食品安全檢驗(yàn)技術(shù)-廣東海洋大學(xué).ppt

食品安全檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn) 課程簡介 食品安全檢驗(yàn)技術(shù) 面向 食品質(zhì)量與安全 專業(yè)本科生 主要介紹食品中危害殘留物質(zhì)的檢驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)課程為該課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)節(jié) 要求學(xué)生能根據(jù)檢驗(yàn)內(nèi)容選擇合適的分析方法 根據(jù)檢測結(jié)果對食品安全性進(jìn)行評價 共有學(xué)時數(shù)20學(xué)時 實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容包括 蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)測定 等 實(shí)驗(yàn)教學(xué)中包括技能型和綜合型實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié) 以提高學(xué)生的安全檢測操作能力和綜合應(yīng)用能力 實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定 綜合型 實(shí)驗(yàn)二對蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測 技能型 實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測 技能型 實(shí)驗(yàn)四飲料中食用合成著色劑的測定 設(shè)計(jì)型 目錄 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學(xué)法測定的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法 比較兩種常見的生物化學(xué)測定法 酶抑制率法和速測卡法的異同 培養(yǎng)學(xué)生綜合運(yùn)用理論知識 分析和解決問題的能力 實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定 實(shí)驗(yàn)原理 生物化學(xué)測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法和酶抑制率法 速測卡法的原理是根據(jù)膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯 紅色 水解為乙酸和靛酚 藍(lán)色 有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用 使催化水解 變色的過程發(fā)生改變 由此可判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在 酶抑制率法的原理是在一定條件下 有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用 其有抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān) 正常情況下酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿 膽堿在顯色劑的作用下產(chǎn)生黃色物質(zhì) 該黃色在412nm處有特征吸收峰 用可見分光光度計(jì)或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀進(jìn)行測定 實(shí)驗(yàn)步驟 1 速測卡法 紙片法 檢測 滴2 3滴洗脫液在菜葉正面近葉尖部分 用另一片菜葉滴葉處輕輕摩擦 取一片速測卡 將菜葉上洗出的水滴1滴在白色藥片上 靜置10min 將速測卡對折 用手捏3min 打開速測卡 白色藥片變藍(lán)色為正常反應(yīng) 不變藍(lán)或顯淡藍(lán)色說明有過量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留 每批同時做一片無農(nóng)藥對照 實(shí)驗(yàn)步驟 2 酶抑制率法檢測 取2g切碎樣本 置提取瓶內(nèi) 加入20mL提取試劑 震蕩1 2min 倒出上清液 靜置3 5min 于平底小試管中加入50 L酶液 3mL樣品提取液 50 L顯色劑 在37 38 下培養(yǎng)30min 于待測的小試管內(nèi)加入50 L底物 倒入比色杯內(nèi) 進(jìn)行儀器測定 同時做對照組 對照組的平底小試管中用3mL提取試劑代替樣本提取液 注意事項(xiàng) 1 速測卡法檢測中 當(dāng)溫度低于37 時 酶反應(yīng)的速度隨之放慢 藥片加液后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長 延長時間的確定 應(yīng)以空白對照卡用手指捏3min時可以變藍(lán) 2 速測卡法檢測中 預(yù)反應(yīng)后藥片表面必須保持潤濕 3 采用酶抑制率法測定韭菜 生姜 蔥 蒜 辣椒 胡蘿卜等蔬菜中農(nóng)藥時 不要剪得太碎 浸提時間不能太長 對于這類蔬菜必要時可采取整株浸提 一些葉綠素含量較高的蔬菜也是如此 4 當(dāng)溫度條件低于37 時 加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)適當(dāng)延長 延長時間的確定應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化A0值在0 3以上 即可往下操作 5 當(dāng)吸光度過大無法讀取時 說明測定溶液渾濁有干擾 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?進(jìn)一步學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法 確實(shí)掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果的分析 實(shí)驗(yàn)二對蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測 實(shí)驗(yàn)原理 抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學(xué)反應(yīng) 以競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)為例 酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)體中的非標(biāo)記抗原 氯霉素 具有相同的與抗體結(jié)合的能力 兩者競爭與固相載體包被的抗體結(jié)合反應(yīng) 洗滌多余的酶標(biāo)抗原 加酶反應(yīng)的底物后 底物被酶催化顯色 故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析 在整個反應(yīng)當(dāng)中 樣品中氯霉素含量越多 反應(yīng)顯色就越淡 反之 樣品中氯霉素含量越少 則顯色越深 實(shí)驗(yàn)步驟 1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 從冰箱取出試劑盒 將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃縮萃取稀釋液 濃縮洗滌液 酶標(biāo)記物 底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫30min 配制原倍萃取稀釋液及洗滌液 用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液都分別用蒸餾水按1 9的比例稀釋 實(shí)驗(yàn)步驟 2 樣品制備 將3g對蝦肉剪碎后放入50mL帶塞離心管中 加入6mL乙酸乙酯 用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約1min 再震蕩約30s 離心 3000rpm 10min 取2mL上清液至玻璃管中 于50 下氮?dú)獯蹈?于上述玻璃管中加入正己烷2mL 先將殘余物完全溶解后 再加入1mL原倍萃取稀釋液 震蕩約30s 離心 3000rpm 10min 用吸管吸去上層液及中間乳化層部分 棄掉 取下層液備用 實(shí)驗(yàn)步驟 3 操作測定 取一定的微量測試孔條 于適當(dāng)微孔中分別加入100 L標(biāo)準(zhǔn)溶液 六個濃度 在另外的微孔中加入100 L已完成前處理的樣品溶液 在每一微孔中加入50 L酶標(biāo)記物 輕敲盤子四周 使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1h 甩掉微孔中的反應(yīng)液 再將洗液加滿每一微孔后甩掉 重復(fù)洗3次 最后一次甩掉洗液后 在吸水紙上拍干 于每一微孔中加入底物溶液100 L后 輕敲盤子四周 使其充分混合 室溫下避光靜置溫育20min 于每一微孔中加入100 L反應(yīng)終止液 用酶標(biāo)儀于波長450nm下判讀 注意事項(xiàng) 1 使用前先將試劑盒置于室溫下 回溫30min 回溫后 取出所需微量測試孔條 將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好 置于4 保存 2 濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋 3 每次吸取不同的液體時一定要換移液槍的吸頭 4 加樣時必須小心勿濺出微孔外 以免造成其他微孔的污染 加樣品或試劑時槍頭請勿接觸微孔 5 洗滌必須充分 重復(fù)3次 6 溫育時 要蓋上塑料片或標(biāo)簽紙 置于暗處 溫育時間不夠不要隨意取出 7 試劑盒較貴且量很少 請準(zhǔn)確量取 不要造成浪費(fèi) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握分光光度法檢測魚肉中組胺含量的實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)方法 培養(yǎng)學(xué)生分析和解決問題的能力 實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?魚體中的組胺用正戊醇提取后 與偶氮試劑反應(yīng)顯橙色 與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量 最低檢出濃度為5mg 100g 實(shí)驗(yàn)步驟 1 組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2 樣品中組胺的提取取10g切碎的魚肉于具塞錐形瓶中 加入20mL三氯乙酸 100g L 60 水浴中浸泡30min 過濾 取2 0mL濾液于分液漏斗中 加氫氧化鈉溶液 250g L 使呈堿性 pH9 10 加入3mL正戊醇 振搖5min 提取三次 合并三次的正戊醇提取液并用正戊醇定容至10 0mL 吸取2 0mL正戊醇提取液于分液漏斗中 用鹽酸 1 1 振搖提取3次 合并鹽酸提取液并定容至10 0mL 備用 實(shí)驗(yàn)步驟 3 樣品中組胺的測定取1 0mL鹽酸提取液于10mL比色管中 加水至2mL 同時取0 00 0 20 0 40 0 60 0 80 1 00mL組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于10mL比色管中 加水到1mL 再各加1mL鹽酸 1 1 標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管各加3mL碳酸鈉溶液 50g L 3mL偶氮試劑 加水至10 0mL 混勻 放置10min后以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn) 于480nm處測比色測定 并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 注意事項(xiàng) 1 偶氮試劑必須臨配現(xiàn)用 2 用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的組胺時 必須用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至堿性 使組胺游離便于提取 而在用鹽酸 1 1 提取時則必須使溶液呈酸性 使組胺能成為鹽酸鹽而溶于鹽酸提取液中 3 組胺測定過程中 標(biāo)準(zhǔn)管和測定各管的條件必須控制一致 保證顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性和一致性 4 組胺與偶氮試劑的反應(yīng)須在弱堿性條件下進(jìn)行 且反應(yīng)時間控制10min 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過本實(shí)驗(yàn) 要求學(xué)生熟悉在食品安全性檢驗(yàn)過程中 綜合運(yùn)用所學(xué)理論知識進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的總體原則和基本方法 掌握薄層色譜 分光光度法分離和測定合成著色劑的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法 進(jìn)一步了解我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)對食用合成色素的規(guī)定以及我國飲料中添加劑的使用情況 培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力 獨(dú)立分析和解決問題的能力以及綜合運(yùn)用知識的能力 實(shí)驗(yàn)四飲料中食用合成著色劑的測定 設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 學(xué)生自主選擇市售的各種飲料 根據(jù)所學(xué)的基礎(chǔ)理論知識 結(jié)合現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件 通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料 設(shè)計(jì)簡易可行的實(shí)驗(yàn)方案 對飲料中莧菜紅 胭脂紅 檸檬黃 日落黃及亮藍(lán)5種食用合成著色劑進(jìn)行提取 分離以及定性和定量檢測 根據(jù)我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 對市售飲料中合成著色劑的使用情況進(jìn)行評價和比較 實(shí)驗(yàn)要求 本實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生有目的地選擇市售飲料 每組至少選擇三種 每班至少選擇20種 根據(jù)所選飲料的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目要求獨(dú)立設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)備和完成實(shí)驗(yàn)并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和討論 每組提供完整的實(shí)驗(yàn)報告一份 綜合各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 每