高中生物總復(fù)習(xí) 專題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課件 新人教版選修1.ppt

專題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 一 微生物的培養(yǎng) 一 培養(yǎng)基1 概念 人們按照微生物對的不同需求 配制出的供其的營養(yǎng)基質(zhì) 2 營養(yǎng)構(gòu)成 一般都含有水 氮源 生長因子 還需滿足不同微生物對ph 特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及o2的要求 生長繁殖 營養(yǎng)物質(zhì) 碳源 無機鹽 二 無菌技術(shù)1 消毒 1 特點 使用較為的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物 不包括芽孢和 2 常用方法 煮沸消毒法 化學(xué)藥劑消毒法 溫和 孢子 巴氏消毒法 2 滅菌 1 特點 指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外包括芽孢和孢子 2 常用方法 灼燒滅菌 干熱滅菌 滅菌 所有的微生物 高壓蒸汽 三 微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1 配制培養(yǎng)基稱量 混合 溶化 調(diào)ph 分裝 包扎 2 滅菌 加水 加培養(yǎng)基 密封 排冷氣 維持壓力 取出倒平板 或擱置斜面 3 接種 1 接種過程 洗凈雙手 點燃酒精燈 接種 貼標(biāo)簽 2 接種工具 包括 涂布器 3 接種方法 平板劃線法 法 4 注意事項 整個操作過程都要在旁完成 4 培養(yǎng) 接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 接種環(huán) 稀釋涂布平板 酒精燈火焰 四 菌種保藏1 臨時保藏 1 操作 采用固體斜面培養(yǎng)基 菌落長成后 放入4 冰箱中保藏 以后每3 6個月 轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基 2 缺點 保存時間不長 菌種易被污染或產(chǎn)生變異 2 長期保存法 甘油管藏法 放在 20 下保存 二 微生物的應(yīng)用 一 土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)1 菌種篩選 1 培養(yǎng)基 2 特點 是唯一氮源 選擇培養(yǎng)基 尿素 2 統(tǒng)計菌落數(shù)目 1 計算方法 稀釋涂布平板法 顯微鏡直接計數(shù) 3 設(shè)置對照 1 對照實驗 是指除了外 其他條件都相同的實驗 2 主要目的 排除實驗組中對實驗結(jié)果的影響 被測試的條件 非測試因素 二 分解纖維素的微生物的分離 纖維素分解菌的篩選1 土壤取樣 選擇富含纖維素的環(huán)境 2 將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 1 制備鑒別培養(yǎng)基 主要碳源cmc na 2 剛果紅染色法 先培養(yǎng) 再加入剛果紅進行顏色反應(yīng) 時加入剛果紅 微生物 倒平板 3 進一步鑒定 1 為確定得到的菌是否是纖維素分解菌 還需進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗 2 測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的進行定量測定 葡萄糖 一 微生物的培養(yǎng) 一 微生物的實驗室培養(yǎng)1 培養(yǎng)基 1 概念 人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求 配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì) 2 分類和應(yīng)用 3 培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素基本營養(yǎng)要素 各種培養(yǎng)基一般都含有水 碳源 氮源 無機鹽 此外還要滿足不同微生物生長對ph 特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求 特別提醒 1 微生物最常用的碳源是糖類 尤其是葡萄糖 最常利用的氮源是銨鹽 硝酸鹽 2 對異養(yǎng)微生物來說 含c h o n的有機化合物既是碳源 又是氮源 能源 3 有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì) 生物自己能合成 如大腸桿菌能合成某些維生素 作為特殊營養(yǎng)物質(zhì) 4 制備 計算 稱量 溶化 滅菌 倒平板 2 無菌技術(shù) 1 消毒和滅菌的區(qū)別 特別提醒 用酒精消毒時 70 的酒精殺菌效果最好 原因是 濃度過高 使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護膜 乙醇分子不能滲入其中 濃度過低 殺菌力減弱 2 無菌技術(shù)主要操作要求a 實驗前應(yīng)對操作空間 操作人員消毒 對所用器具和培養(yǎng)基滅菌 b 實驗進行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作 另外要避免已滅菌處理材料再次污染 二 純化大腸桿菌以及菌種的保藏1 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計算 稱量 溶化 滅菌 倒平板 2 純化大腸桿菌 1 原理 在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞 使其長成單個的菌落 這個菌落就是一個純化的細菌菌落 2 方法 平板劃線法 稀釋涂布平板法 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作 將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面 稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋 然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 進行培養(yǎng) 3 菌種的保藏 1 短期保存 固體斜面培養(yǎng)基上4 保存 菌種易被污染或產(chǎn)生變異 2 長期保存 20 甘油管在冷凍箱中保藏 特別提醒 平板冷凝后 皿蓋上會凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 解析 滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物 包括芽孢和孢子 而消毒僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物 不包括芽孢和孢子 答案 b 二 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1 分離的原理 1 土壤中的細菌之所以能夠分解尿素 是因為它們體內(nèi)能合成脲酶 這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起催化作用 2 實驗室中微生物篩選的原理 人為提供有利于目的菌株生長的條件 包括營養(yǎng) 溫度 ph等 同時抑制或阻止其他微生物生長 2 分離分解尿素的細菌所使用的特定培養(yǎng)基分離分解尿素的細菌的培養(yǎng)基應(yīng)為選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中的氮源只有尿素 理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長 其配方如下 kh2po41 4gna2hpo42 1gmgso4 7h2o0 2g 葡萄糖10 0g尿素 唯一氮源 1 0g瓊脂15 0g將上述物質(zhì)溶解后 用自來水定容到1000ml 3 統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法 1 顯微鏡直接計數(shù)法 原理 利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板 在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 方法 用計數(shù)板計數(shù) 缺點 不能區(qū)分死菌與活菌 2 間接計數(shù)法 活菌計數(shù)法 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時 培養(yǎng)基表面生長的一個菌落 來源于樣品稀釋液中的一個活菌 通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中大約含有多少活菌 操作a 設(shè)置重復(fù)組 增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性 b 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確 一般選擇菌落數(shù)在30 300的平板進行計數(shù) 2 可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是 a 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑b 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑c 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹 試劑d 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 解析 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中 不能分解尿素獲得氮源的細菌不能生長 而分解尿素的細菌能利用尿素作氮源 將尿素分解為氨 使ph升高 若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 指示劑將變紅 此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基 又屬于鑒別培養(yǎng)基 答案 a 三 分解纖維素的微生物的分離1 分解纖維素的微生物的分離 1 實驗原理 2 實驗流程土壤取樣 富含纖維素的環(huán)境 選擇培養(yǎng) 用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng) 以增加纖維素分解菌的數(shù)量 梯度稀釋 涂布平板 將樣品涂布于鑒別含cr的纖維素分解菌的培養(yǎng)基 固體 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈 2 兩種剛果紅染色法的比較 特別提醒 1 選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度 確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物 2 涉及到的微生物技術(shù)主要有 培養(yǎng)基的配制 無菌操作技術(shù) 稀釋涂布平板法 選擇培養(yǎng)基的作用 土壤取樣等 3 如圖為分離并統(tǒng)計分解纖維素的微生物的實驗流程 據(jù)此回答有關(guān)問題 1 要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌 從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋?這說明 2 某同學(xué)根據(jù)需要 配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下 整個實驗過程嚴格執(zhí)行無菌操作 纖維素粉nano3na2hpo4 7h2okh2po45g1g1 2g0 9gmgso4 7h2okcl酵母膏 水解酪素0 5g0 5g適量 如果將其中的纖維素粉換成 菌落數(shù) 即可說明選擇培養(yǎng)基的作用 3 接種微生物最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法 本實驗宜采用 法 原因是 解析 1 因為纖維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性 生活在不同的環(huán)境中 故要根據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求 到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找 2 因為葡萄糖是纖維素水解的 是能被微生物直接利用的有機小分子 所以如果將其中的纖維素粉換成葡萄糖 纖維素分解菌及其他細菌會生長繁殖得更快 故菌