高中生物總復(fù)習(xí) 專(zhuān)題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課件 新人教版選修1.ppt

專(zhuān)題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 一 微生物的培養(yǎng) 一 培養(yǎng)基1 概念 人們按照微生物對(duì)的不同需求 配制出的供其的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì) 2 營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成 一般都含有水 氮源 生長(zhǎng)因子 還需滿(mǎn)足不同微生物對(duì)ph 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及o2的要求 生長(zhǎng)繁殖 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 碳源 無(wú)機(jī)鹽 二 無(wú)菌技術(shù)1 消毒 1 特點(diǎn) 使用較為的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物 不包括芽孢和 2 常用方法 煮沸消毒法 化學(xué)藥劑消毒法 溫和 孢子 巴氏消毒法 2 滅菌 1 特點(diǎn) 指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外包括芽孢和孢子 2 常用方法 灼燒滅菌 干熱滅菌 滅菌 所有的微生物 高壓蒸汽 三 微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1 配制培養(yǎng)基稱(chēng)量 混合 溶化 調(diào)ph 分裝 包扎 2 滅菌 加水 加培養(yǎng)基 密封 排冷氣 維持壓力 取出倒平板 或擱置斜面 3 接種 1 接種過(guò)程 洗凈雙手 點(diǎn)燃酒精燈 接種 貼標(biāo)簽 2 接種工具 包括 涂布器 3 接種方法 平板劃線法 法 4 注意事項(xiàng) 整個(gè)操作過(guò)程都要在旁完成 4 培養(yǎng) 接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 接種環(huán) 稀釋涂布平板 酒精燈火焰 四 菌種保藏1 臨時(shí)保藏 1 操作 采用固體斜面培養(yǎng)基 菌落長(zhǎng)成后 放入4 冰箱中保藏 以后每3 6個(gè)月 轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基 2 缺點(diǎn) 保存時(shí)間不長(zhǎng) 菌種易被污染或產(chǎn)生變異 2 長(zhǎng)期保存法 甘油管藏法 放在 20 下保存 二 微生物的應(yīng)用 一 土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1 菌種篩選 1 培養(yǎng)基 2 特點(diǎn) 是唯一氮源 選擇培養(yǎng)基 尿素 2 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 1 計(jì)算方法 稀釋涂布平板法 顯微鏡直接計(jì)數(shù) 3 設(shè)置對(duì)照 1 對(duì)照實(shí)驗(yàn) 是指除了外 其他條件都相同的實(shí)驗(yàn) 2 主要目的 排除實(shí)驗(yàn)組中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響 被測(cè)試的條件 非測(cè)試因素 二 分解纖維素的微生物的分離 纖維素分解菌的篩選1 土壤取樣 選擇富含纖維素的環(huán)境 2 將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 1 制備鑒別培養(yǎng)基 主要碳源cmc na 2 剛果紅染色法 先培養(yǎng) 再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng) 時(shí)加入剛果紅 微生物 倒平板 3 進(jìn)一步鑒定 1 為確定得到的菌是否是纖維素分解菌 還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn) 2 測(cè)定方法一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的進(jìn)行定量測(cè)定 葡萄糖 一 微生物的培養(yǎng) 一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1 培養(yǎng)基 1 概念 人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求 配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì) 2 分類(lèi)和應(yīng)用 3 培養(yǎng)基配方及營(yíng)養(yǎng)要素基本營(yíng)養(yǎng)要素 各種培養(yǎng)基一般都含有水 碳源 氮源 無(wú)機(jī)鹽 此外還要滿(mǎn)足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)ph 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求 特別提醒 1 微生物最常用的碳源是糖類(lèi) 尤其是葡萄糖 最常利用的氮源是銨鹽 硝酸鹽 2 對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō) 含c h o n的有機(jī)化合物既是碳源 又是氮源 能源 3 有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 生物自己能合成 如大腸桿菌能合成某些維生素 作為特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 4 制備 計(jì)算 稱(chēng)量 溶化 滅菌 倒平板 2 無(wú)菌技術(shù) 1 消毒和滅菌的區(qū)別 特別提醒 用酒精消毒時(shí) 70 的酒精殺菌效果最好 原因是 濃度過(guò)高 使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜 乙醇分子不能滲入其中 濃度過(guò)低 殺菌力減弱 2 無(wú)菌技術(shù)主要操作要求a 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)操作空間 操作人員消毒 對(duì)所用器具和培養(yǎng)基滅菌 b 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)需在酒精燈火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)操作 另外要避免已滅菌處理材料再次污染 二 純化大腸桿菌以及菌種的保藏1 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計(jì)算 稱(chēng)量 溶化 滅菌 倒平板 2 純化大腸桿菌 1 原理 在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞 使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落 這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落 2 方法 平板劃線法 稀釋涂布平板法 平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作 將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面 稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 進(jìn)行培養(yǎng) 3 菌種的保藏 1 短期保存 固體斜面培養(yǎng)基上4 保存 菌種易被污染或產(chǎn)生變異 2 長(zhǎng)期保存 20 甘油管在冷凍箱中保藏 特別提醒 平板冷凝后 皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 解析 滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物 包括芽孢和孢子 而消毒僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物 不包括芽孢和孢子 答案 b 二 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1 分離的原理 1 土壤中的細(xì)菌之所以能夠分解尿素 是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)能合成脲酶 這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起催化作用 2 實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理 人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件 包括營(yíng)養(yǎng) 溫度 ph等 同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng) 2 分離分解尿素的細(xì)菌所使用的特定培養(yǎng)基分離分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基應(yīng)為選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中的氮源只有尿素 理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長(zhǎng) 其配方如下 kh2po41 4gna2hpo42 1gmgso4 7h2o0 2g 葡萄糖10 0g尿素 唯一氮源 1 0g瓊脂15 0g將上述物質(zhì)溶解后 用自來(lái)水定容到1000ml 3 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法 1 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 原理 利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 方法 用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù) 缺點(diǎn) 不能區(qū)分死菌與活菌 2 間接計(jì)數(shù)法 活菌計(jì)數(shù)法 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí) 培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落 來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌 操作a 設(shè)置重復(fù)組 增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性 b 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確 一般選擇菌落數(shù)在30 300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù) 2 可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是 a 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑b 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑c 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹 試劑d 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 解析 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中 不能分解尿素獲得氮源的細(xì)菌不能生長(zhǎng) 而分解尿素的細(xì)菌能利用尿素作氮源 將尿素分解為氨 使ph升高 若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 指示劑將變紅 此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基 又屬于鑒別培養(yǎng)基 答案 a 三 分解纖維素的微生物的分離1 分解纖維素的微生物的分離 1 實(shí)驗(yàn)原理 2 實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣 富含纖維素的環(huán)境 選擇培養(yǎng) 用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng) 以增加纖維素分解菌的數(shù)量 梯度稀釋 涂布平板 將樣品涂布于鑒別含cr的纖維素分解菌的培養(yǎng)基 固體 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈 2 兩種剛果紅染色法的比較 特別提醒 1 選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度 確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物 2 涉及到的微生物技術(shù)主要有 培養(yǎng)基的配制 無(wú)菌操作技術(shù) 稀釋涂布平板法 選擇培養(yǎng)基的作用 土壤取樣等 3 如圖為分離并統(tǒng)計(jì)分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程 據(jù)此回答有關(guān)問(wèn)題 1 要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌 從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋?這說(shuō)明 2 某同學(xué)根據(jù)需要 配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作 纖維素粉nano3na2hpo4 7h2okh2po45g1g1 2g0 9gmgso4 7h2okcl酵母膏 水解酪素0 5g0 5g適量 如果將其中的纖維素粉換成 菌落數(shù) 即可說(shuō)明選擇培養(yǎng)基的作用 3 接種微生物最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法 本實(shí)驗(yàn)宜采用 法 原因是 解析 1 因?yàn)槔w維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性 生活在不同的環(huán)境中 故要根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求 到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找 2 因?yàn)槠咸烟鞘抢w維素水解的 是能被微生物直接利用的有機(jī)小分子 所以如果將其中的纖維素粉換成葡萄糖 纖維素分解菌及其他細(xì)菌會(huì)生長(zhǎng)繁殖得更快 故菌