梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn).doc

.梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)1 1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梅毒的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷和鑒別診斷。本標(biāo)準(zhǔn)適用于全國各級各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)及其工作人員對梅毒的診斷和報告。2 2 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1 梅毒 syphilis梅毒是蒼白螺旋體( Treponemapallidum )（又名梅毒螺旋體）感染人體所引起的一種系統(tǒng)性、慢性經(jīng)典的性傳播疾病，可引起人體多系統(tǒng)多臟器的損害，產(chǎn)生多種多樣的臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致組織破壞、功能失常，甚至危及生命。2.2 前帶現(xiàn)象prozone phenomenon非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)（如RPR試驗(yàn)）中，有時由于血清抗體水平過高，抗原抗體比例不合適，而出現(xiàn)弱陽性、不典型或陰性的結(jié)果，但臨床上又有典型的二期梅毒體征，將此血清稀釋后再做血清學(xué)試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，稱為“前帶現(xiàn)象”。3 3 縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)。VDRL venereal disease research laboratory 性病研究實(shí)驗(yàn)室（玻片試驗(yàn)）USR unheated serum reagin 血清不需加熱的反應(yīng)素（玻片試驗(yàn)）TRUST toluidine red unheated serum test 甲苯胺紅血清不需加熱試驗(yàn)RPR rapid plasma reagin 快速血漿反應(yīng)素（環(huán)狀卡片試驗(yàn)）FTA-ABS fluorescent treponemal antibody-absorption熒光螺旋體抗體吸收（試驗(yàn)）TPHA Treponema pallidum hemagglutination assay 梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)TPPA Treponema pallidum particle agglutination assay梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)ELISA enzyme-linked immuno-sorbent assay 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)4 4 診斷依據(jù)4.1 一期梅毒4.1.1 流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為；或性伴有梅毒感染史。4.1.2 臨床表現(xiàn)：4.1.2.1硬下疳：潛伏期一般為2周4周。一般為單發(fā)，但也可多發(fā)；直徑約1cm2cm，圓形或橢圓形淺在性潰瘍，界限清楚、邊緣略隆起，瘡面清潔；觸診基底堅實(shí)、浸潤明顯，呈軟骨樣的硬度；無明顯疼痛或觸痛。多見于外生殖器部位。4.1.2.2腹股溝或患部近衛(wèi)淋巴結(jié)腫大：可為單側(cè)或雙側(cè)，無痛，相互孤立而不粘連，質(zhì)硬，不化膿破潰，其表面皮膚無紅、腫、熱。4.1.3 實(shí)驗(yàn)室檢查：4.1.3.1暗視野顯微鏡檢查：皮膚黏膜損害或淋巴結(jié)穿刺液可查見梅毒螺旋體(見附錄A)。4.1.3.2非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性。如感染不足2周3周，該試驗(yàn)可為陰性，應(yīng)于感染4周后復(fù)查(見附錄B)。4.1.3.3 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.2 二期梅毒4.2.1 流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為；或性伴有梅毒感染史，或有輸血史。4.2.2 臨床表現(xiàn)：可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)。4.2.2.1皮損呈多形性，包括斑疹、斑丘疹、丘疹、鱗屑性皮損、毛囊疹及膿皰疹等，常泛發(fā)對稱。掌跖部易見暗紅斑及脫屑性斑丘疹。外陰及肛周皮損多為濕丘疹及扁平濕疣。皮損一般無自覺癥狀，可有瘙癢?？谇豢砂l(fā)生黏膜斑?？砂l(fā)生蟲蝕樣脫發(fā)。二期復(fù)發(fā)梅毒，皮損局限，數(shù)目較少，皮損形態(tài)奇異，常呈環(huán)狀或弓形。4.2.2.2 全身淺表淋巴結(jié)腫大。4.2.2.3 可出現(xiàn)梅毒性骨關(guān)節(jié)損害、眼損害、內(nèi)臟及神經(jīng)系統(tǒng)損害等。4.2.3 實(shí)驗(yàn)室檢查：4.2.3.1暗視野顯微鏡檢查：二期皮損尤其扁平濕疣、濕丘疹及黏膜斑，易查見梅毒螺旋體(見附錄A)。4.2.3.2 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.2.3.3 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.3 三期梅毒（晚期梅毒）4.3.1 流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為，或性伴有梅毒感染史。4.3.2 臨床表現(xiàn)：可有一期或二期梅毒史。病期2年以上。4.3.2.1 晚期良性梅毒：皮膚黏膜損害：頭面部及四肢伸側(cè)的結(jié)節(jié)性梅毒疹，大關(guān)節(jié)附近的近關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)，皮膚、口腔、舌咽的樹膠腫，上腭及鼻中隔黏膜樹膠腫可導(dǎo)致上腭及鼻中隔穿孔和鞍鼻。骨梅毒，眼梅毒，其他內(nèi)臟梅毒，可累及呼吸道、消化道、肝脾、泌尿生殖系、內(nèi)分泌腺及骨骼肌等。4.3.2.2 神經(jīng)梅毒：可發(fā)生梅毒性腦膜炎、腦血管栓塞、麻痹性癡呆、脊髓癆等。4.3.2.3 心血管梅毒：可發(fā)生單純性主動脈炎、主動脈瓣閉鎖不全、主動脈瘤等。4.3.3 實(shí)驗(yàn)室檢查：4.3.3.1 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.3.3.2 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.3.3.3腦脊液檢查：白細(xì)胞計數(shù)1010 6 /L，蛋白量500mg/L，且無其他引起這些異常的原因。腦脊液VDRL試驗(yàn)或FTA-ABS試驗(yàn)陽性(見附錄B)。4.3.3.4 組織病理檢查：有三期梅毒的組織病理變化(見附錄C)。4.4 隱性梅毒（潛伏梅毒）4.4.1 流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為；或性伴有梅毒感染史。4.4.2 臨床表現(xiàn)：無任何梅毒性的癥狀和體征，可分為早期隱性梅毒和晚期隱性梅毒。4.4.2.1 早期隱性梅毒:病期在2年內(nèi)，根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)來判斷：在過去2年內(nèi)，有明確記載的非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)由陰轉(zhuǎn)陽，或其滴度較原先升高達(dá)4倍或更高。在過去2年內(nèi)，有符合一期或二期梅毒的臨床表現(xiàn)。在過去2年內(nèi)，有與疑似或確診的一期或二期梅毒，或疑似早期隱性梅毒的性伴發(fā)生性接觸史。4.4.2.2晚期隱性梅毒：病期在2年以上。無證據(jù)表明在既往2年中獲得感染。無法判斷病期者亦視為晚期隱性梅毒處理。4.4.3 實(shí)驗(yàn)室檢查：4.4.3.1非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：對于無既往梅毒史者，非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)陽性（滴度一般在18以上）。對于有既往梅毒治療史者，與前次非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)結(jié)果相比，本次試驗(yàn)結(jié)果陽轉(zhuǎn)或其滴度升高4倍或更高(見附錄B)。4.4.3.2 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。4.4.3.3 腦脊液檢查：無異常發(fā)現(xiàn)。4.5 胎傳梅毒（先天梅毒）4.5.1 流行病學(xué)史：生母為梅毒患者或感染者。4.5.2 臨床表現(xiàn)：4.5.2.1早期胎傳梅毒：一般在2歲以內(nèi)發(fā)病，類似于獲得性二期梅毒，發(fā)育不良，皮損常為水皰-大皰、紅斑、丘疹、扁平濕疣；梅毒性鼻炎及喉炎；骨髓炎、骨軟骨炎及骨膜炎；可有全身淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大、貧血等。4.5.2.2晚期胎傳梅毒：一般在2歲以后發(fā)病，類似于獲得性三期梅毒。出現(xiàn)炎癥性損害（間質(zhì)性角膜炎、神經(jīng)性耳聾、鼻或腭樹膠腫、克勒頓關(guān)節(jié)、脛骨骨膜炎等）或標(biāo)記性損害（前額圓凸、馬鞍鼻、佩刀脛、胸鎖關(guān)節(jié)骨質(zhì)肥厚、赫秦生齒、口腔周圍皮膚放射狀裂紋等）。4.5.2.3胎傳隱性梅毒：即胎傳梅毒未經(jīng)治療，無臨床癥狀，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)陽性，腦脊液檢查正常，年齡小于2歲者為早期胎傳隱性梅毒，大于2歲者為晚期胎傳隱性梅毒。4.5.3 實(shí)驗(yàn)室檢查：4.5.3.1暗視野顯微鏡檢查：在早期胎傳梅毒兒的皮膚黏膜損害或胎盤中可查到梅毒螺旋體(見附錄A)。4.5.3.2非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)，其抗體滴度等于或高于母親4倍及以上。但低于該值并不排除胎傳梅毒。應(yīng)取嬰兒血進(jìn)行檢測，而不是臍帶血。4.5.3.3梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽性(見附錄B)。應(yīng)取嬰兒血進(jìn)行檢測，而不是臍帶血。5 5 診斷原則應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查等進(jìn)行綜合分析，作出判斷。6 6 診斷6.1 一期梅毒6.1.1 疑似病例：應(yīng)同時符合4.1.1，4.1.2和4.1.3.2項(xiàng)。6.1.2 確診病例：應(yīng)同時符合疑似病例的要求和4.1.3.1、4.1.3.3中的任一項(xiàng)。6.2 二期梅毒6.2.1 疑似病例：應(yīng)同時符合4.2.1，4.2.2和4.2.3.2項(xiàng)。6.2.2 確診病例：應(yīng)同時符合疑似病例的要求和4.2.3.1、4.2.3.3中的任一項(xiàng)。6.3 三期梅毒（晚期梅毒）6.3.1 疑似病例：應(yīng)同時符合4.3.1，4.3.2中的任一項(xiàng)和4.3.3.1項(xiàng)。6.3.2確診病例：應(yīng)同時符合疑似病例的要求和4.3.3.2、4.3.3.3、4.3.3.4中的任一項(xiàng)。6.4 隱性梅毒（潛伏梅毒）6.4.1 疑似病例：應(yīng)同時符合4.4.1，4.4.2和4.4.3.1項(xiàng)。6.4.2 確診病例：應(yīng)同時符合疑似病例的要求和4.4.3.2、4.4.3.3項(xiàng)。6.5 胎傳梅毒（先天梅毒）6.5.1 疑似病例：應(yīng)同時符合4.5.1，4.5.2和4.5.3.2項(xiàng)。6.5.2 確診病例：應(yīng)同時符合疑似病例的要求和4.5.3.1、4.5.3.3中的任一項(xiàng)。7 7 鑒別診斷7.1 一期梅毒7.1.1硬下疳：需與軟下疳、生殖器皰疹、性病性淋巴肉芽腫、糜爛性龜頭炎、白塞病、固定型藥疹、癌腫、皮膚結(jié)核等發(fā)生在外陰部的紅斑、糜爛和潰瘍鑒別。7.1.2梅毒性腹股溝淋巴結(jié)腫大：需與軟下疳、性病性淋巴肉芽腫引起的腹股溝淋巴結(jié)腫大，以及轉(zhuǎn)移癌腫鑒別。7.2 二期梅毒7.2.1梅毒性斑疹：需與玫瑰糠疹、銀屑病、扁平苔蘚、手足癬、白癜風(fēng)、花斑癬、藥疹、多形紅斑、遠(yuǎn)心性環(huán)狀紅斑等鑒別。7.2.2梅毒性丘疹和扁平濕疣：需與銀屑病、體癬、扁平苔蘚、毛發(fā)紅糠疹、尖銳濕疣等鑒別。7.2.3 梅毒性膿皰疹：需與各種膿皰病、膿皰瘡、臁瘡、雅司病、聚合性痤瘡等鑒別。7.2.4黏膜梅毒疹：需與傳染性單核細(xì)胞增多癥、地圖舌、鵝口瘡、扁平苔蘚、化膿性扁桃體炎等鑒別。7.2.5梅毒性脫發(fā)：需與斑禿鑒別。7.3 三期梅毒7.3.1結(jié)節(jié)性梅毒疹：需與尋常狼瘡、結(jié)節(jié)病、瘤型麻風(fēng)等鑒別。7.3.2樹膠腫：需與尋常狼瘡、瘤型麻風(fēng)、硬紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、小腿潰瘍、脂膜炎、癌腫等鑒別。7.3.3神經(jīng)梅毒：梅毒性腦膜炎需與結(jié)核性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、鉤端螺旋體病引起的腦膜炎等相鑒別。腦膜血管梅毒需與各種原因引起的腦卒中相鑒別。麻痹性癡呆需與腦腫瘤、動脈硬化、阿爾茨海默?。ɡ夏晷园V呆）、慢性酒精中毒和癲癇發(fā)作等相鑒別。脊髓癆需與埃迪（Adie）綜合征、糖尿病性假脊髓癆等鑒別。7.3.4心血管梅毒：梅毒性主動脈瘤需與主動脈硬化癥相鑒別。梅毒性冠狀動脈病需與冠狀動脈粥樣硬化相鑒別。梅毒性主動脈瓣閉鎖不全需與感染性心內(nèi)膜炎、先天性瓣膜畸形等引起的主動脈瓣閉鎖不全相鑒別。附 錄 A(規(guī)范性附錄)梅毒螺旋體暗視野檢查A.1 原理暗視野映光檢查是采用一個特殊的聚光器，分為干系和濕系兩種，其中央均為黑漆所遮蔽，僅在圓周邊留有光線斜角處，光線只可從其圓周邊緣斜角射到載玻片上。梅毒螺旋體檢查一般采用濕系聚光器。倘若斜射光線遇到載玻片上的物體，如螺旋體等，物體會發(fā)光顯現(xiàn)。A. 2 2 材料暗視野顯微鏡、鈍刀（刮勺）、載玻片、注射器、注射針頭、無菌等滲鹽水。A. 3 3 取材A.3.1皮膚黏膜損害取材：首先在載玻片（厚度為1.0mm1.2mm）上滴加50L100L鹽水備用。然后用棉拭子取無菌鹽水輕輕擦去皮損上的污物。如皮損上有痂皮，可用鈍刀小心除去。再用鈍刀輕輕地刮數(shù)次（避免出血），取組織滲液與載玻片上的鹽水混勻，加蓋玻片置暗視野顯微鏡下檢查。A.3.2淋巴結(jié)取材：消毒淋巴結(jié)表面皮膚，用無菌干棉球擦干。用1mL無菌注射器配12號針頭，吸取無菌等滲鹽水0.25mL0.5mL，以無菌操作穿刺淋巴結(jié)并注入鹽水，再吸入注射器內(nèi)，反復(fù)23次后，取少量淋巴液于載玻片上，加蓋玻片，置暗視野顯微鏡下檢查。A.4 方法A.4.1在暗視野聚光器（此法用濕系暗視野聚光器）上加一滴甘油緩沖液（甘油和0.1mol/LPBS，pH 7.0按73配制）。A.4.2載玻片置載物臺上，上升聚光器使甘油緩沖液接觸載玻片，先用10倍物鏡，使物像清晰，再用40倍物鏡觀察，尋找有特征形態(tài)和運(yùn)動方式的梅毒螺旋體。A.5 結(jié)果及解釋A.5.1 暗視野顯微鏡下，典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光,其螺旋較密而均勻。運(yùn)動規(guī)律，運(yùn)動性較強(qiáng)，其運(yùn)動方式包括：旋轉(zhuǎn)式，圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)；蛇行式,全身彎曲如蛇行；伸縮其螺旋間距離而移動。觀察其運(yùn)動形式有助于與其他螺旋體相鑒別。A.5.2未檢出螺旋體不能排除梅毒的診斷，陰性結(jié)果可能說明：螺旋體數(shù)量不足(單次暗視野顯微鏡檢查陽性率小于50%)；患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療；損害接近自然消退；損害不是梅毒。附 錄 B(規(guī)范性附錄)梅毒血清學(xué)檢查當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后4周10周左右，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素（主要是IgM、IgG）和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體（主要是IgM、IgG）。這些抗體均可用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。血清學(xué)檢查是輔助診斷梅毒的重要手段。根據(jù)檢測所用抗原不同，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)分為兩大類：一類為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括VDRL玻片試驗(yàn)、USR玻片試驗(yàn)、RPR試驗(yàn)、TRUST試驗(yàn)，這些試驗(yàn)主要應(yīng)用于梅毒的篩查和療效觀察。另一類為梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括TPHA試驗(yàn)、TPPA試驗(yàn)、FTA-ABS試驗(yàn)、ELISA試驗(yàn)等。這些試驗(yàn)主要用于確證試驗(yàn)，不用于療效觀察。B.1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)B.1.1 原理梅毒螺旋體一旦感染人體，人體迅速對被損害的宿主細(xì)胞以及梅毒螺旋體細(xì)胞表面所釋放的類脂物質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3周4周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（反應(yīng)素）。這些抗體主要是IgG和IgM型混合抗體。非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗(yàn)。反應(yīng)素與心磷脂形成抗原抗體反應(yīng)，卵磷脂可加強(qiáng)心磷脂的抗原性，膽固醇可增強(qiáng)抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結(jié)晶。當(dāng)抗原與抗體（反應(yīng)素）混合發(fā)生反應(yīng)時，后者即粘附膠體微粒的周圍，形成疏水性薄膜。由于搖動、碰撞，使顆粒與顆?；ハ嗾掣蕉纬扇庋劭梢姷念w粒凝集和沉淀，即為陽性反應(yīng)。如遇到非梅毒血清，因體液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白對膠體顆粒有保護(hù)作用，形成親水性薄膜，即使同樣搖動、碰撞，由于抗原顆粒周圍沒有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成較大顆粒，無肉眼可見的凝集和沉淀，因此為陰性反應(yīng)。VDRL、USR、RPR和TRUST等試驗(yàn)均為此類試驗(yàn)，它們所采用的抗原成分相同，敏感性和特異性基本相似。B.1.2 VDRL玻片試驗(yàn)B.1.2.1 材料a.VDRL試劑盒：含VDRL抗原（0.5mL）；VDRL緩沖液，pH6.00.1，其配方為中性福爾馬林0.5 mL，Na 2 HPO 4 0.037g，KH 2 PO 4 0.17g，NaCl10.0g，蒸餾水1000mL；標(biāo)準(zhǔn)針頭（601滴/mL），直徑14mm漆圈玻片；VDRL試驗(yàn)結(jié)果圖片。b. 其他：0.85% NaCl溶液（等滲鹽水）；可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。B.1.2.2 VDRL抗原配制方法：a. 吸取0.3mL VDRL緩沖液置30mL小瓶；b. 吸取0.3mLVDRL抗原迅速滴入小瓶內(nèi)VDRL緩沖液中（約4s），隨后搖動10s，使之混勻；c. 立即加2.4mLVDRL緩沖液，蓋上瓶蓋，來回顛倒搖動小瓶10s約30次，即為VDRL抗原，此抗原只能用1d。B.1.2.3 定性試驗(yàn)a. 血清標(biāo)本需56滅活30min備用；b. 吸取0.05mL血清放入玻片圈內(nèi)，將血清涂開至整個圈內(nèi)；c. 用標(biāo)準(zhǔn)針頭加入1滴抗原；d. 將玻片置旋轉(zhuǎn)器上搖動4 min，（1805）次/min，立即置10 顯微鏡下觀察。B.1.2.4 定量試驗(yàn)經(jīng)VDRL定性試驗(yàn)為陽性、弱陽性，可疑反應(yīng)或陰性但臨床懷疑為梅毒者，需做定量試驗(yàn)，前者需明確抗體滴度，后者為排除“前帶現(xiàn)象”。a. 在反應(yīng)板18孔各加等滲鹽水0.05 mL；b. 吸取0.05 mL血清標(biāo)本（血清已滅活）置第1孔與等滲鹽水混勻，吸取0.05mL稀釋液至第2孔混勻，再吸取0.05 mL至第3孔，如此連續(xù)稀釋至第8孔，棄0.05mL稀釋液。稀釋度為原倍、12、14、18、116、132、164、1128，必要時可稀釋至更高倍數(shù)。c. 每個稀釋度加入抗原1滴；d. 旋轉(zhuǎn)速度和時間同定性試驗(yàn)。B.1.2.5 結(jié)果大或中等大小的絮狀物，液體清亮：34 強(qiáng)陽性反應(yīng)；絮狀物較小，液體較清亮：2 陽性反應(yīng)；絮狀物較小，均勻分布，液體混濁：1 弱陽性反應(yīng)；抗原顆粒稍粗，無凝集： 可疑；抗原顆粒均勻，針狀細(xì)?。?陰性反應(yīng)。B.1.3 RPR環(huán)狀卡片試驗(yàn)B.1.3.1 原理RPR試驗(yàn)是VDRL試驗(yàn)的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物，加入了氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代了玻片。試驗(yàn)結(jié)果易于判斷，肉眼即可觀察。也可用血漿進(jìn)行檢測，試驗(yàn)結(jié)果可保存?？乖?冰箱可保存1年。B.1.3.2 材料a.RPR試劑盒：含RPR抗原；直徑為18mm圓圈的特制白色反應(yīng)卡片；標(biāo)準(zhǔn)針頭（601滴/mL）；RPR試驗(yàn)結(jié)果圖片。b. 其他：可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。B.1.3.3 定性試驗(yàn)a. 吸取0.05mL血清或血漿加于卡片圈內(nèi)，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)（每張紙卡有10個或12個反應(yīng)圈）；b. 將抗原輕輕搖勻，用標(biāo)準(zhǔn)針頭吸取抗原，每個標(biāo)本加1滴抗原；c. 將卡片置水平旋轉(zhuǎn)器旋轉(zhuǎn)8 min，（1005）r/min；d. 立即在明亮光線下觀察結(jié)果。B.1.3.4 定量試驗(yàn)RPR定量試驗(yàn)的指證與VDRL試驗(yàn)相同。a. 在圈內(nèi)加入0.05 mL等滲鹽水（一般作68個稀釋度），勿將鹽水涂開；b. 吸取0.05mL血清或血漿作系列稀釋（12164），當(dāng)稀釋到最后的第6孔時，棄去0.05mL稀釋液。從第6孔起將血清稀釋液涂布整個圈內(nèi)，再涂布第5孔，依此向前到第1孔。必要時可稀釋至更高倍數(shù)。c. 滴加抗原，旋轉(zhuǎn)時間、速度和觀察結(jié)果同定性試驗(yàn)。B.1.3.5 結(jié)果中到大的黑色絮狀物，液體清亮：34 強(qiáng)陽性；小到中的黑色絮狀物，液體較清亮：2 陽性；小的黑色絮狀物，液體混濁：1 弱陽性；僅見活性炭顆粒集于中央一點(diǎn)或均勻分散： 陰性。B.1.4 TRUST試驗(yàn)B.1.4.1 原理TRUST試驗(yàn)原理與RPR試驗(yàn)原理相同。唯TRUST試驗(yàn)的抗原中加入甲苯胺紅顆粒代替活性炭顆粒指示物，使陽性結(jié)果出現(xiàn)紅色絮狀現(xiàn)象，陰性結(jié)果見紅色顆粒集于中央或均勻分散。B.1.4.2 方法TRUST試驗(yàn)方法及結(jié)果判斷均與RPR試驗(yàn)相同。B.1.5 注意事項(xiàng)B.1.5.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度應(yīng)為2329，抗原應(yīng)保存于4冰箱，試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)到室溫?？乖瓚?yīng)防止凍結(jié)，以免抗原被破壞。B.1.5.2 校準(zhǔn)針頭，VDRL、RPR和TRUST等抗原為601滴/mL。B.1.5.3 血液標(biāo)本應(yīng)防止污染，放置室溫應(yīng)在24h內(nèi)完成。如血清56滅活或放4保存，在試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)試驗(yàn)溫度后再開始試驗(yàn)。B.1.5.4 試驗(yàn)完畢，應(yīng)立即觀察結(jié)果。B.1.6 臨床意義B.1.6.1非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡便、快速，敏感性和特異性較好。對一期梅毒的敏感性為7487，二期梅毒達(dá)100，三期梅毒3494。特異性9699。B.1.6.2非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)適用于各期梅毒的診斷。早期梅毒經(jīng)治療后血清滴度可下降或轉(zhuǎn)陰，故可用于療效觀察、判愈、判定復(fù)發(fā)或再感染。也適用于人群的篩查、產(chǎn)前檢查及健康體檢等。B.1.6.3 VDRL試驗(yàn)適用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查, 特異性高，但敏感性低。B.1.6.4非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)可在某些傳染病及膠原病時出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，因此對陽性反應(yīng)應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行鑒別，或作梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)以進(jìn)一步證實(shí)之。B.2 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)采用梅毒螺旋體作抗原，為特異性抗原，檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體，其敏感性和特異性均較高。B.2.1 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)B.2.1.1 原理TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結(jié)果。B.2.1.2 材料a.TPPA試劑盒：含蒸餾水（標(biāo)記A），用于溶解致敏顆粒、未致敏顆粒和質(zhì)控血清；標(biāo)本稀釋液（標(biāo)記B），用于稀釋血清標(biāo)本；致敏顆粒（標(biāo)記C），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；未致敏顆粒（標(biāo)記D），冷凍干燥品，用前30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；質(zhì)控血清（標(biāo)記E），冷凍干燥品，用時按規(guī)定量加入A液。b. 其他：U型微量反應(yīng)板；微量加樣器 (25L )；微量滴管 (C和D管)；移液管(微量移液管和刻度滴管)；微量板振蕩器。B.2.1.3 定性試驗(yàn)試驗(yàn)前試劑應(yīng)恢復(fù)到1530。a. B液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔25L，第2孔100L，第3、4孔各25L；b.取血清25L加至第1孔，混勻后取25L至第2孔，混勻后取25L至第3孔，混勻后取25L至第4孔，混勻后棄去25L；c. 第3孔加D液（未致敏顆粒）25L，第4孔加C液（致敏顆粒）25L；d. 將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30 s；e. 置有蓋濕盒，1525避光孵育4 h后，或放4冰箱過夜后觀察結(jié)果。B.2.1.4 定量試驗(yàn)a.加B液至微量反應(yīng)板孔，第1孔第4孔與定性試驗(yàn)相同，第5孔第10孔各加25L；b.取血清25L加至第1孔，如定性試驗(yàn)稀釋方法，從第2孔第10孔混勻，混勻后第10孔棄去25L；c. 第3孔加D液25L，第4孔第10孔各加C液25L；d.以后步驟同定性試驗(yàn)。結(jié)果以最高血清稀釋度能產(chǎn)生陽性反應(yīng)的稀釋度為抗體滴度。B.2.1.5 結(jié)果顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊：陽性 4；顆粒光滑覆蓋大部分孔底：陽性 3；顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)：陽性 2；顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)：陽性 1；顆粒沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)：可疑 ；顆粒緊密沉積孔底中央：陰性 。B.2.1.6 報告方法a.陽性報告：定性試驗(yàn)，血清在180以上稀釋度與致敏顆粒發(fā)生凝集反應(yīng)（1或更強(qiáng)），與未致敏顆粒（第3孔）不發(fā)生凝集反應(yīng)。定量試驗(yàn)則應(yīng)報告發(fā)生陽性反應(yīng)的血清最高稀釋度，為血清滴度。b. 陰性報告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發(fā)生凝集反應(yīng)。B.2.1.7 注意事項(xiàng)a. 微量反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無異物。b. 加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應(yīng)板，而不可使用水平旋轉(zhuǎn)儀。c. 試劑盒不可置于0以下，防止凍結(jié)。不同批號試劑不可混合使用。d. 有些血清標(biāo)本在血清低稀釋度時可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，此時可作定量試驗(yàn)。e.如未致敏顆粒出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)將血清進(jìn)行吸收處理后再進(jìn)行試驗(yàn)，或改用其他試驗(yàn)方法。B.2.1.8 血清吸收處理a. 取0.95 mL已恢復(fù)體積的未致敏顆粒加入清潔的小試管內(nèi)。b. 試管內(nèi)加入50 L血清標(biāo)本并充分混勻，置25 15min20 min或更長時間。c. 離心2000 r/min，5min，取25L上清液（血清標(biāo)本稀釋120）置第3孔，注意不要混入顆粒。d. 自第4孔第10孔各加25 mL B液。e. 自第3孔 吸25mL至第4孔，混勻后吸25mL至第5孔如此稀釋至第10孔，棄去25mL。f.按定量試驗(yàn)法加入D液和C液，將反應(yīng)板置微量板振蕩器上振蕩30s，置濕盒內(nèi)，1525孵育2h觀察結(jié)果。B.2.2 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）B.2.2.1 原理FTA-ABS試驗(yàn)以完整形態(tài)的Nichol梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter株螺旋體制備而成）處理過的患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FITC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結(jié)合。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。B.2.2.2 材料a. 梅毒螺旋體抗原玻片，有直徑0.5cm涂布梅毒螺旋體的圓圈，在高倍鏡下每視野不少于30條螺旋體，丙酮固定。b. 吸收劑（5ml冷凍干燥品），由體外培養(yǎng)的Reiter株螺旋體制備而成。使用前用無菌蒸餾水恢復(fù)原體積。c. 熒光抗體，用熒光素標(biāo)記羊或鼠抗人免疫球蛋白。d. 血清稀釋板。B.2.2.3 方法a. 將血清標(biāo)本于56滅活30min，備用；b. 吸收劑加入5mL無菌蒸餾水，用作血清的稀釋；c. 血清標(biāo)本和吸收劑按15120稀釋，混勻后置有蓋濕盒內(nèi)于3537孵育30min；d.將系列稀釋的血清分別加到抗原片上（每孔不少于30L），放入有蓋濕盒內(nèi)，置3537孵育30 min；e. 用0.01mol/L的PBS沖洗抗原片，用磁力攪拌器低速以0.01mol/LPBS溶液洗滌抗原片，每5min更換PBS液1次，共3次。最后一次用蒸餾水沖洗一遍，冷風(fēng)吹干備用；f.抗原片每個圈內(nèi)加30L熒光抗體（熒光抗體稀釋為工作液），放濕盒3537孵育30min。重復(fù)步驟5的洗滌和吹干；g. 抗原片加固封劑（甘油緩沖液）1滴，覆以蓋玻片，在熒光顯微鏡下觀察；h. 試驗(yàn)對照：每批次試驗(yàn)包括下列對照。4陽性血清和1陽性血清對照，血清用PBS液和吸收劑分別按15120稀釋。非特異血清對照。染色對照：用0.01 mol/L PBS和吸收劑分別替代熒光抗體。B.2.2.4 結(jié)果梅毒螺旋體均勻地發(fā)出中等或高強(qiáng)度的蘋果綠色熒光陽性梅毒螺旋體均勻地發(fā)出弱蘋果綠色熒光弱陽性梅毒螺旋體呈微弱黃色光或觀察不到熒光陰性B.2.3 梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）B.2.3.1 原理該試驗(yàn)是用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原包被固相板條，加上梅毒血清和辣根過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG抗體，利用酶免疫法檢測患者血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體。采用特異的梅毒螺旋體重組蛋白作為抗原，使試驗(yàn)更加敏感、特異。B2.3.2 材料a.ELISA試劑盒：含包被梅毒螺旋體抗原的反應(yīng)板（96孔）；標(biāo)本稀釋液；洗滌液，使用前按說明書要求稀釋；酶結(jié)合物；底物液（A液和B液）；反應(yīng)終止液；陽性對照血清；陰性對照血清。b. 其他：酶標(biāo)檢測儀；洗板機(jī)。B.2.3.3 方法a.取標(biāo)本稀釋液100L加到反應(yīng)板孔內(nèi)，再加入待檢血清10L，同時作陽性和陰性對照，置37孵育30 min；b. 洗滌液洗板5次，拍干；c. 每孔加酶結(jié)合物100 L，置37孵育15 min；d. 洗滌液洗板5次，拍干；e. 每孔加底物液A液、B液各1滴（各50 L），37避光孵育15 min；f. 每孔加終止液1滴（50 L）終止反應(yīng)；g. 置酶標(biāo)檢測儀450 n