表觀遺傳調(diào)控對(duì)腹主動(dòng)脈瘤患者單個(gè)核細(xì)胞的影響.ppt

表觀遺傳調(diào)控對(duì)腹主動(dòng)脈瘤患者 單個(gè)核細(xì)胞的影響,中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 血管外科 夏茜 張健 辛世杰 段志泉 胡海地,研究背景,AAA的發(fā)病率逐年上升。破裂性AAA死亡率高。 病因復(fù)雜：氧化損傷、炎癥、血管退行性變、中膜平滑肌的減少、自身免疫性疾病的特征等。 前期研究已證實(shí)AAA患者外周血存在Fas系統(tǒng)缺陷和Treg數(shù)量和功能的缺陷。 Jian Zhang, et al. Impaired Fas-induced apoptosis of T lymphocytes in patients with abdominal aortic aneurysms J VAS SURG 2007 May;45(5):1039-46 Yin M, et al. Deficient CD4+CD25+ T regulatory cell function in patients with abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010; 30: 1825-31,表觀遺傳學(xué)：不改變DNA序列的情況下改變基因的功能。 研究?jī)?nèi)容：DNA甲基化、組蛋白乙酰化等。 表觀遺傳學(xué)調(diào)控具有可逆性。,研究背景,Krishna et al. Genetic and epigenetic mechanisms and their possible role in AAA Atherosclerosis 2010.,研究目標(biāo),1.研究AAA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞DNA甲基化和組蛋白乙?；降母淖?。 2.AAA的直徑大小是否與DNA甲基化和組蛋白乙?；淖兓嬖谙嚓P(guān)性 3.與表觀遺傳學(xué)改變密切相關(guān)的酶類的改變,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程圖,正常對(duì)照組,提取DNA,提取組蛋白,提取RNA,DNA濃度測(cè)定,BCA蛋白測(cè)定,RNA濃度測(cè)定,DNA甲基化測(cè)定,組蛋白乙酰化測(cè)定,Real-time PCR,AAA組,Ficoll分離PBMCs,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析： t檢驗(yàn)、 2檢驗(yàn)、相關(guān)性分析,實(shí)驗(yàn)方法,1.一般資料,實(shí)驗(yàn)方法,2.腹主動(dòng)脈瘤直徑,實(shí)驗(yàn)方法,3.引物設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)結(jié)果,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甲基結(jié)合蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果,組蛋白乙?；瘜?shí)驗(yàn)結(jié)果,*,組蛋白去乙酰酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果,H3,DNMT1、MBD2,HDAC1、HDAC7,PBMCs proliferation,結(jié)論,1. 表觀遺傳學(xué)的調(diào)控參與了腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病過程。 2.單個(gè)核細(xì)胞增殖是腹主動(dòng)脈瘤具有免