5-中藥指紋圖譜.ppt

2020 2 25 1 SouthernMedicalUniversity 第五章中藥指紋圖譜FingerprintsofChineseMateriaMedica 2020 2 25 2 同一個(gè)成藥 療效一致嗎 中藥材不同品種 產(chǎn)地 加工 不同廠家 不同工藝 不同輔料 2020 2 25 3 2020 2 25 4 2020 2 25 5 含量一致 療效一致 不同廠家銀杏提取物的色譜指紋圖譜 Rb1 Re Rg1 A 0 94 B 0 52 C 0 24 D 0 03 有效成分含量懸殊的人參GreatdisparityamongindividualGinsengroots 2020 2 25 7 白芷原藥材與硫熏后的藥材質(zhì)量比較SeriouslossofmajorbioactivecomponentsinBaizhibysulfur fumigationProcess AngelicaeFormosanaeRadix 白芷 A Typicalsampleof BaiZhi B Sulfurfumedsampleof Baizhi currentpopularpractice Thesulfur fumigatedsampleshowedthemajorcoumarincontentshavebeendestroyedseriously lost60 80 Imporatorin Isoimporatorin 11Oxypeucedanin1013cnidilin12791234568 AB A B 2020 2 25 8 SharpcontrastofcrudedrugandslicesfordecoctionofPaeoniaeRadix 白芍 withdifferentcontentsofactiveglycosidesrespectively 有害的飲片加工 硫熏干燥的白芍飲片活性成分大減ActiveingredientsdeclinedBaishaoslicesfordecoctioncomparedwiththenaturaldriedcrudedrug Paeoniflorin sulphite 2020 2 25 9 質(zhì)量相差懸殊的 連翹 藥材Greatdisparityofingredientsindifferent Lianqiao crudedrugs 青翹 老翹 無籽老翹所含有效成分遞減 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 10 2010版藥典丹參提取物指紋圖譜 原兒茶醛 迷迭香酸 丹酚酸B 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 11 中藥指紋圖譜的含義 掌握 中藥經(jīng)適當(dāng)處理后 采用一定的分析手段 得到的能夠標(biāo)示該中藥特征的共有峰的圖譜 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 12 中藥指紋圖譜的特性 掌握 穩(wěn)定性 重現(xiàn)性 整體性 模糊性 特征性 在規(guī)定的方法與條件下 不同的操作者和不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能重復(fù) 能反映中藥有效部位所含大部分成分的種類 或指標(biāo)成分的全部 能特征地區(qū)分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 13 指紋圖譜研究的主要目的 對(duì)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充和提高 控制原料 中間體 成品的一致性 控制工藝 減少批間差異 2020 2 25 14 相同處方 不同工藝 療效 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 15 指紋圖譜中應(yīng)包含的信息 對(duì)于中藥材和中藥飲片 種的共性 用藥部位的共性 產(chǎn)地的個(gè)性 采收期 炮制方法的個(gè)性信息 對(duì)于半成品和中藥制劑 原藥材 甚至輔料 的信息 工藝信息等 藥效信息 藥效信息 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 16 二 指紋圖譜研究手段 色譜技術(shù)光譜技術(shù)UVIR波譜技術(shù)MSNMRX 射線衍射法分子生物學(xué)技術(shù) TLCHPLC LC MSGC GC MSHPCE CE MS 色譜指紋圖譜 薄層色譜 薄層色譜ThinLayerChromatography TLC 可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品 時(shí)效高 所用的是正相展開劑 其組成變化靈活 可適應(yīng)多種成分的分離 離線操作 即可直觀比較圖譜 又可掃描得到輪廓圖和處理數(shù)據(jù) 占機(jī)時(shí)間短 具有色彩參數(shù) 可獲得色彩豐富的色譜圖像 直觀性強(qiáng) 同時(shí)輔以功能團(tuán)顯色劑還可提示成分的類別 提高鑒別的專屬性 展距局限在10cm 20cm 柱效 相對(duì)較低 對(duì)復(fù)雜組分不提高分離度則難以提取指紋特征的藥材受到限制 開放系統(tǒng) 對(duì)環(huán)境溫度 相對(duì)濕度要求較高 2020 2 25 18 TLC舉例 區(qū)分不同品種 2020 2 25 19 TLC舉例 監(jiān)控工藝 高效液相色譜 反相高效液相色譜 RP HPLC ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography 適用范圍廣 分離性能好 分析速度快 流動(dòng)相選擇范圍寬 靈敏度高 色譜柱可多次重復(fù)使用 流出組分可以收集 采用多種檢測(cè)器 可同時(shí)獲取保留值信息和化合物的光譜 質(zhì)譜信息 對(duì)較為復(fù)雜的色譜實(shí)驗(yàn)條件要求比較苛刻 由此帶來不同實(shí)驗(yàn)室之間重現(xiàn)性的難度增大 2020 2 25 21 2020 2 25 22 I III II 訶子 小訶子 大訶子 絨毛訶子 訶子指紋圖譜 GCHPCE 氣相色譜GasChromatography GC 分離效能高 分析速度快 適用于植物的揮發(fā)油成分及其它易揮發(fā)性成分或可轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的成分測(cè)定 可提供保留值信息 與質(zhì)譜聯(lián)用 還可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息 分辨率高 得到的色譜組份非常復(fù)雜 尤其是含揮發(fā)油藥材 單萜類成分組成很不穩(wěn)定 樣品間差異可能很大 處理數(shù)據(jù)和判別相似度時(shí)一定程度的取舍 毛細(xì)管電泳CapillaryElectrophoresis 分離效能高 分析速度快 高分辨率 可與紫外 熒光 電化學(xué) 質(zhì)譜 拉曼光譜等聯(lián)用 可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息 2020 2 25 24 肉桂油的氣相色譜指紋圖譜 2020 2 25 25 2020 2 25 26 2020 2 25 27 獨(dú)活GC指紋圖譜 羌活GC指紋圖譜 2020 2 25 28 HPCE指紋圖譜 高效液相色譜 紅外光譜 IR InfraredSpectra 幾乎所有的物質(zhì)都有特征的紅外光譜 雖然植物中藥提取物還是一個(gè)混合物 但是由于不同物質(zhì)的紅外光譜具有加合性 因此 植物中藥提取物的紅外光譜能反映出所有成分的綜合信息因而具有全息光譜的特點(diǎn) 操作簡(jiǎn)便 不需要復(fù)雜的提取儀器 快速 準(zhǔn)確 經(jīng)濟(jì) 溶劑低毒 重復(fù)性高 實(shí)用性強(qiáng) 2020 2 25 30 紅外光譜圖 中國(guó)藥典規(guī)定 小薊在開花時(shí)采 根據(jù)1384cm 1處吸收峰的有無 可以鑒別其采集時(shí)間是否正確 小薊丁酮提取物的紅外指紋圖譜 2020 2 25 31 三 指紋圖譜構(gòu)建程序 2020 2 25 32 一 樣品收集 最關(guān)鍵的步驟真實(shí)性代表性10批以上原藥材 不同產(chǎn)地 不同采收季節(jié)等 2020 2 25 33 Referencefingerprint 2020 2 25 34 二 供試品溶液制備 原則1 確保中藥中的主要化學(xué)成分或有效成分在圖譜中得以體現(xiàn)2 所含成分的理化性質(zhì)和檢測(cè)方法 2020 2 25 35 二 供試品溶液制備 1 原藥材 飲片供試品溶液的制備盡可能與生產(chǎn)工藝的提取溶劑接近或一致定量操作進(jìn)行 2020 2 25 36 二 供試品溶液制備 2 半成品 中間體供試品溶液的制備參考制劑和產(chǎn)品制備工藝 2020 2 25 37 二 供試品溶液制備 2 中藥制劑供試品溶液的制備直接使用 稀釋或溶劑提取的方式 2020 2 25 38 三 對(duì)照品 參照物 溶液制備 1 參照物的選擇道地藥材 飲片半成品制劑主要活性成分或指標(biāo)成分內(nèi)標(biāo)物2 合適溶劑 2020 2 25 39 四 指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究 原則 專屬性 整體性 重現(xiàn)性試驗(yàn)方法試驗(yàn)條件 2020 2 25 40 液相色譜 色譜柱 比較試驗(yàn)加以選擇 2020 2 25 41 流動(dòng)相 至少用三種不同組成比較 2020 2 25 42 適宜的柱溫和檢測(cè)波長(zhǎng) 15 20 25 30 35 203 210 236 254 365 2020 2 25 43 五 方法學(xué)驗(yàn)證 1 穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液的穩(wěn)定性 2020 2 25 44 表3川芎指紋圖譜穩(wěn)定性試驗(yàn)相似度計(jì)算結(jié)果 n 5 2020 2 25 45 五 方法學(xué)驗(yàn)證 3 重復(fù)性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性n 5峰面積比值RSD不大于3 保留時(shí)間 平均相對(duì)保留時(shí)間 1min 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 46 注意事項(xiàng) HPLC和GC指紋圖譜 記錄時(shí)間一般為1小時(shí) TLC指紋圖譜 須提供從原點(diǎn)至溶劑前沿的圖譜 光譜方法制定指紋圖譜 必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜 對(duì)于化學(xué)成分類型復(fù)雜品種 必要時(shí)可建立多張指紋圖譜 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 47 四 指紋圖譜分析步驟 標(biāo)定共有指紋峰 確定參照峰 非共有峰總面積不得大于總峰面積的10 計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間 峰面積比 給出標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照 指紋圖譜及數(shù)據(jù) 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 48 五 指紋圖譜的評(píng)價(jià) 要求 準(zhǔn)確的辨認(rèn) 而不是 精密的測(cè)量 比較供試品與對(duì)照品的色譜指紋圖譜要求 相似 而不是 相同 評(píng)價(jià)色譜比較的結(jié)果 是根據(jù)其模糊屬性 著眼于宏觀的規(guī)律性的特征分析 即著重辨認(rèn)完整色譜的 圖貌 而不是求索細(xì)枝末節(jié) 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 49 指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 直觀分析比較 看一看量化數(shù)據(jù)比較 算一算 重疊率 相似率等 計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià) 與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 50 重疊率和相似率計(jì)算 重疊率 共有峰數(shù) 2 指紋圖譜峰數(shù) 供試品峰數(shù) 100 特征指紋峰相似率 指紋圖譜中特征指紋峰面積 供試品圖譜中特征指紋峰面積 100 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 51 例 銀杏提取物EGB761 EGB761中含總黃酮成分24 萜類內(nèi)酯6 原花青素類7 0 羧酸類成分13 0 兒茶素類2 0 非黃酮類苷類20 高分子化合物4 0 無機(jī)物5 0 水分溶劑3 0 其他3 0 有害成分銀杏酸類 5ppm 2020 2 25 52 銀杏葉提取物指紋圖譜 蘆丁 2020 2 25 53 銀杏葉提取物及制劑指紋圖譜 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 54 小結(jié) 中藥指紋圖譜是一種量化的鑒別手段 指紋圖譜必須符合整體性 特征性 穩(wěn)定性 關(guān)聯(lián)性的基本要求 指紋圖譜與藥效相結(jié)合才有現(xiàn)實(shí)意義 特征指紋