革蘭陽性需氧桿菌

1 第十三章革蘭陽性需氧桿菌 2 需氧芽胞桿菌屬 Bacillus 48個(gè)種與醫(yī)學(xué)有關(guān)5個(gè)種炭疽芽胞桿菌 B anthracis 蠟樣芽胞桿菌 B cereus 蕈狀芽胞桿菌 B mycoides 巨大芽胞桿菌 B megaterium 蘇云金芽胞桿菌 B thuringiensis 3 第一節(jié)炭疽芽胞桿菌 Bacillusanthracis B anthraci 一 臨床意義炭疽是人畜共患的急性傳染病主要是牛 羊等食草類動(dòng)物的傳染病 人可通過接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染皮膚炭疽 腸炭疽 肺炭疽等 并發(fā)敗血癥 甚至炭疽性腦膜炎 4 致病物質(zhì) 莢膜 抗吞噬 有利于細(xì)菌在組織內(nèi)繁殖擴(kuò)散炭疽毒素 保護(hù)性抗原 致死因子 水腫因子 5 所致疾病 炭疽病 傳染源 患病食草動(dòng)物及其制品或被污染物傳播途徑 接觸 皮膚炭疽食用 腸炭疽吸入 肺炭疽可并發(fā)敗血癥 死亡率極高 6 乙類傳染病發(fā)生肺炭疽按甲類處理 病后可獲得持久免疫力 7 形態(tài)染色 致病菌中最大的G 桿菌 兩端平切 竹節(jié)狀有毒株可有明顯莢膜 二 微生物特性 炭疽芽胞桿菌亞甲基藍(lán)染色 1000 革蘭染色 1000 8 芽胞 橢圓形 小于菌體 位于菌體中央多在有氧條件下形成 25 30 在培養(yǎng)基中 土壤內(nèi) 動(dòng)物尸體解剖后暴露在空氣中 都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞 尸體嚴(yán)禁解剖 9 培養(yǎng)特性 需氧或兼性厭氧 生長條件不嚴(yán)格 最適溫度30 35 普通培養(yǎng)基 扁平 粗糙 不透明 灰白色 無光澤 邊緣不整齊的菌落 低倍鏡下菌落邊緣呈卷發(fā)狀 10 BAP 12 15h不溶血 18 24h輕微溶血其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速 炭疽桿菌在血瓊脂平板中菌落 11 肉湯 絮狀沉淀生長明膠 37 18 24h表面液化成漏斗狀 由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散形成倒松樹狀 NaHCO3BAP 有毒株 5 CO2 37 24 48h 產(chǎn)生莢膜呈黏液型菌落 挑取時(shí)呈粘絲狀 鑒別要點(diǎn) 無毒株 粗糙型菌落 12 生化反應(yīng) 分解葡萄糖 麥芽糖 蔗糖 蕈糖 有些菌能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解淀粉 還原硝酸鹽不產(chǎn)生吲哚和硫化氫 不利用檸檬酸鹽 不分解尿素在牛乳中生長2 4天牛乳凝固 緩慢胨化觸酶 卵磷脂酶弱 13 抗原構(gòu)造 菌體多糖抗原 與毒力無關(guān) 耐熱 耐腐敗 長時(shí)間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng) Ascoli熱沉淀反應(yīng) 特異性不高 能與其他需氧芽胞桿菌 14型肺炎鏈球菌 人A血型抗原發(fā)生交叉反應(yīng) 14 莢膜多肽抗原 與毒力有關(guān) 有抗吞噬作用 有利于細(xì)菌生長和擴(kuò)散 莢膜腫脹試驗(yàn) 對(duì)本菌鑒定有意義芽胞抗原 有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值 15 炭疽毒素 保護(hù)性抗原 PA 致死因子 LF 水腫因子 EF 三個(gè)組分 單獨(dú)皆無致病性 與PA結(jié)合才顯示出致病性 具有抗吞噬和免疫原性 16 抵抗力 芽胞抵抗力很強(qiáng) 煮沸10min或干熱140 3h才能殺滅 在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致病力不減 牧場(chǎng)一旦污染 傳染性可持續(xù)數(shù)十年 生物武器 17 芽胞對(duì)化學(xué)消毒劑抵抗力不一 對(duì)碘和氧化劑較敏感 常用以下方法殺菌 1 2500碘10min 3 H2O21h 4 高錳酸鉀15min 0 5 過氧乙酸10min 對(duì)磺胺 青霉素 鏈霉素 四環(huán)素 紅霉素 氯酶素均敏感 18 要求快速檢出 分離鑒定病原菌 以利早期確診 查清疫源 及時(shí)治療和采取預(yù)防對(duì)策 三 微生物學(xué)檢驗(yàn) 19 標(biāo)本的采集與處理 皮膚炭疽 病灶深部標(biāo)本肺炭疽 痰和血液腸炭疽 糞 嘔吐物腦膜炭疽 CSF 血液死于敗血癥的動(dòng)物 嚴(yán)禁宰殺和解剖 可消毒皮膚后割取耳朵 舌尖采集少量血液 局限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié) 20 無雜菌污染標(biāo)本 直接接種肉湯增菌或固體培養(yǎng)基污染雜菌固體標(biāo)本 加10倍量生理鹽水充分浸泡 振蕩10 15min 靜置10min 取懸液65 水浴30min或85 5min殺死雜菌 保留芽胞活性 再增菌和培養(yǎng)污染雜菌液體標(biāo)本 離心 棄上清液后 加0 5 洗滌劑振蕩10 15min 離心取沉淀物增菌和分離培養(yǎng) 21 生化反應(yīng) 噬菌體裂解 青霉素抑制 毒力試驗(yàn) 莢膜腫脹試驗(yàn) 22 23 涂片染色 G染色 莢膜染色 芽胞染色 初步報(bào)告 莢膜熒光抗體染色核酸檢測(cè) 核酸雜交分離培養(yǎng) BAP 戊烷脒多粘菌素B平板 2 兔血清肉湯增菌 分離培養(yǎng) 24 鑒定試驗(yàn) 形態(tài)和菌落特征生化試驗(yàn) 表11 1串珠試驗(yàn) 接種于含青霉素 0 05 0 5U ml 的肉湯中 37 6h 大而均勻成串的圓球狀菌體 與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān) 類炭疽無此現(xiàn)象 25 青霉素抑制試驗(yàn) 接種于含青霉素5 10 100U ml瓊脂平板 37 24h生長受抑制不生長串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗(yàn) 兔血瓊脂平板 抑菌環(huán) 青霉素紙片 26 噬菌體裂解試驗(yàn) AP631炭疽噬菌體NaHCO3毒力試驗(yàn) 接種于含0 5 NaHCO3和10 馬血清的平板 10 CO2 37 24 48h有毒株形成莢膜 黏液型菌落無毒株不形成莢膜 粗糙型菌落動(dòng)物試驗(yàn) 小鼠 家兔或豚鼠皮下接種 27 植物凝集素試驗(yàn) Ascoli熱沉淀試驗(yàn) 可作追溯性診斷 28 第二節(jié)蠟樣芽胞桿菌 Bacilluscereus B cereus 29 一 臨床意義 食物中毒含菌量達(dá)105 g以上嘔吐型 耐熱腸毒素腹瀉型 不耐熱腸毒素全眼球炎 外傷后 心內(nèi)膜炎 敗血癥和腦膜炎 30 夏 秋季多見食物有米飯 乳品 禽畜肉類 果汁飲料等 大多為加熱烹調(diào)過的熟食在米飯中極易繁殖 由米飯受污染引起的食物中毒在國內(nèi) 外均為常見中毒食物大多無腐敗 變質(zhì)現(xiàn)象 感官性狀正常 應(yīng)引起注意 31 形態(tài)與染色 G 大桿菌 生長6h后即形成圓形芽胞 位于菌體中心或次末端 不突出菌體 菌體兩端平截 多數(shù)呈鏈狀排列 引起食物中毒的菌株多有周鞭毛 無莢膜 二 微生物特性 32 培養(yǎng)特性 需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高最適溫度30 35 普通瓊脂平板 菌落較大 灰白色 表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀 有蠟樣光澤 33 BAP 有 溶血卵黃平板 生長迅速 培養(yǎng)3h后 雖看不到菌落 但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán) 稱乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng) 34 生化反應(yīng) 能分解葡萄糖 麥芽糖 蔗糖 水楊素 糊精 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳 液化明膠 VP 卵磷脂酶 多次傳代后生化特性?？筛淖?35 抵抗力 耐熱 肉湯中細(xì)菌需100 20min才能殺死 食物中毒菌株的游離芽胞耐受100 30min 干熱120 60min才能殺死對(duì)氯霉素 紅霉素 慶大霉素敏感 對(duì)青霉素 磺胺 呋喃類耐藥 36 三 微生物學(xué)檢驗(yàn) 標(biāo)本采集 可疑食物 糞便 嘔吐物 因食品暴露于空氣中 在一定程度都會(huì)受到本菌污染 所以不能分離出該菌就認(rèn)為是引起食物中毒的病原菌 37 確診由該菌引起的食物中毒必須 從食物中分離出菌數(shù) 105CFU g 提示本菌活躍生長 構(gòu)成潛在危險(xiǎn)從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和 或 嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型 38 39 檢驗(yàn)方法 直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計(jì)數(shù)普通瓊脂平板 BAP 卵黃平板鑒定與分型 根據(jù)菌落特點(diǎn) 形態(tài)染色 生化反應(yīng)等初步鑒定生化分型 血清分型 噬菌體分型 腸毒素檢測(cè) 40 第三節(jié)產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌和紅斑丹毒絲菌 41 一 產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌 Listeriamonocytogenes 隸屬于李斯特菌屬 42 一 臨床意義 李斯特菌屬有7個(gè)種 只有該菌對(duì)人和動(dòng)物致病分布廣泛 土壤 水 植物 人和動(dòng)物糞便中均存在 亦可自甲殼動(dòng)物 蠅 蜱中分離出能引起多種野生動(dòng)物和家畜感染 羊 馬 狗 貓 鳥 魚等 正常人糞便帶菌率達(dá)10 左右 70 的人可短期帶菌 新生兒 免疫功能降低者 易受該菌感染 43 致病物質(zhì) 李斯特菌溶血素O LLO 主要毒力因子內(nèi)在素 表面蛋白 侵襲性蛋白 磷脂酶C 44 所致疾病 健康帶菌者是主要的傳染源污染食物 糞 口途徑傳播 通過腸道擴(kuò)散全身胎盤和產(chǎn)道 感染新生兒接觸病畜及產(chǎn)品 眼和皮膚的局部感染 45 孕婦李斯特菌病新生兒李斯特菌病成人李斯特菌病局部感染 46 二 微生物特性 形態(tài)與染色 G 短小桿菌 形態(tài)與培養(yǎng)時(shí)間有關(guān) 37 3 6h 菌體主要呈桿狀 隨后以球桿狀為主 3 5天常形成長絲狀無芽胞 一般不形成莢膜 在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜 47 20 25 形成周鞭毛 有動(dòng)力 37 時(shí)鞭毛很少或無細(xì)菌接種半固體培養(yǎng)基 置室溫 由于動(dòng)力強(qiáng) 細(xì)菌自穿刺線向四周彌漫生長 在離瓊脂表面數(shù)毫米處出現(xiàn)一個(gè)倒傘形的生長 是本菌特征之一 48 培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌 生長溫度范圍廣0 5 45 均生長 4 冷增菌 最適30 37 營養(yǎng)要求不高 在含血液 血清 腹水的培養(yǎng)基生長更好BAP 極小的露滴狀 側(cè)光微顯藍(lán)綠色 灰白色菌落 狹窄的 溶血環(huán)萘啶酸選擇性平板 細(xì)密濕潤 邊緣整齊的蘭色圓形小菌落肉湯 均勻混濁 表面有菌膜 49 生化反應(yīng) 37 24h 發(fā)酵葡萄糖 果糖 蕈糖 麥芽糖和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣觸酶 甲基紅 VP 水解七葉苷 水解精氨酸產(chǎn)氨CAMP 50 分型 根據(jù)O抗原和H抗原 分4個(gè)血清型 1 3 4型可分若干亞型抗原結(jié)構(gòu)與毒力無關(guān) 與地理分布有聯(lián)系與葡萄球菌 鏈球菌 肺炎鏈球菌 大腸桿菌等有共同抗原 51 抵抗力 耐鹽 耐堿 不耐酸對(duì)熱 常用消毒劑敏感多種抗生素敏感 首選氨芐青霉素 青霉素 鏈霉素 紅霉素等也敏感對(duì)桿菌肽 多粘菌素耐藥 52 三 微生物學(xué)檢驗(yàn) 標(biāo)本采集 血液 CSF 宮頸 陰道 鼻煙分泌物等直接涂片 在CSF標(biāo)本中成對(duì)排列 形如球菌 易誤認(rèn)為肺炎鏈球菌 G染色過度脫色形似流感桿菌 有時(shí)與類白喉?xiàng)U菌也極易混淆可用該菌1型和4型及多價(jià)熒光抗體染色 同時(shí)作動(dòng)力檢查 53 分離培養(yǎng) BAP 巧克力平板雜菌污染標(biāo)本可用20 NaCl心腦浸液肉湯2支1支 10 CO2 37 24 48h 分離培養(yǎng) BAP 萘啶酸選擇性平板 1支 4 冷增菌 分離培養(yǎng) 每24h一次 共4次 以后每周一次 至少4周 54 鑒定 形態(tài)特征 菌落特點(diǎn) 動(dòng)力及生化反應(yīng)作出鑒定可疑菌落用已知李斯特菌1型 4型或多價(jià)抗血清做玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定與其他G 菌鑒別 55 觸酶動(dòng)力馬尿酸鹽水解產(chǎn)單核李斯 B群鏈球菌 本菌有耐堿耐鹽的特點(diǎn) 可用觸酶試驗(yàn)與腸球菌鑒別 56 二 紅斑丹毒絲菌 Erysipelothrixrhusiopathiae E rhusiopathiae 本菌隸屬于丹毒絲菌屬 57 一 臨床意義 廣泛分布于自然界 是許多脊髓動(dòng)物和無脊髓動(dòng)物的共生菌或致病菌易感動(dòng)物有小鼠 豬 魚 火雞等主要儲(chǔ)存宿主是豬人類可因接觸病畜或其產(chǎn)品而感染 58 毒力與其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶有關(guān) 能使細(xì)菌粘附至靶細(xì)胞從事屠宰 經(jīng)營魚類和皮革行業(yè)的人員及獸醫(yī)等感染機(jī)會(huì)較多通過破損皮膚侵入 引起局限性皮膚病灶 通常稱 魚毒 或 類丹毒 59 二 微生物特性 形態(tài)與染色 G 桿菌 菌體細(xì)長 直或稍彎 單個(gè)或短鏈狀 慢性期分離的菌落為粗糙型 常呈長絲狀 而且有分支及斷裂 與放線菌近似 無莢膜 無芽胞 無鞭毛 紅斑丹毒絲菌革蘭染色1000 60 培養(yǎng)特性 厭氧或微需氧 初次分離需在厭氧環(huán)境 傳代后有氧環(huán)境也能生長 最適溫度30 35 在含葡萄糖或血清培養(yǎng)基生長旺盛 61 BAP 35 24h可形成兩種菌落光滑型 菌落細(xì)小 透明突起 發(fā)亮 邊緣整齊 質(zhì)軟易于懸于液體中 毒力較強(qiáng)粗糙型 菌落較大 顆粒狀 扁平 邊緣不齊可呈卷發(fā)狀 無毒力BAP上新分離的菌株有輕微的 溶血 培養(yǎng)時(shí)間延長溶血現(xiàn)象明顯 傳代后溶血特性常消失 62 在半固體表層下數(shù)mm處發(fā)育最好 常呈帶狀含碲鹽的培養(yǎng)基 黑色菌落 63 葡萄糖肉湯 培養(yǎng)24h后 呈輕微混濁 不形成菌膜 室溫靜置2 3天后 管底有少量灰色沉淀 粗糙型沉淀較多 S R變異同時(shí)毒力 抗原性也發(fā)生變異 但遺傳學(xué)上不穩(wěn)定 常出現(xiàn)互變 64 三 微生物學(xué)檢驗(yàn) 標(biāo)本 病灶邊緣組織碎片或皮膚病變抽出液直接涂片G染色鏡檢 G 細(xì)長桿菌 有時(shí)長絲形 單獨(dú)或呈短鏈狀 分離培養(yǎng) 1 葡萄糖肉湯 35 5 CO2環(huán)境增菌 每日移種BAP 可出現(xiàn)二種菌落 S型和R型 65 鑒定依據(jù) G H2S 無動(dòng)力 觸酶 吲哚 VP 與產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌鑒別 表11 2 新霉素敏感試驗(yàn) 紅斑丹毒絲菌 R產(chǎn)單核李斯特菌 S動(dòng)物毒力試驗(yàn) 對(duì)小鼠 大鼠 兔 鴿均有致病性 0 2ml的2 4天培養(yǎng)物注入小鼠腹腔 4 5天后 敗血癥而死 心血培養(yǎng) 66 第四節(jié)陰道加特納菌 Gardnerellavaginalis GV 屬于加特納菌屬此菌屬只有本菌一個(gè)種 67 一 臨床意義 與非特異性陰道炎 細(xì)菌性陰道病 有關(guān) 68 二 微生物特性 形態(tài)與染色 G染色視菌株和菌齡不同而異 實(shí)驗(yàn)室保存菌株趨向G 新鮮臨床標(biāo)本中分離的菌株趨向G 生長在高濃度的血清中呈G 具有多形性 兩端鈍圓 無芽胞 無莢膜 無鞭毛 69 培養(yǎng)特性 兼性厭氧 營養(yǎng)要求較高 在含5 人血瓊脂平板上3 5 CO2 35 37 環(huán)境中培養(yǎng)48h后 可形成0 3 0 5mm大小 圓形 光滑不透明的菌落 在兔血平板上可出現(xiàn) 溶血 在羊血平板上不溶血 70 生化反應(yīng) 氧化酶 觸酶 尿素酶 發(fā)酵葡萄糖 麥芽糖 蔗糖等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解馬尿酸鈉和淀粉 吲哚 明膠液化 甘露醇分解 抵抗力 對(duì)氨芐青霉素 羥氨芐青霉素 苯唑青霉素 青霉素