 實驗周期短 （34天一個周期）,藥物耳毒性檢測 利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細胞的染色，檢測毛細胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。 下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。,給藥后,系統(tǒng)對照組（正常幼體）,藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例,由于某些藥物組成的復(fù)雜性，特別是一些生物大分子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當前的質(zhì)控需要，2010年版藥典逐漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。 首次運用毛細管電泳法 注射用抑肽酶：檢查兩個特定雜質(zhì) 注射用鹽酸頭孢吡肟： 方法1-毛細管電