離子色譜法同時測定中藥注射劑中亞硫酸鹽及枸櫞酸含量的研究.doc

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中圖分類號O65775文獻標識碼A文章編號10048685（2012）03047003SimultaneousdeterminationofsulfiteandcitricacidinchinesemedicineinjectionbyionchromatographyWANGXinmei，MAOXiuhong，WANGKe（ShanghaiInstituteforFoodandDrugControl，Shanghai201203，China）AbstractObjective：AnionchromatographicmethodwasdevelopedtoanalyzesulfiteandcitricacidinChinesemedicineinjectionsMethods：TheinjectionsamplesweredilutedandcleanedbyOnguardIIRPco/doc/add06ddda58da0116d174902.htmllumnbeforein-jectionAS11HCchromatographiccolumnwasusedandthemobilephasewas12mmol/L60mmol/LKOHTheionsweredetectedbysuppressedconductivitydetectorResults：Thecalibrationcurvesofsulfiteandcitricacidwerebothingoodlinearitywithintherangefrom0gto200g（r=09998，09999）Thedetectionlimitswere0014mg/mlforsulfiteand0013mg/mlforcitricacidTheaveragerecoverieswerebetween90%105%，andrelativestandarddeviation（RSD）was5%Conclusion：Themethodissimple，accurateandsensitive，whichisapplicabletothetestingoflargequantitybatchesofChinesemedicineinjectionKeywordsIonchromatography；Chinesemedicineinjection；Sulfite；Citricacid亞硫酸鹽和枸櫞酸均為常用的藥用輔料，分別作為抗氧化劑和pH調(diào)節(jié)劑添加于中藥注射劑中，以提高注射劑的穩(wěn)定性。適當劑量的枸櫞酸對人體無害，但由于長期攝入有可能導致低可以促進體內(nèi)鈣的排泄和沉積，鈣血癥。微量亞硫酸鹽能延長活化凝血酶原時間，并能阻礙尿激酶溶纖蛋白活性，病人在幾分鐘內(nèi)即可發(fā)生過敏反應；特別是對患者肝功能有影響，導致轉(zhuǎn)氨酶升高，1嚴重的有可能引致肝細胞壞死。在保證中藥注射劑的質(zhì)量的同時，為最大限度的控制注射劑中亞硫酸鹽和枸櫞酸的用量，減少不良反應，生產(chǎn)企業(yè)應按照已批準的生產(chǎn)工藝最大限度的控制亞硫酸鹽和枸櫞酸的用量，更不能違法添加。為監(jiān)測中藥注射劑是否按照/doc/add06ddda58da0116d174902.html生產(chǎn)工藝添加或者違法添加亞硫酸鹽和枸櫞酸，需要對注射液中這兩種輔料的含量進行控制，以全面的控制中藥注射作者簡介王欣美（1977），女，碩士，主管藥師，主要從事食品藥品檢測及污染物檢測技術(shù)研究。劑的質(zhì)量。文獻報道的亞硫酸鹽檢測方法主要有滴定法、比色2，3，法、色譜法等枸櫞酸的檢測方法主要有非水滴定4567法，高效液相色譜法，離子色譜法，比色法等。本文建立了一種簡便、快速離子色譜法同時測定中藥注射劑中亞硫酸鹽及枸櫞酸含量的檢測方法，取得滿意效果，為中藥注射劑的質(zhì)量控制提供了一定的參考。111材料與方法儀器與試藥ICS2100型離子色譜儀（美國Dionex公司）；MilliQ超純水儀（美國Millipore公司）。甲醛（體積分數(shù)為37%）為分析純，水為超純水，電阻率為182Mcm。亞硫酸鈉對照品（由Sigma公司提供，純度98%）、枸櫞酸對照品（中國藥品生物制品檢定研究院，批號111679200401）。11種中藥注射劑分合計共117批樣品。別來源于國內(nèi)29家生產(chǎn)企業(yè)，中國衛(wèi)生檢驗雜志2012年3月第22卷第3期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Mar2012；Vol22No347112色譜條件色譜柱：IonPacAS11HC（4mm250mm）離子交IonPacAS11（4mm50mm）保護柱；淋洗液：氫氧換柱，化鉀溶液；流速：10ml/min；抑制器：ASRS4mm陰離子抑制器，抑制電流149mA；檢測器：電導檢測器；檢測池溫度：30；柱溫：30；進樣量：25l。13樣品前處理方法精密量取注射液1ml，置10ml量瓶中，加體積分數(shù)為148%的甲醛溶/doc/add06ddda58da0116d174902.html液稀釋至刻度，搖勻，將溶液通過Di-onexOnguardIIRP小柱（25cc），棄去先流出的3ml流收集其余的流出液，經(jīng)微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即出液，得。14混合標準溶液系列的配制精密稱取亞硫酸鈉和枸櫞酸各100mg，置100ml量瓶中，加體積分數(shù)為074%的甲醛溶液溶解，并稀釋至刻度，即得混合標準儲備液（1mg/ml）。分別精密量取混合標準儲備液（1mg/ml）適量，用體積分數(shù)為074%的甲醛溶液逐級稀釋成每ml含亞硫酸鈉和枸櫞酸各2g，5g，10g，20g，40g，100g，200g的標準系列溶液（臨用新配）。221結(jié)果與討論離子色譜分離條件的選擇A：亞硫酸鈉和枸櫞酸對照品；B：清開靈注射液；C：燈盞花素注射液；1：亞硫酸根；2：枸櫞酸圖1對照品和樣品的離子色譜圖22色譜柱溫度的選擇為了使亞硫酸根和枸櫞酸與其他常規(guī)陰離子能夠在最短的時間內(nèi)得到很好的分離，對淋洗液梯度淋洗程序進行了優(yōu)化。常規(guī)陰離子在不同濃度淋洗液下的保Cl，NO2，NO3，SO2留時間順序為F，其中亞硫酸根4，2枸櫞酸與其他常規(guī)陰離子相隔較遠，但中與SO4接近，藥注射劑中常含有其他有機酸，易對枸櫞酸的分離造成選擇了最佳梯度淋洗液濃度和時干擾。經(jīng)過反復摸索，間，使不同品種的中藥注射液中待測離子與其他干擾離子均得到有效分離，淋洗程序見表1，色譜分離圖見圖1。表123456735，40，50研究中，對不同色譜柱溫度：30，進行兩檢測比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)柱溫40時，亞硫酸根和枸櫞酸色譜峰與其他離子的分離度較差。經(jīng)反復實驗在該柱溫下，亞硫酸根和枸櫞酸能夠得選擇柱溫30，/doc/add06ddda58da0116d174902.html到較好的分離及合適的保留時間。23方法的線性范圍及檢出限對不同濃度混合標準溶液系列進行測定，以峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，繪制的標準曲線。結(jié)果表明，在0mg/L200mg/L范圍內(nèi)亞硫酸根和枸櫞酸的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于09990。以基線噪音3倍相當?shù)臉藴势窛舛葹闄z出限，按取樣1ml，定容體積10ml計算最低檢出濃度，見表2。表2亞硫酸根枸櫞酸淋洗液梯度淋洗程序2017019026031035012020020060 600120方法的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出濃度02000200Y=02247x01968Y=00618x0000009998099990014001324方法精密度和準確度試驗精密量取各品種注射液1ml（已知均不含亞硫酸鈉和枸櫞酸），加入亞硫酸鈉和枸櫞酸混合標準溶液，同法進行樣品前處理后進行測定，同時做6個平行樣，計算結(jié)果見表3。結(jié)果表明方法精密度、準確回收率和RSD，RSD均小于5%。度好，回收率為90%105%，25穩(wěn)定劑的使用及穩(wěn)定性試驗由于亞硫酸根不穩(wěn)定，在水溶液中極易被氧化成硫酸根，故樣品及標準溶液必須加入穩(wěn)定劑，以抑制亞硫3酸根的氧化。本研究參考文獻采用甲醛做亞硫酸根0185%、的穩(wěn)定劑。研究比較了甲醛溶液的濃度：0%、472表3中國衛(wèi)生檢驗雜志2012年3月第22卷第3期ChineseJournalofHealthLabo/doc/add06ddda58da0116d174902.htmlratoryTechnology，Mar2012；Vol22No3回收率實驗結(jié)果（n=6）1929319029283419494137334544282941199218241889196988905937972201620164520618痰熱清注射液舒血寧注射液3820618185939206181913丹香冠心注射液2016苦黃注射液生脈注射液清開靈注射液血塞通注射液黃芪注射液香丹注射液201620162016201620162016412061820731005202310032820618216810521981983462061820871012037%、074%、148%，測定20mg/L亞硫酸根對照品結(jié)果表明，不加入甲醛穩(wěn)定劑亞硫酸根溶液的峰面積，非常容易氧化，峰面積降低較快。當甲醛的濃度大于074%時，亞硫酸根的峰面積則較穩(wěn)定。因此甲醛穩(wěn)定劑的濃度確定為074%。由于中藥注射劑中的一些化合物可能與甲醛發(fā)生反應，因此樣品中的甲醛量需要過量。實驗證明樣品稀釋溶劑選擇148%的甲醛溶液比較合適。穩(wěn)定性實驗證明，對照品溶液和供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。26樣品的測定20281006372061820911014196519221952194297595396896321206181943432061819142720618186038206181880942928902/doc/add06ddda58da0116d174902.html912燈盞花素注射液2016丹參注射液2016對11種不同的中藥注射液共117批樣品進行了亞硫酸鹽和枸櫞酸含量的測定，結(jié)果見表4。從上述結(jié)果可以看出，大部分中藥注射劑中未檢出亞硫酸鹽和枸櫞酸。某些品種注射液在不同企業(yè)產(chǎn)品中普遍檢出枸櫞酸，提示可能該品種法定生產(chǎn)工藝中枸櫞酸是規(guī)定需要添加的輔料。樣品測定結(jié)果1001001001001309110025100100000027100907500000027000000000033000000表4100100100100100100100100100758300000000001700000000010痰熱清注射液舒血寧注射液丹香冠心注射液苦黃注射液生脈注射液清開靈注射液血塞通注射液黃芪注射液香丹注射液燈盞花素注射液丹參注射液121354152121984243小結(jié)離子色譜法是分析陰離子及有機酸的一種極為有效的方法，具有多種離子同時分離檢測、靈敏度高、快速高效、易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。本研究探討了采用離子色譜法對中藥注射劑中亞硫酸鈉和枸櫞酸進行同時分析，一次進樣35min內(nèi)完成分離測定，方法操作簡便、精密度及準確度均較滿意，為中藥注射劑提供了一種較為新穎的質(zhì)量控制手段，具有較好的參考和實用價值。參考文獻2陳飛東，戴志遠食品中亞硫酸鹽測定方法的研究進展J食品2006，27（8）：139142研究與開發(fā)，3黃惠玲，王玉健，卓海華，等食品中亞硫酸鹽的離子色譜法測定J分析實驗室，2009，28（8）：15174中國藥典2010年版S二部20105董曉東，孫靜，何影高效液相色譜法測定紅細胞保存液中枸櫞J色譜，2003，21/doc/add06ddda58da0116d174902.html（1）：46酸及其鈉鹽總量6顏金良，王立離子色譜法同時