藥物分析第六章芳酸及其酯類藥物的分析.ppt

芳酸及其酯類藥物的分析,典型藥物,鑒別試驗,含量測定,體內藥分,返回主目錄,練習與思考,雜質檢查,第六章,基本要求,基 本 要 求,一、掌握水揚酸類、苯甲酸類藥物的鑒別和含量測定的基本原理與方法。 二、熟悉其他方酸類藥物鑒別和含量測定的基本原理與方法。 三、了解本類藥物的體內分析方法。,返 回,一、水揚酸類 （一）典型藥物結構,第一節(jié) 典型藥物分類與理化性質,水楊酸（salycylic acid）,阿司匹林（aspirin),對氨基水楊酸鈉 （sodium aminosalicylate),雙水楊酯（salsalate),貝諾酯（benorilate),1.酸性 SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、雙水楊酯均有酸性。 2. 溶解性: 均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。 3. UV和IR光譜特性：分子結構中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。 4. 芳伯氨基和酚羥基特性： 5. 水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應檢查水楊酸,對氨基水 楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。,（二）主要理化性質,（一）典型藥物結構,苯甲酸及其鈉鹽 (benzoic acid ）,二、苯甲酸類,羥苯乙酯(ethylparoben),丙磺舒(probenecid),甲芬那酸(mefenamic acid),（二）主要理化性質,1. 溶解性: 均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。 2. UV和IR光譜特性：分子結構中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。 3. 具有酚羥基特性： 4.分解反應特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸；丙磺舒分解為SO2 5. 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游離的羧基 ，可用 NaOH直接滴定測定其含量。,三、其他芳酸類 (一)典型藥物結構,氯貝丁酯（clofibrate）,布洛芬（ibuprofen）,(二)主要理化性質 1.溶解性：水中不溶，有機溶劑溶解，氯貝丁酯為液 體；布洛芬為固體，有一定熔點。 2.UV和IR特征吸收光譜：基于分子結構中具有苯環(huán)和 特征基團。,返 回,一、與三氯化鐵反應 含有酚羥基藥物可與FeCl3反應；能與FeCl3反應不 一定含酚羥基.,第二節(jié) 鑒別試驗,1. 直接反應 SA在中性或弱酸性條件下，與FeCl3生成紫堇色配 位化合物,丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH 5.06.0中與FeCl3生成米黃色 布洛芬與高氯酸羥胺，N，N-雙環(huán)基己羧二亞胺及高氯酸鐵反應， 即顯紫色JP（14）方法?；诜肿又?COOH的結構。,2. 水解或分解后與三氯化鐵反應,ASA水解成SA后與FeCl3 反應，成紫堇色,二、重氮化-偶合反應 凡是分子結構中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物均可反應。,1. 直接反應 對氨基水楊酸鈉 2. 水解后反應 貝諾酯具有潛在芳伯氨基 3. 甲芬那酸與對-硝基苯重氮鹽在NaOH介質中偶合產 生橙紅色。,+ K2Cr2O7 深藍色 棕綠色 甲芬那酸 + H2SO4 黃色 綠色熒光JP(14),三、氧化反應,1. ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為156 161 。 2. 雙水楊酯水解生成SA：SA的mp為158。 3. 氯貝丁酯堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥肟酸鹽， 在弱酸條件下再與三氯化鐵反應生成紫色的異 羥肟酸鐵。,四、水解反應,1. 苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物，可用于鑒別。 2. 丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3, 經(jīng)硝酸氧化成 Na2SO4。 3. 丙磺舒加熱分解，生成SO2氣體，有臭味,五、分解產物反應,1. 測定max ；min。 例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml； max ； 265nm, 273nm; min。245nm, 271nm。 2. 在max 處測定一定濃度供試液的吸收度A。 例如：羥苯乙酯，5g/ml max =295nm; A = 0.48 3. 在max 處測定供試液的百分吸收系數(shù)。 例如：貝諾酯在max =240nm; E1%1cm = 730760,六、紫外吸收光譜法,4. 在規(guī)定的波長測定吸收度比值（即雙波長吸收度 比值法） 例如：對氨基水楊酸鈉10g/ml; A265/A299 = 1.561.56 再例如：甲芬那酸14g/ml; A278280/A348352 = 1.151.30,七、紅外吸收光譜法,水楊酸的紅外吸收圖譜,37002900cm-1,N-H、 O-H,1660cm-1,C=O,1610,1570 1480,1440,C=C,775cm-1,Ar-H,返 回,37002900cm-1,N-H、 O-H,1640cm-1,N-H,1580cm-1 1500cm-1,C=C,1300cm-1,C-N,1188cm-1,C-O,對氨基水楊酸鈉的紅外吸收圖譜,第三節(jié) 特殊雜質檢查,一、ASA中特殊雜質的檢查 1.溶液的澄清度 主要檢查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水楊酸苯酯；乙酰水楊酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液應澄清。 2. 游離水楊酸檢查 利用SA 可與FeCl3呈色，用比色法檢查。 3. 易炭化物檢查 主要檢查ASA中能被硫酸炭化顯色的低分子有機雜質。采用與標準比色液比色的方法檢查。,主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基 酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴格控制。 雙向滴定法：利用間氨基酚溶于乙醚，取3.0g 樣品用乙醚提取0.02mol/LHCl 測定方法 滴定V0.3ml。 HPLC法：采用內標法，以磺胺作內標（USP）,二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質的檢查,三、羥苯乙酯中有關物質的檢查,BP收載的方法，由于雜質的結構不清，故采用TLC法中的 供試品自身對照法：,固定相：GF254C18化學鍵合硅膠,展開劑：甲醇-水-冰醋酸,反相TLC法,甲芬那酸是以鄰-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下 縮合而成，因此成品藥物中要檢查銅鹽及有關物質。 分光光度法：利用Cu 2+與Na-DDC呈色后測定A 1. 銅鹽檢查法 原子吸收分光光度法：BP（2000） 2. 有關物質的檢查 主要檢查的是酰胺、二甲基苯胺和鄰氯苯甲 酸各國藥典均采用TLC法中的自身高低濃度對照法。,四、甲芬那酸中特殊雜質的檢查,五、氯貝丁酯中特殊雜質的檢查,主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚原料和揮發(fā)性雜質,GC-FID法,HPLC法：以對-羥乙基酚作內標，用正相HPLC,2. 揮發(fā)性雜質的檢查方法 GC法,1. 對氯酚檢查,返 回,一、酸堿滴定法 （一）直接滴定法 基于本類藥物-COOH；可用堿直接滴定，如 ASA的含量測定，其原理如下：,第四節(jié) 含量測定,1. 原理：,2. 條件：,在中性乙醇中，以酚酞作指示劑；摩爾比為1:1。,3. 應用：,多國藥典用于雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定；USP和BP還用于甲芬那酸的測定。,（二）水解后剩余滴定法 1. ASA含量測定,原理：,條件：,水溶液,具體試驗：,I 份NaOH,I 份NaOH,V,VO,Vo-V相當于ASA消耗 硫酸的ml數(shù),ASA% = (Vo V)FT/W 100%,2. 羥苯乙酯的含量測定,（三）兩步滴定法,1. ASA片的含量測定,第一步為中和,ASA + NaOH,ASA-Na + H2O,水解產物SA + NaOH,SA-Na + H2O,酸性穩(wěn)定劑+ NaOH,中性鹽,第二步為水 解與測定,2. 氯貝丁酯含量測定 第一步：中和酸性雜質 第二步：水解與測定,二、亞硝酸鈉滴定法,對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在HCl中與 NaNO2發(fā)生重氮化反應,Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl,Ar-N2Cl + NaCl + 2H2O,因此可用亞硝酸鈉滴定法測定其含量，此法在下章重點討論。,三、雙相滴定法,是指在水相和有機相中的滴定。如苯甲酸鈉的含量測定：,生成的苯甲酸不溶于水，終點pH突躍不明顯，不易觀察。 苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚將滴定中產生的苯甲酸萃取入醚層。因此用雙相滴定可使反應完全終點明顯。,（一）直接紫外分光光度法 丙磺舒片的測定：Ch.P(2000) 在HCl中，采用百分吸收系數(shù)法。 BP(2019)再鹽酸-乙醇,采用百分吸收系數(shù)法. USP(24)用氯仿提取后，采用對照品比較法。,四、紫外分光光度法,（二）離子交換-紫外分光光度法,氯貝丁酯及其制劑 Ch.P(2000)采用酸堿滴定法；當含有酸性雜質對氯酚時，可采用強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質后， 在甲醇溶液中，226nm波長處，采用對照品比較法。 具體計算：W1000 1/100 1/100 = Cu (g/ml) Au/As = Cu/C Cu = C(Au/As) W(mg) = 10 Cu = 10 C(Au/As),（三）柱分配色譜-紫外分光光度法,USP(24)采用此法同時測定ASA膠囊中 ASA和SA。 1. SA的限量測定 色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試 品溶液的制備。,供試品液：CHCl3液,洗脫液1：CHCl3 洗脫液2：HAC- 乙醚,硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素,玻璃棉,硅藻土，Na2CO3,供試品液：CHCl3-HCl液,洗脫液1：HAC-CHCl3 (1:10) 10ml 洗脫液2：HAC- CHCl3 (1:100) 85ml,1-雜質先洗脫 2-SA后洗脫,max=306nm AuAs,1-雜質先洗脫 2-ASA后洗脫,max=280nm ASA(mg)=C(Au/As),2. ASA的含量測定 色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備。,Ch.P(2000)ASA的膠囊劑的含量測定采用此法。 USP（24）ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑，采用此法。,五、HPLC法,（一）ASA栓劑的含量測定,色譜條件：色譜柱ODSC18；流動相為甲醇：0.1%二乙胺：HAC (40:60:4);檢測波長280nm；內標物為咖啡因。 系統(tǒng)適用性試驗： n 2000; ASA與SA與內標物的R 1.5 具體計算： Cx = Rx/RRCR W(g) 1/50 2/50 = Cx W測 = 1250 Cx,標示量% = W測/W W平/標示量100% = Cx 1250 W平/W 標示量100%,色譜條件：色譜柱苯基硅膠柱；流動相為NaH2PO3 0.1% HAC液- 0.1% HAC乙腈液(50:50);檢測波長254nm。 系統(tǒng)適用性試驗： n 3900; T 2.3; 重復性 RSD1.5% 具體計算：,（二）丙磺舒原料的含量測定,W 1/100 = Cu(mg/ml); Cu = Au/As C 供試品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As),返 回,一、血清中ASA和SA濃度的HPLC法 色譜條件：色譜柱為ODS-C18(150mm 4.6mm, 5m) 流動相為甲醇-水-正丁醇(30 :20 :1) 檢測波長為237nm；內標物為苯甲酸。 血清樣品預處理 血清100 l + HClO450 l + 不同濃度ASA和SA + 內標液 渦旋混合2min 離心5min 取上清液20 l進樣。,第五節(jié) 體內藥物分析,回歸方程：以峰高比（H標/H內）對濃度回歸 ASA的回歸方程：Y = 5.810-3 + 5.2910-2X r = 0.9996 SA的回歸方程：Y = 6.010-3 + 8.3310-2X r = 0.9981 ASA和SA的線性范圍分別為：120 g/ml; 230 g/ml 回收率：空白血清 + 五種不同濃度測定，ASA為96.0%106.0%; SA為92.0%119.5%;（五種不同濃度均應在線性范圍內）,色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125mm4mm, 5m) 流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。 檢測波長為254nm；內標物為依他尼酸。 尿樣品預處理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后 用0.5ml蒸餾水活化。 2.0ml尿樣 + 內標300l(10g/ml) 上柱 1.0ml水洗 脫生物雜質 再用甲醇0.5ml洗脫保留在柱上的丙磺舒和內 標。洗脫液0.45m浸濾膜濾過，取5l直接進樣分析。,二、尿中丙磺舒的固相萃取凈化-HPLC法(運動員違禁藥物),線性關系和回收率： 取空白尿樣2.0ml +不同濃度丙磺舒+內標液 按上述方法 分析(濃度范圍為0.1g/ml 100g/ml) ;A丙/A內對C丙回歸。 回收率：丙磺舒為100%3%(n=14)；內標為101%3%(n=12)； 人尿樣測定：丙磺舒(單劑量500mg)尿排泄藥-時曲線(見P136),三、HPLC法測定人血漿中布洛芬含量 色譜條件：色譜柱為Shim-packCLC-ODS(150mm6mm, 10m) 預柱為YWG-C18；流動相為甲醇-20mol/L磷酸二氫 鉀沖溶液(70:30, pH=4.0); 流速為1.0ml/min; 檢測波長為221nm；內標物為肉桂酸。 樣品預處理：取肝素抗凝血漿0。24ml+內標液+甲醇0.5ml,振蕩 混勻，離心(1000r/min)15min,取上清液10 l直 接進樣分析。布洛芬和肉桂酸t(yī)R為5.15和2.85min。,回歸方程：以對照品與內標的峰高比對濃度回歸，其回歸方程為： Y = 4.05 10-2C 2.0 10-3, r = 0.9999。 回收率測定：空白血漿 + 布洛芬對照品高、中、低三種濃度， 按樣品處理項下測定，測得平均回收率為99.2 1.6%。 精密度：日內精密度為RSD1.8%；日間精密度為2.8%。,1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0h自肘靜脈 取血1.5ml，肝素抗凝，按“樣品處理