【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）Nitazoxanide干混懸劑及伊維菌素復(fù)方干混懸劑的研究基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)碩士論文

密級(jí)（ 秘密 ） 論文編號(hào) ： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 伊維菌素復(fù)方干混懸劑的 研究 on on 要 論文 題目： 混懸劑 及伊維菌素復(fù)方干混懸劑的 研究 on 是 一種具有廣闊應(yīng)用前景的高效、廣譜抗動(dòng)物與人體寄生蟲(chóng)、細(xì)菌和真菌感染藥物，在我國(guó)還沒(méi)有 該產(chǎn)品 上市，為充分發(fā)掘其 獸醫(yī)臨床上的 應(yīng)用潛力， 本文 進(jìn)行了 混懸劑的研究。 初步探討了 備方法 ： 以 25噻唑 和 鄰 乙酰 水楊酰氯 作為合成起始原料，經(jīng)?；磻?yīng)、 乙 醇重結(jié)晶而得。 得到的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)薄層色譜法、 、 、 、 1率為 35%45%， 通過(guò)建立的 量可達(dá)到 99%。 以沉降體積比、再分散性、 為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì) 混懸劑處方進(jìn)行篩選，并考察優(yōu)選處方的流體性能、粒徑分布及穩(wěn)定性。 建立了一種簡(jiǎn)單快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)和靈敏度高的反相高效液相色譜法測(cè)定 混懸劑的含量，以控制該制劑的質(zhì)量。色譜柱為迪馬 18（ 00， 5m）柱，流動(dòng)相為 酸水溶液：乙腈 =50： 50 （ V/V） ，檢測(cè)波長(zhǎng)： 346速 1mL/度 在 圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好（ r = 平均回收率為 n=8，方法簡(jiǎn)便，精密度良好。 將 50mg/混 液 ，常溫放置，分別于 1h、 2h、 3h、 4h、 24h、 48h、 72h、 96h、 12044h 時(shí)取樣，經(jīng) 測(cè)定，發(fā)現(xiàn) 懸 液 室溫放置 144h 后依然十分穩(wěn)定。取三個(gè)不同批次的 混懸劑樣品， 鋁箔袋 包裝在溫度為 402 ，相對(duì)濕度為 75%5%的恒溫箱中放置 3 個(gè)月。分別于 0、 1、 2、 3 個(gè)月各取樣一次，每次按混懸劑穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目檢測(cè)該干混懸劑物理性狀 (性狀、色澤、沉降容 積比、再分散性 )和化學(xué)性狀（含量、 和降解產(chǎn)物）的變化。結(jié)果表明該制劑經(jīng)加速試驗(yàn)， 3 個(gè)月后含量仍在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，該制劑在常規(guī)溫度加速試驗(yàn)條件下穩(wěn)定。 制定了 料）、對(duì)照品及其干混懸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案）與起草說(shuō)明。 為考察 使用過(guò)程中的安全性， 用 料藥進(jìn)行 昆明系 小白鼠急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明， 鼠經(jīng)口 于低毒。 進(jìn)行了 混懸劑對(duì)犬復(fù)孔絳蟲(chóng)的療效試驗(yàn)。選擇自然感染復(fù)孔絳蟲(chóng)的犬 6 只，按200mg/kg 劑量 一次 口服此干混懸劑 （按 100mg/kg 。結(jié)果表明，該制劑對(duì)犬復(fù)孔絳蟲(chóng)有良好的驅(qū)殺作用。 制備了一種 伊維菌素 復(fù)方干混懸劑，并建立了此制劑的 高效液相色譜 含量測(cè)定 方法，對(duì)其原料藥和制劑進(jìn)行小白鼠急性毒性試驗(yàn)， 并 對(duì)其臨床驅(qū)除犬消化道線蟲(chóng)效果進(jìn)行了初步觀察。 關(guān)鍵詞： 抗寄生蟲(chóng)藥， 維菌素， 干混懸劑 ， 制備，臨床 試驗(yàn) on an As a on a of on TZ TZ a in R,S,as s. of of 5% 5% 8%. In to an TZ an by of pH of To a TZ in 18 (00,5m) 0： 50( V:V)， 46nm mL/r = n=to be a To TZ in at h,2h,3h,4h,24h,48h,72h,96h,120h TZ 02 ， 5% ,1,2,3 by TZ a 00mg/kg TZ 00mg/kg TZ)TZ in a 00mg/kg bw a in by of in 目 錄 第一章 文獻(xiàn)綜述 1 1 引言 1 2 應(yīng)用概況 1 3 理化性質(zhì) 2 4 藥代動(dòng)力學(xué)研究 2 5 藥理、毒理學(xué)研究 3 6 應(yīng)用研究 5 7 常用獸藥劑型及干混懸劑的特點(diǎn) 6 8 立題依據(jù) 6 第二章 料）的制備與研究 8 一 料）的制備 8 1 引言 8 2 材料與方法 8 3 結(jié)果 10 4 討論 14 二 料）含量測(cè)定方法研究 15 1 引言 15 2 儀器與試藥 15 3 方法與結(jié)果 15 4 討 論 19 三 步穩(wěn)定性試驗(yàn) 20 1 儀器與試藥 20 2 方法與結(jié)果 20 3 討論 22 四 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 23 1 引言 23 2 材料和方法 23 3 結(jié)果 23 4 討論 24 第三章 混懸劑的研制 26 一 混懸劑處方的研究 26 1 引言 26 2 儀器設(shè)備與材料 26 3 方法與結(jié)果 26 4 討論 30 二 混懸劑含量測(cè)定方法研究 32 1 引言 32 2 儀器設(shè)備與試藥 32 3 方法與結(jié)果 32 4 討論 36 三 混懸劑穩(wěn)定性初步研 究 37 1 引言 37 2 混懸劑混懸于水穩(wěn)定性考察 37 3 加速試驗(yàn) 38 4 討論 40 四 混懸劑對(duì)犬復(fù)孔絳蟲(chóng)病的療效試驗(yàn) 41 1 引言 41 2 材料和方法 42 3 結(jié)果 43 4 討論 44 第四章 料）、對(duì)照品及其干混懸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案） 45 一 料）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) （草案） 45 二 照品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) （草案） 51 三 混懸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) （草案） 53 第五章 伊維菌素復(fù)方干混懸劑的初步研究 55 一 伊維菌素復(fù)方干混懸劑的制備 55 1 引言 55 2 儀器設(shè)備與材料 55 3 方法與結(jié)果 55 4 討論 58 二 伊維菌素復(fù)方干混懸劑含量測(cè)定方法的建立 59 1 引言 59 2 儀器與試藥 59 3 方法與結(jié)果 59 4 討論 65 三 伊維菌素復(fù)方制劑對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn) 66 1 材料和方法 66 2 結(jié)果 67 3 討論 69 四 伊維菌素復(fù)方干混懸劑驅(qū)除犬消化道線蟲(chóng)試驗(yàn) 71 1 材料和方法 71 2 結(jié)果 72 3 討論 72 第六章 結(jié)論 73 參考文獻(xiàn) 74 附錄 原始圖譜索引 79 附圖一 紅外光譜圖譜 80 附圖二 紫外光譜圖譜（甲醇為溶劑） 81 附圖三 紫外光譜圖譜（ 5%液為溶劑） 82 附圖四 紫外光譜圖譜（ 5%液為溶劑） 83 附圖五 核磁共振氫譜圖譜 84 附圖六 核磁共振氫譜圖譜（局部放大） 85 附圖七 核磁共振氫譜（重水交換）圖譜 86 附圖八 核磁共振氫譜（重水交換）圖譜（局部放大） 87 附圖九 核磁共振碳譜圖譜 88 附圖十 核磁共振碳譜圖譜（局部放大） 89 附圖十一 質(zhì)譜圖譜 90 附圖十二 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析圖譜 91 附圖十三 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析圖譜（續(xù)） 92 附圖十四 紫外光譜圖譜（甲醇為溶劑） 93 附圖十五 紫外光譜圖譜（甲醇為溶劑） 94 附圖十六 合溶液的紫外光譜圖譜（甲醇為溶劑） 95 致謝 96 作者簡(jiǎn)歷 97 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 1 第一章 文獻(xiàn)綜述 1 引言 寄生蟲(chóng)病種類(lèi)繁多、散布廣泛，是家畜極為常見(jiàn)、危害嚴(yán)重的疾病。寄生蟲(chóng)病給畜牧業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失包括直接經(jīng)濟(jì)損失和防治費(fèi)用。某些寄生蟲(chóng)奪取家畜所需的營(yíng)養(yǎng)物，有 的在幼蟲(chóng)階段在動(dòng)物體內(nèi)移行，引起動(dòng)物組織損傷或釋放毒素，對(duì)機(jī)體造成危害 ， 如導(dǎo)致家畜消瘦、衰弱、貧血，甚至造成死亡。因而，寄生蟲(chóng)病嚴(yán)重影響肉、乳、蛋的產(chǎn)量 ， 影響皮毛質(zhì)量和役畜的使役能力 ， 某些人畜共患寄生蟲(chóng)病還直接危害人類(lèi)的健康。因此 ， 寄生蟲(chóng)病不僅妨礙畜牧業(yè)的發(fā)展 ， 造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失 ， 而且也是最普遍、最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題（趙輝元 ， 1996；孔繁瑤， 1981）。當(dāng)前發(fā)展畜牧業(yè)的主要障礙是畜禽疫病。一些重大的畜禽傳染病往往給一個(gè)國(guó)家或地區(qū)的國(guó)民經(jīng)濟(jì)帶來(lái)致命性的打擊，如歐洲的 “瘋牛病 ”、香港發(fā)生的 “禽流感事件 ”、馬來(lái) 西亞由 毒引起豬的腦炎等。在當(dāng)今世界，我國(guó)是一個(gè)舉足輕重的畜牧業(yè)生產(chǎn)大國(guó)，豬、羊、禽、兔飼養(yǎng)量均位居世界第一，牛的飼養(yǎng)量?jī)H次于印度。但我國(guó)畜產(chǎn)品出口是小國(guó)，出口量不到總產(chǎn)量的 1。這不是產(chǎn)量問(wèn)題，而 主要 是產(chǎn)品藥物殘留超標(biāo)問(wèn)題，藥物殘留超標(biāo)歸根到底是疾病問(wèn)題。歐盟曾多次派獸醫(yī)專(zhuān)家到我國(guó)考察，都因動(dòng)物疾病的控制問(wèn)題始終都沒(méi)有達(dá)成進(jìn)口我國(guó)肉類(lèi)產(chǎn)品的協(xié)議?？梢?jiàn)進(jìn)行動(dòng)物重大 疫 病和人畜共患病的研究與控制，對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)和人民健康具有舉足輕重的作用。 近 10 多年來(lái)，對(duì)傳播快、病死率高的烈性疫病，尤其對(duì)可能危及人類(lèi)健 康及生命安全的畜禽疫病的監(jiān)測(cè)、防治技術(shù)研究和體系建設(shè)等方面加大了投入，成效顯著。相比之下，急性死亡率相對(duì)較低，而經(jīng)濟(jì)損失巨大的畜禽寄生蟲(chóng)病，由于科技和資金的投入不足，適合于生產(chǎn)的新技術(shù)不多，寄生蟲(chóng)病防治技術(shù)基本沒(méi)有較大突破和創(chuàng)新，化學(xué)防治仍是目前主導(dǎo)的防治手段（ et 1999； 1997）。由于抗藥性的日益嚴(yán)重和原有抗寄生蟲(chóng)藥物本身的缺陷，新藥的開(kāi)發(fā)是寄生蟲(chóng)病化學(xué)防治中非常重要的問(wèn)題，也是推動(dòng)寄生蟲(chóng)化學(xué)防治的根本?？辜纳x(chóng)藥物的發(fā)展趨勢(shì)是：抗蟲(chóng)譜越來(lái)越廣，抗蟲(chóng)活性越來(lái)越強(qiáng)， 毒副作用越來(lái)越小。 近年來(lái) ， 為一種高效、廣譜抗動(dòng)物與人體寄生蟲(chóng)、細(xì)菌和真菌感染的藥物被廣泛關(guān)注 ， 它是美國(guó)藥品和食品監(jiān)督管理局（ 準(zhǔn)的第一個(gè)和唯一的用于治療隱孢子蟲(chóng)屬的藥物，也是 40 多年來(lái)批準(zhǔn)用于治療賈第蟲(chóng)屬的第一種新藥（ 2003；陳阜新等 ， 2004） ， 目前在澳大利亞、新西蘭、美國(guó)、加拿大、墨西哥等國(guó)家上市，我國(guó)還沒(méi)有該產(chǎn)品。 2 用于 治療絳蟲(chóng)、線蟲(chóng)和鞭蟲(chóng)等胃腸道寄生蟲(chóng)感染的有效藥物 (1982)，同時(shí)也是一種很有前景的抑制真菌劑和滅螺劑（ et 1976）。大量臨床試驗(yàn)研究表明， 陰道毛滴蟲(chóng)（ 溶組織內(nèi)阿米巴（ 犬復(fù)孔絳蟲(chóng)（ 豌豆形帶絳蟲(chóng)（ 以及抗皮膚中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 2 真菌感染 (et 1998； et 1997； et 1998) 等。 3 理化性質(zhì) 硝基噻唑酰胺化合物，化學(xué)名 是 252 ） 苯甲酰胺 2-（ 5其分子式是 子量為 點(diǎn)為 202 ，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 1（ a）。通常 一種穩(wěn)定的淡黃色結(jié)晶狀粉末（ et 1985)，純度可達(dá) 98%；不溶于水，微溶于乙醇，可溶于二甲亞砜（ 有機(jī)溶劑。 a ) n i t a z o x a n i d e R = C C H 3O( b ) t i z o x a n i d e R = H( c ) t i z o x a n i d e g l u c u r o n i d e R = G l u c -( d ) t i z o x a n i d e s u l f f a t e R = O 3 S O - N H(e) H 2 C H(f) (g) 1in 藥代動(dòng)力學(xué)研究 目前 上市產(chǎn)品主要是口服制劑 (人用的混懸劑、包衣片劑及馬用的糊劑等 )，現(xiàn)對(duì)口服給藥后 其代謝產(chǎn)物的藥代動(dòng)力學(xué)研究作簡(jiǎn)要介紹。 （ et 1996）對(duì) 6 名健康志愿者的研究表明：口服 ，并不能在血漿與尿中檢測(cè)到原形藥物。這是因?yàn)?在水相介質(zhì)中自發(fā)水解為 T（ 結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 1b） 。研究表明，口服單劑量 500 衣片， 26h 后可檢測(cè)到 T 的峰濃度 ，血藥濃度 時(shí)間曲線下面積 h/L，半衰期為 （ et 2000）研究發(fā)現(xiàn) 口服 給藥后并不能在諸如血漿、尿液或糞便等樣品中檢測(cè)到原形藥物的存在。體外代謝試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)不用微粒體或用熱滅活的微粒體孵育 2h 后，大約 35 的 乙?；D(zhuǎn)化為 T。有微粒體參與時(shí)，脫乙?；乃俾蕰?huì)快得多，孵育 15僅有痕量的 在。在體內(nèi)血漿酯酶作用于 ?；馑俾蕦⒅袊?guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 3 更快，并且受 、溫度等因素影響。 37 時(shí) 血漿消除半衰期僅為 6 （ et 2002）報(bào)道進(jìn)食同時(shí)服用 提高其生物利用度。 32 名男性健康志愿者隨機(jī)分為 4 組，每組中有 2 人服用安慰劑， 6 人服用單劑量的 4 組分別服 1、 2、3 和 4g）。首先在空腹的條件下服藥 1 次， 1 周后同時(shí)給予標(biāo)準(zhǔn)早餐再服藥 1 次。兩次分別于 24 和 一代謝產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 1c） )。結(jié)果顯示，無(wú)論何劑量組， 食物同服后 T 和 血藥濃度均比未吃早餐的情況提高了約一倍，同時(shí)達(dá)峰時(shí)間和表觀半衰期也隨給藥劑量成比例增加。 口服給藥后， 人體內(nèi)迅速水解為活性代謝產(chǎn)物 T（ et 2000） 。而 T 通過(guò) 各種途徑轉(zhuǎn)化為其他代謝產(chǎn)物，如 、 、 以及 等，其結(jié)構(gòu)式分別見(jiàn)圖 1 （ c） 、 （ d） 、 （ e） 、（ f） 、 （ g） 。 T 經(jīng)口服吸收后主要排泄于尿液、膽汁和糞便中 （ et 2000） ，并且為糞便中可檢測(cè)到的唯一代謝產(chǎn)物 （ 2002） 。 T 與血漿蛋白結(jié)合率極高（ ）（ et 1997） ， 因而當(dāng) 某種血漿蛋白結(jié)合率較高、治療窗狹窄的藥物同時(shí)服用時(shí)，應(yīng)注意它們之間可能發(fā)生結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)作用。但目前為止未見(jiàn)到關(guān)于 其他藥物相互作用的報(bào)道（ et 2005） 。 尿中檢測(cè)到的主要代謝產(chǎn)物（ et 2000），同時(shí)也存在于血漿、膽汁中。 單劑量口服 500 有給藥劑量的 8 會(huì)以代謝產(chǎn)物的形式在尿液中被檢出，其中5以 T 的形式存在， 3以 形式出現(xiàn)，而 占 （ et 1996）。 有研究（ 2003）將含有 32 抗原蟲(chóng)糊劑用于治療由神經(jīng)細(xì)胞肉孢子蟲(chóng)（ 引起的馬原生動(dòng)物腦脊髓炎（ 分別一次或多次 給 8 匹健康雜種馬（雌雄各半） 連續(xù) 口服 7 天該糊劑。結(jié)果表明， 馬體內(nèi)很快代謝為活性代謝產(chǎn)物 T，給藥 24h 后即檢測(cè)不到 T。該法最低檢測(cè)限（ 低定量限（ 次口服糊劑 50mg/ kgh ，多次口服 kgh。這些數(shù)據(jù)顯示，在 28 天治療 周 期內(nèi)，多次給藥血漿中活性代謝產(chǎn)物 T 的血藥濃度始終可達(dá)到治療神經(jīng)細(xì)胞肉孢子蟲(chóng)的要求。 5 藥理、毒理學(xué)研究 用機(jī)制 原生動(dòng) 物的作用機(jī)制被廣泛認(rèn)為與其干擾丙酮酸鹽 : 鐵氧化還原蛋白酶（ 與的酶依賴(lài)性電子轉(zhuǎn)移作用有關(guān)（ 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 4 2002）。此作用對(duì)于厭氧能量代謝來(lái)說(shuō)是必不可少的，而 壞了厭氧和微需氧有機(jī)體的能量代謝，從而有效地抑制了原生動(dòng)物的生長(zhǎng)，并且避免了傳統(tǒng)用于抗原生動(dòng)物藥物的毒性（ 2002）。研究表明，在無(wú)鐵氧化還原蛋白存在的前提下，藍(lán)氏賈第鞭毛 蟲(chóng) ( 直接通過(guò)電子轉(zhuǎn)移方式還原了 小隱孢子蟲(chóng)( 化的 白序列與藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)的極為相似。但是干擾 依賴(lài)的電子轉(zhuǎn)移作用并不是 揮抗蟲(chóng)活性的唯一機(jī)制，因有報(bào)道（ et 998） 可以表現(xiàn)為對(duì) 成的劑量依賴(lài)性作用 ， 但確切機(jī)制還不清楚。也有研究（ et 1995）顯示， 揮抗菌活性的時(shí)候硝基在靶生物中被還原，與甲硝達(dá)唑相比， 需的氧 化還原電位至少比前者低 。 理學(xué)研究 據(jù)報(bào)道 (1976)， 小鼠急性毒性經(jīng)口大于 4000mg/腹腔注射大于95mg/（ et 1985）曾對(duì) 一般毒理學(xué)作