NSFC申請(qǐng)報(bào)告---韓蘇夏.ppt

國家自然科學(xué)基金申請(qǐng)書撰寫指導(dǎo) 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院韓蘇夏 國家自然科學(xué)基金的重要性 醫(yī)院需要科室需要團(tuán)隊(duì)需要個(gè)人需要 學(xué)科標(biāo)志研究能力團(tuán)隊(duì)建設(shè)人才培養(yǎng) 申請(qǐng)書撰寫前的準(zhǔn)備 認(rèn)真閱讀 國家自然科學(xué)基金條例 等相關(guān)文件理思路 善于發(fā)現(xiàn)臨床中存在的問題 明確自己思路找問題 通過臨床問題凝練出學(xué)科研究的科學(xué)問題 假說 假設(shè) 申請(qǐng)書撰寫前的準(zhǔn)備 看文獻(xiàn)尋方向 1年 3年 5年內(nèi)大雜志 大綜述 通過文獻(xiàn)尋找科學(xué)問題 假說 假設(shè)是否成立的依據(jù)選課題 選題最好以問題為導(dǎo)向 不要以技術(shù)為導(dǎo)向 需要注重方向性 創(chuàng)新性 實(shí)用性和可行性前期鋪墊 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2020 3 25 5 標(biāo)題 標(biāo)題是申請(qǐng)書的靈魂 精髓和核心 是摘要的高度概括 標(biāo)題是你對(duì)評(píng)審專家說的第一句話 應(yīng)體現(xiàn)創(chuàng)新點(diǎn) 新穎 吸引眼球 簡潔明確 具體清楚 有新意的關(guān)鍵詞可以刻意凸現(xiàn) 撰寫模式一般采用 研究方法 手段 研究對(duì)象 研究目標(biāo) 的模式 需要依次表達(dá)清楚 不宜過長 字?jǐn)?shù) 30注意事項(xiàng)創(chuàng)新 創(chuàng)新 再創(chuàng)新簡潔明確 修辭正確 有感召力和可信度檢索類似標(biāo)題 避免撞車盡量不要簡寫 2020 3 25 6 HCV感染及其所致肝癌經(jīng)基因組免疫途徑防治的實(shí)驗(yàn)研究宮頸癌診斷新策略 通過FRET設(shè)計(jì)的TAT 波長轉(zhuǎn)換雙分子信標(biāo)應(yīng)用的基礎(chǔ)研究重組慢病毒介導(dǎo)TAT apoptin融蛋白治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究Apoptin特異性誘導(dǎo)肝臟腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制 MAP4K4及其下游分子扮演角色 DDRsignaling誘導(dǎo)Apoptin促腫瘤放射增敏治療的研究 標(biāo)題 2020 3 25 7 基本信息 申報(bào)日期準(zhǔn)確 恰當(dāng) 可向科研管理人員咨詢 申請(qǐng)人信息準(zhǔn)確 工作時(shí)間每年不少于六個(gè)月資助類別 研究期限和申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)要恰當(dāng)中英文關(guān)鍵詞正確 規(guī)范 2020 3 25 8 投送學(xué)科 仔細(xì)分析當(dāng)年的招標(biāo)指南 分析自己申報(bào)課題的領(lǐng)域和研究范圍 對(duì)于正在進(jìn)行的研究 注意發(fā)現(xiàn)有基礎(chǔ)性工作與招標(biāo)指南是可以靠得上的 即便是靠不上 也要注意聯(lián)系和搭車 對(duì)于擬開展的研究 要注意整合各類資源 平時(shí)的信息積累 分析各個(gè)學(xué)科口的指南 尋找最恰當(dāng)?shù)膶W(xué)科投送 評(píng)審人 專家心態(tài) 只有很少的份額呀10 15 到底給誰呢 2020 3 25 9 摘要是敲門磚 摘要是整個(gè)申請(qǐng)書的提綱 是申請(qǐng)人最后寫的 卻是評(píng)審專家最先看的內(nèi)容 因此是申請(qǐng)書的重中之重 一定要反復(fù)修改 精益求精 要求 在短短的幾百字內(nèi)要使外行和內(nèi)行評(píng)審人 感覺到摘要內(nèi)容充滿著新意 撰寫和闡述的條理性非常清楚 能夠引起進(jìn)一步閱讀的興趣 達(dá)到的目標(biāo) 通過審閱摘要 了解到你所申請(qǐng)項(xiàng)目目前研究存在的科學(xué)問題 現(xiàn)狀 想要做什么 怎么做 研究的目的和重要意義 2020 3 25 10 摘要一般撰寫格式 應(yīng)用基礎(chǔ)研究目前應(yīng)用存在問題是 研究目的 選用 材料 使用 技術(shù) 采用 方法 實(shí)現(xiàn) 目標(biāo)為 奠定基礎(chǔ) 提供 思路 2020 3 25 11 既往使用表達(dá)自殺基因的復(fù)制缺欠病毒治療惡性腫瘤的研究中 發(fā)現(xiàn)復(fù)制缺欠病毒不能將治療基因全部轉(zhuǎn)導(dǎo)至體內(nèi)所有的腫瘤細(xì)胞 而啟動(dòng)自殺基因只能殺死導(dǎo)入治療基因的腫瘤 殘存瘤細(xì)胞會(huì)快速的增殖 導(dǎo)致治療的失敗 本課題目的是探尋更有效 安全和特異治療惡性腫瘤的生物學(xué)方法 我們選用雞貧血病毒特異誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 不損害正常細(xì)胞 的VP3 apoptin 為目的基因 使用重組慢病毒技術(shù)來增強(qiáng)目的基因在肝癌內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力 使用信號(hào)肽和引導(dǎo)肽序列來實(shí)現(xiàn)非腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)后的長期持續(xù)分泌表達(dá) 采用Ant apoptin和TAT apoptin融合表達(dá)方式保證治療分子可以進(jìn)入未轉(zhuǎn)導(dǎo)重組病毒的殘余瘤細(xì)胞和已經(jīng)轉(zhuǎn)移的瘤細(xì)胞 并確保治療分子導(dǎo)入瘤細(xì)胞核內(nèi)的靶部位 這樣 在確保安全性的同時(shí)也增強(qiáng)其治療作用 為肝癌的基因治療創(chuàng)立新方法和更有效的手段 使腫瘤的基因治療有新突破 2020 3 25 12 基礎(chǔ)研究用 方法 手段 進(jìn)行 研究 探索 證明 問題 對(duì)闡明 機(jī)制 揭示 規(guī)律有重要意義 為 奠定基礎(chǔ) 提供 思路如是連續(xù)項(xiàng)目 請(qǐng)簡述前期結(jié)果 提出新問題 摘要一般撰寫格式 2020 3 25 13 本課題組前期研究結(jié)果證實(shí) Apoptin 這一來源于雞貧血病毒的小蛋白 能夠特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 而對(duì)正常細(xì)胞無凋亡誘導(dǎo)作用 MAP4K4是一種絲蘇氨酸蛋白激酶 與Apoptin存在特異性結(jié)合位點(diǎn) 我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MAP4K4在肝臟腫瘤中的表達(dá)高于肝正常組織 結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)作出大膽推測 MAP4K4使Apoptin磷酸化 磷酸化后的Apoptin發(fā)生多聚化并與某些蛋白質(zhì)結(jié)合 形成蛋白質(zhì)復(fù)合體移位至細(xì)胞核 進(jìn)入細(xì)胞核的復(fù)合體與核內(nèi)的DNA結(jié)合影響DNA的有效轉(zhuǎn)錄合成 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 本課題擬通過調(diào)節(jié)MAP4K4表達(dá)水平 觀察其對(duì)Apoptin特異性誘導(dǎo)肝腫瘤細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)蛋白的改變 研究MAP4K4及其下游分子在Apoptin特異性誘導(dǎo)肝腫瘤細(xì)胞凋亡的作用 通過以上研究闡明Apoptin誘導(dǎo)肝臟腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制 為探尋新的腫瘤標(biāo)志物 且開展以此為靶標(biāo)的腫瘤診療奠定理論基礎(chǔ) 2020 3 25 14 立項(xiàng)依據(jù) 字?jǐn)?shù)控制在2500字以內(nèi) 研究意義撰寫模式研究領(lǐng)域 主要問題 熱點(diǎn)研究方向熱點(diǎn)研究方向 尚未解決的具體科學(xué)問題 提出假設(shè) 闡述解決該問題 研究目標(biāo) 的科學(xué)貢獻(xiàn) 理論意義或應(yīng)用前景 注意事項(xiàng)邏輯性強(qiáng) 條理清楚 提出的問題準(zhǔn)確 設(shè)想在理論上可行寫成國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 沒有提煉出研究的意義完全沒有闡述課題的基本研究內(nèi)容闡述研究的必要性 意義和價(jià)值對(duì)科學(xué)意義的闡述不足或夸大 2020 3 25 15 原發(fā)性肝癌 primaryhepatocelluarcarcinoma 是一種常見的惡性腫瘤 適于手術(shù)切除的病例很少 且術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)60 80 而放療和化療的緩解率又很低 我國是肝癌的高發(fā)區(qū) 每年約有10萬人死于肝癌 占我國惡性腫瘤死亡的第二位 1 因此肝癌的治療研究是急需解決的重要課題 新的治療藥物研究迫在眉睫 而基于腫瘤起源 發(fā)展的復(fù)雜性 探尋一種有效的 安全的 特異的 提高緩解率的治療藥物更是當(dāng)務(wù)之急 十年前已經(jīng)開始研究使用病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)殺傷基因來治療肝癌 此技術(shù)對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞顯示了理想的殺傷作用 人們對(duì)此寄以很高的期望 但使用于臨床病人和在體的肝癌動(dòng)物時(shí) 其療效是不令人滿意的 原因是其基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和表達(dá)水平偏低 因此 雖然逆轉(zhuǎn)錄病毒 腺病毒 腺伴隨病毒 單純皰疹病毒等各種病毒載體相繼被研究者使用 但距期望的效果甚遠(yuǎn) 究其原因 認(rèn)為與重組病毒的非復(fù)制性有關(guān) 因?yàn)槿魏我环N非復(fù)制性重組病毒 無論通過哪種使用方法 均不可能感染實(shí)體瘤組織內(nèi)或已經(jīng)轉(zhuǎn)移的所有腫瘤細(xì)胞 自殺基因只能使轉(zhuǎn)導(dǎo)了病毒的腫瘤細(xì)胞死亡 隨著已轉(zhuǎn)導(dǎo)病毒的腫瘤細(xì)胞死亡 治療基因的表達(dá)也就趨于終止 未轉(zhuǎn)導(dǎo)病毒的腫瘤細(xì)胞會(huì)快速生長使腫瘤復(fù)發(fā) 病毒的非復(fù)制性是確保其安全性的保證 雖然近來也有研究者使用條件性復(fù)制病毒和對(duì)人類少有致病性的復(fù)制性微小病毒治療實(shí)體瘤的研究報(bào)告 但其安全性仍不能確保 人類將面臨實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的 能毀滅人類的新病毒 因此 在確保安全性的條件下 需探尋一種使用非復(fù)制重組病毒有效殺傷實(shí)體瘤的新理論和新方法 立項(xiàng)依據(jù) 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)分析包括研究現(xiàn)狀 存在問題 解決思路 撰寫要點(diǎn)從研究領(lǐng)域切入 引出當(dāng)前的熱點(diǎn)研究方向從研究方向展開 闡明在該方向上存在的問題圍繞存在的問題 提出該方面的空白點(diǎn) 未知數(shù)和難點(diǎn)展示我們解決問題的理論依據(jù)或?qū)嶒?yàn)依據(jù)適時(shí)適量地提示我們的前期工作必要時(shí)對(duì)擬采用的技術(shù)方法進(jìn)行介紹和分析準(zhǔn)確提煉出本項(xiàng)目的研究設(shè)想 近年來 體外增殖雞貧血病毒 chickenanemiavirus CAV 的研究結(jié)果表明 CAV僅在轉(zhuǎn)化的雞細(xì)胞系復(fù)制 而且依賴轉(zhuǎn)化細(xì)胞的特定細(xì)胞組分來完成自己的復(fù)制 這一生物學(xué)特征也在人源細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí) 分子病毒學(xué)研究表明 CAV的VP3蛋白 又稱Apoptin 和VP2蛋白協(xié)同作用 改變細(xì)胞線粒體的膜電位使線粒體釋放細(xì)胞色素C和凋亡誘導(dǎo)因子 導(dǎo)致宿主細(xì)胞的快速凋亡 2 3 體外合成或基因工程表達(dá)的CAVApoptin特異的引起多種人源性惡性腫瘤細(xì)胞的凋亡 3 4 但對(duì)正常二倍體體細(xì)胞無作用 5 6 這種對(duì)細(xì)胞的選擇性凋亡方式 說明Apoptin在未來腫瘤治療中具有迷人的巨大應(yīng)用前景 7 這種特異性殺傷腫瘤細(xì)胞和惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞 不傷害正常細(xì)胞的蛋白質(zhì)和相關(guān)肽的發(fā)現(xiàn)為使用重組病毒治療腫瘤帶來了轉(zhuǎn)機(jī) 進(jìn)一步的研究表明 Apoptin的腫瘤細(xì)胞特異性與其在細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位有關(guān) 在轉(zhuǎn)化或腫瘤細(xì)胞中 Apoptin定位于細(xì)胞核 而在正常細(xì)胞中定位于細(xì)胞質(zhì) Apoptin的磷酸化決定其核定位 在腫瘤細(xì)胞中 Apoptin被磷酸化 磷酸化的Apoptin進(jìn)入細(xì)胞核 并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 而且Apoptin的表達(dá)水平是誘導(dǎo)凋亡有效性的重要取決條件 8 因此 我們使用重組慢病毒技術(shù)來表達(dá)這類蛋白質(zhì)和肽物質(zhì) 以提高Apoptin的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率并使其能夠持續(xù)高表達(dá) 當(dāng)重組病毒注射到實(shí)體瘤之后 它既能感染腫瘤細(xì)胞又能感染實(shí)體瘤中的非腫瘤細(xì)胞 在感染了重組病毒的腫瘤細(xì)胞死亡之后 非腫瘤細(xì)胞不會(huì)因?yàn)楸磉_(dá)這些蛋白出現(xiàn)任何傷害 它在一個(gè)較長的時(shí)間內(nèi)可以持續(xù)表達(dá)殺傷腫瘤細(xì)胞的分子 同時(shí)一些研究揭示 有效的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡既需要Apopotin的高表達(dá)也需要其核定位 9 10 雖然在Apoptin的分子結(jié)構(gòu)中存在核定位信號(hào) 11 12 13 但在人和動(dòng)物的實(shí)體瘤內(nèi) 如肝癌 實(shí)現(xiàn)以上條件還有很大技術(shù)困難 14 15 若我們能通過分泌表達(dá)原理 在表達(dá)分子的氨基或氨基端融合一種具有蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域 PTD 的肽 非腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)分子就會(huì)自由進(jìn)入殘存的腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞起到持續(xù)性追殺腫瘤的目的 這樣蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域 PTD 就增加了Ant Apoptin或TAT Apoptin向細(xì)胞和細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo) 上述思想在確保重組病毒安全性的條件下 提高并持續(xù)性增強(qiáng)了殺傷腫瘤的蛋白質(zhì)和肽的表達(dá) 在理論上具有誘人的前景 為治療實(shí)體瘤找到了安全 特異和有效的生物治療方法 重組慢病毒載體是近年來使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高的病毒載體 在改造HIV的病毒的復(fù)制元件并提高了安全性后 使用泡沫口炎病毒衣殼蛋白作為重組病毒的衣殼 大大提高了轉(zhuǎn)導(dǎo)效率 同時(shí)感染分裂和非分裂細(xì)胞 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域 PTD 是近年來發(fā)現(xiàn)的一種非受體依賴和非能量依賴的新轉(zhuǎn)導(dǎo)理論和方法 16 17 研究最多的是果蠅Antennapediahomeodomainprotein Ant 和HIV的TAT 它們能夠攜帶核酸 蛋白和肽自由的通過細(xì)胞膜和核膜 18 19 根據(jù)這個(gè)理論 我們已經(jīng)成功的表達(dá)了 P53的羧基肽 Ant融合肽 其誘導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的壞死和凋亡 本課題設(shè)計(jì)使用改造病毒載體的目的不但是為了提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率 而且在表達(dá)盒中設(shè)計(jì)了可分泌表達(dá)的信號(hào)肽 引導(dǎo)肽元件 采用Ant和TAT Apoptin融合表達(dá)技術(shù) 20 21 22 目的是促進(jìn)Apoptin進(jìn)入腫瘤細(xì)胞核并促使已表達(dá)的Apoptin無阻礙的進(jìn)入毗鄰的甚至已經(jīng)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞 23 24 當(dāng)重組病毒感染腫瘤細(xì)胞后除了能殺死該細(xì)胞之外 它分泌的目的蛋白可以殺死毗鄰的腫瘤細(xì)胞 更重要的是當(dāng)腫瘤內(nèi)的非腫瘤細(xì)胞 如間質(zhì)細(xì)胞 免疫活性細(xì)胞和血管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)了重組病毒后 表達(dá)的Ant Apoptin和TAT Apoptin不損害這些非腫瘤細(xì)胞 它們可以長期存活并持久表達(dá)可分泌的目的蛋白 對(duì)實(shí)體瘤內(nèi)的殘存腫瘤細(xì)胞和已經(jīng)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞 起到長期持續(xù)的殺傷作用 這在以前的腫瘤基因治療研究中是無法完成的 我們期望該課題的研究能夠?yàn)槟[瘤的基因治療進(jìn)入臨床開辟新道路 本課題的研究是探尋有效的 安全的和特異的治療惡性腫瘤的生物學(xué)方法 我們選用了雞貧血病毒的VP3 Apoptin蛋白作為治療腫瘤的特異分子 使用重組慢病毒技術(shù)來增強(qiáng)目的基因在實(shí)體瘤內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力 使用信號(hào)肽和引導(dǎo)肽序列來實(shí)現(xiàn)非腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)后的長期持續(xù)分泌表達(dá) 采用Ant Apoptin和TAT Apoptin融合表達(dá)方式 保證治療分子可以進(jìn)入未轉(zhuǎn)導(dǎo)重組病毒的殘余腫瘤細(xì)胞和已經(jīng)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞 并確保治療分子導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞核內(nèi)的靶部位 通過以上設(shè)計(jì)來實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌等實(shí)體瘤安全有效的特異性治療 立項(xiàng)依據(jù) 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)分析注意事項(xiàng)層層展開 強(qiáng)調(diào)分析綜合 著重找出別人研究的不足或缺陷綜述不全面 忽略了重要進(jìn)展 提出的問題別人已解決圍繞課題的思路進(jìn)行綜述 層次清晰 觀點(diǎn)鮮明邏輯思路不清晰 沒有圍繞一個(gè)中心問題進(jìn)行綜述研究現(xiàn)狀和分析準(zhǔn)確客觀論述既要充分又要簡練簡單移植或夸大 可行性差 文獻(xiàn)類別要全 以國外文獻(xiàn)為主 也要引用國內(nèi)同行知名專家的文獻(xiàn) 引文信息要全 文獻(xiàn)年代要新 主要是近五年的文獻(xiàn) 最好能有申報(bào)當(dāng)年的最新文獻(xiàn) 撰寫模式作者姓名 題目 具體出處 包括期刊名 年份 卷期 頁碼等 20 30條 新 精 準(zhǔn) 注意事項(xiàng)正文中重要的論點(diǎn)均要有文獻(xiàn)標(biāo)注引文信息 格式規(guī)范統(tǒng)一 與正文相對(duì)應(yīng)盡可能引用最新的英文文獻(xiàn) 近三年占到2 3左右 和頂級(jí)期刊文獻(xiàn)常見問題 過于陳舊 參考文獻(xiàn)不夠全面 格式不統(tǒng)一 立項(xiàng)依據(jù) 研究目標(biāo) 研究目標(biāo)撰寫要點(diǎn)指研究要達(dá)到的目的 最終結(jié)果 是對(duì)標(biāo)題進(jìn)一步的具體化 是研究對(duì)象 研究方法 成果和應(yīng)用的高度概括 不能夠轉(zhuǎn)寫成為研究內(nèi)容中階段性成果的羅列 通常使用一 兩句話表達(dá)清楚 一般撰寫格式明確 關(guān)系 揭示 規(guī)律 闡明 原理 機(jī)制 建立 方法等 探尋一種治療肝癌等實(shí)體瘤安全的 有效的 特異的生物學(xué)方法 為實(shí)體瘤的基因治療帶來新突破 研究目標(biāo) 研究內(nèi)容 研究內(nèi)容是指圍繞研究目標(biāo)擬開展的實(shí)驗(yàn)研究 內(nèi)容要適當(dāng) 確保研究周期內(nèi)完成 為目標(biāo)服務(wù) 與研究目標(biāo)相輔相成 要重點(diǎn)闡述 注意與技術(shù)路線區(qū)別 撰寫要求圍繞研究目標(biāo)逐次展開研究內(nèi)容層次分明研究方法恰當(dāng) 可操作性強(qiáng) 具有可行性注意事項(xiàng)內(nèi)容要適當(dāng) 確保研究周期內(nèi)完成內(nèi)容要適當(dāng) 確保研究周期內(nèi)完成內(nèi)容過多 研究周期難以完成為目標(biāo)服務(wù) 闡述重點(diǎn)內(nèi)容分散 不能集中闡明研究目標(biāo) 與研究方案混淆 羅列實(shí)驗(yàn)步驟問題準(zhǔn)確 方法科學(xué) 先進(jìn) 克隆CAVVP3的基因克隆 從患病雞的外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)分離DNA 使用PCR方法建立CAVVP3 apoptin克隆 測序證實(shí) 已完成 構(gòu)建具有信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 TAT Ant apoptin表達(dá)盒 在已經(jīng)構(gòu)建的NT4信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 ADNF重組載體中使用酶切獲取NT4信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 cDNA片段 合成TAT Ant 滲透肽cDNA片段 通過HindIII同apoptin基因連接構(gòu)建TAT Ant appotin融合基因片段 通過常規(guī)分子生物方法構(gòu)建NT4信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 TAT Ant apoptin表達(dá)盒 構(gòu)建表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒 使用常規(guī)分子生物學(xué)方法將NT4信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 TAT Ant apoptin表達(dá)盒插入到慢病毒重組載體pLenti6 V5 D TOPO載體中 同pLp VSVG和pLP1和pLP2四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞 Blasticidin篩查陽性轉(zhuǎn)化克隆 增殖后收獲表達(dá)目的基因的重組病毒 構(gòu)建表達(dá)TAT Ant EGFP報(bào)告基因的重組慢病毒 使用常規(guī)分子生物學(xué)方法將NT4信號(hào)肽 引導(dǎo)肽 TAT Ant EGFP表達(dá)盒插入到慢病毒重組載體pLenti6 V5 D TOPO載體中 同pLp VSVG和pLP1和pLP2四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞 Blasticidin篩查陽性轉(zhuǎn)化克隆 增殖后收獲表達(dá)報(bào)告基因的重組病毒 表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒對(duì)肝癌細(xì)胞的體外治療作用 培養(yǎng)P53缺失 P53變異和具有野生性P53的肝癌細(xì)胞 感染表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒和表達(dá)TAT Ant EGFP報(bào)告基因的重組慢病毒 觀察轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和使腫瘤凋亡能力 表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒對(duì)裸鼠移植瘤和轉(zhuǎn)移腫瘤的治療作用 接種肝癌細(xì)胞到裸鼠皮下 制備移植瘤和移植后轉(zhuǎn)移瘤動(dòng)物模型 腫瘤注射表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒 通過病理學(xué)檢測觀察對(duì)腫瘤治療作用和對(duì)轉(zhuǎn)移病灶的治療作用 表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒誘導(dǎo)腫瘤凋亡的特異性和安全性 分離人包皮成纖維細(xì)胞和臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 體外培養(yǎng)和轉(zhuǎn)導(dǎo)表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒 觀察目的基因的表達(dá)和對(duì)非腫瘤細(xì)胞的影響 將表達(dá)TAT Ant apoptin的重組慢病毒和表達(dá)TAT Ant EGFP報(bào)告基因的重組慢病毒注射到小鼠肝臟 病理學(xué)檢查目的基因的表達(dá)和對(duì)正常肝細(xì)胞的影響 擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題 什么是關(guān)鍵科學(xué)問題 關(guān)鍵科學(xué)問題 是指研究過程中對(duì)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素 以及為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段 包括課題設(shè)計(jì)中具體的關(guān)鍵科學(xué)問題和技術(shù)問題 提煉 個(gè) 為什么 意義何在 撰寫模式自己研究的領(lǐng)域的關(guān)鍵科學(xué)問題 本研究邏輯思路 意義 已具備的科學(xué)發(fā)現(xiàn) 硬件和軟件條件 最關(guān)鍵問題的解決方案注意事項(xiàng) 找準(zhǔn)關(guān)鍵問題 并提出解決辦法 特別注意必要時(shí)提供實(shí)驗(yàn)失敗候選方案不會(huì)總結(jié) 未能抓住關(guān)鍵問題或抓得不準(zhǔn) 過于簡單 和其他部分重復(fù) 研究方案 研究方案是指課題實(shí)施中具體的 可執(zhí)行的工作方案和流程 應(yīng)對(duì)該部分予以強(qiáng)有力的支持和說明 使評(píng)審專家感到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得合理 可行 能夠獲得良好實(shí)驗(yàn)結(jié)果 撰寫要求 以研究項(xiàng)目的需求為前提 盡量采用最適合的方法和手段 并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中 常見問題過于簡單 在方案中只有方法名稱而無具體步驟 過于繁雜 大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法 研究方法 研究方法撰寫要點(diǎn)研究方法 擬采取的研究方案及可行性分析 主要指在研究的過程中 所應(yīng)用到 采用 的方法學(xué)問題包括 有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法 手段 技術(shù)路線和方案 關(guān)鍵技術(shù)等 均應(yīng)給予強(qiáng)有力的支持和說明 使評(píng)審人感到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的合理 可行 能夠獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 此段描述不好的缺陷是讓人感覺到實(shí)驗(yàn)不可行或者根本完不成課題的實(shí)驗(yàn) 同時(shí)注意實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的范圍 太大使人感到不易完成 太小使人感到份量不夠 技術(shù)路線 技術(shù)路線撰寫要點(diǎn)實(shí)際上是完成課題的實(shí)驗(yàn)流程圖 針對(duì)研究目標(biāo) 研究內(nèi)容 研究方法等所制定的合理 可行的路徑 這個(gè)路徑使評(píng)閱人能夠清楚的看明白 描述時(shí)一定要與前面的研究目的 研究內(nèi)容 研究目標(biāo)等內(nèi)容有密切的關(guān)聯(lián) 這幾個(gè)環(huán)節(jié)密切相關(guān)相互銜接 達(dá)到研究目標(biāo)明確 研究內(nèi)容充實(shí) 研究范圍合理 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)較為完善 技術(shù)路線可行 可行性分析 可行性分析 考察課題組是否有能力和條件完成所申請(qǐng)的課題 從思路 技術(shù) 條件和人員角度 使用中性詞 給出具體理由 能夠說服評(píng)審專家 撰寫模式對(duì)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的理論分析研究手段方法分析預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析對(duì)相關(guān)條件的分析注意事項(xiàng)理論可行性 條件可行性 研究基礎(chǔ)可行性不知道從何處開始分析 不知道哪些問題可以體現(xiàn)課題設(shè)計(jì)的可行性容易讓人懷疑的研究內(nèi)容和方案需要特別說明 舉例 理論上具有可行性 有前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持 良好的研究工作基礎(chǔ) 專業(yè)互補(bǔ)的課題組成員 技術(shù)成熟 實(shí)驗(yàn)設(shè)備有保障 可行性分析 特色與創(chuàng)新 特色與創(chuàng)新即在本項(xiàng)目研究領(lǐng)域中申請(qǐng)者與國內(nèi)外同行所不同 應(yīng)從對(duì)包括項(xiàng)目的立論依據(jù) 研究內(nèi)容 研究方法與手段 技術(shù)路線及其實(shí)驗(yàn)方案上的研究與創(chuàng)新點(diǎn)進(jìn)行概括 提煉并集中反映出來 學(xué)術(shù)思想 理論 的創(chuàng)新資源創(chuàng)新技術(shù)或者方法學(xué)的創(chuàng)新創(chuàng)新點(diǎn)可以體現(xiàn)近期的研究成果 更要突出深入和延續(xù)研究的必要性 本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處的撰寫要點(diǎn)假設(shè)創(chuàng)新 通過實(shí)驗(yàn) 臨床過程 提出 研究的假設(shè) 期望通過 手段和方法證明 假設(shè) 思路創(chuàng)新 與既往研究不同的設(shè)計(jì)思路 期望通過 方法和手段證明 是思路創(chuàng)新 技術(shù)或者方法創(chuàng)新 采用何種實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決項(xiàng)目中 關(guān)鍵問題 資源創(chuàng)新 疾病家系 血清庫 標(biāo)本庫 數(shù)據(jù)庫等 特色與創(chuàng)新 一般寫作格式本研究的特色是從 方面入手 對(duì) 的問題進(jìn)行研究 期望闡明 揭示 機(jī)制 這些研究在國內(nèi)外鮮有報(bào)告 此外 通過 的研究 為臨床的應(yīng)用提供 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ) 特色與創(chuàng)新 年度計(jì)劃 年度研究計(jì)劃撰寫要點(diǎn)注意要客觀 合理的劃分年度計(jì)劃進(jìn)展 以體現(xiàn)所制定的目標(biāo)能夠完成 注意論文撰寫篇數(shù)和質(zhì)量 包括 SCI MI EI 國內(nèi)統(tǒng)計(jì)源或者核心期刊 國內(nèi)外學(xué)術(shù)會(huì)議等 年度研究計(jì)劃撰寫要點(diǎn)人才培養(yǎng) 研究團(tuán)隊(duì) 博士 碩士研究生培養(yǎng) 一般面上項(xiàng)目 培養(yǎng)1 2名博士或者2 3名碩士 不要太多 一般預(yù)留出6個(gè)月的時(shí)間進(jìn)行總結(jié) 此段撰寫的目標(biāo)基本上是按照課題的研究內(nèi)容 研究方法和技術(shù)路線所制定的方案進(jìn)行 切記研究內(nèi)容 范圍 工作量的控制 撰寫的太大 太多不易完成 年度計(jì)劃 預(yù)期研究成果 預(yù)期研究成果撰寫要點(diǎn)理論成果 在某一理論方面有所建樹 創(chuàng)新 應(yīng)用成果 在某項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù) 方法學(xué)上獲得創(chuàng)新 預(yù)期研究成果與 研究特色和創(chuàng)新 基本上應(yīng)該一致 預(yù)期研究結(jié)果也還包括 擬組織的國內(nèi) 外重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng) 國際合作項(xiàng)目 交流計(jì)劃 發(fā)表學(xué)術(shù)論文等 預(yù)期結(jié)果要考慮對(duì)基礎(chǔ)和實(shí)用雙重的價(jià)值 如果能夠建立一套實(shí)物體系是最佳的結(jié)果 一般發(fā)表論文和申請(qǐng)專利結(jié)題比較容易 好標(biāo)志是SCI收錄的雜志 最終結(jié)題情況是基金委專家們最關(guān)心的事情 預(yù)期研究成果 舉例 理論成果 建立 豐富 補(bǔ)充 填補(bǔ) 技術(shù)方法 建立 完善 專利成果 可望獲得 論文專著 SCI論文 具體數(shù) 學(xué)術(shù)著作 具體數(shù) 人才培養(yǎng) 青年科技骨干 博碩研究生 預(yù)期研究成果 研究基礎(chǔ) 工作基礎(chǔ)包括申報(bào)者個(gè)人 團(tuán)隊(duì)或?qū)W校相關(guān)工作基礎(chǔ) 人員和設(shè)備資源 學(xué)術(shù)積累 方法和技術(shù)建立 特別是關(guān)鍵技術(shù) 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 撰寫模式項(xiàng)目的理論基礎(chǔ) 前期