重組活疫苗ppt課件

重組活疫苗,1,重組活疫苗,2,重組活疫苗,重組活疫苗,指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物，或重組體本身制成的疫苗。其原理是將外源性目的基因（保護(hù)性抗原基因）插入已知的病毒或細(xì)菌的弱毒株或疫苗株的基因組中致使基因獲得高效的表達(dá)，但不影響原弱毒株或疫苗株的生存與繁殖。,重組活疫苗,3,基因缺失活疫苗,基因缺失活疫苗使用分子生物學(xué)技術(shù)去除與毒力有關(guān)的基因獲得的缺失突變毒株制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：有突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復(fù)；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。,重組活疫苗,4,基因工程載體疫苗,基因工程載體疫苗是指利用微生物做載體，將保護(hù)性抗原基因重組到微生物體中，使用能表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組微生物制成的疫苗。,重組活疫苗,5,優(yōu)點(diǎn)：疫苗多為活疫苗，重組體用量少，抗原不需純化，載體本身可發(fā)揮佐劑效應(yīng)增強(qiáng)免疫效果缺點(diǎn)：曾感染過腺病毒或者接種過痘苗的人，對(duì)載體微生物已具有免疫力，使之接種后不易繁殖，因而影響免疫效果。,重組活疫苗,6,重組痘苗病毒,重組質(zhì)粒,痘苗病毒dna,外源抗原基因,病毒dna,重組活疫苗,7,重組活疫苗,8,構(gòu)建痘苗病毒活疫苗所必需的條件,1.外源基因應(yīng)是連續(xù)的2.外源基因必須在痘苗病毒基因組的安全位點(diǎn)處插入3.必須在上述安全點(diǎn)的基因片段內(nèi)建表達(dá)載體4.具有細(xì)胞內(nèi)同源重組的適宜條件5.必須有一種簡(jiǎn)便易行的重組痘苗病毒的選擇方法6.插入外源基因的容量2540kb,重組活疫苗,9,病毒性載體痘病毒載體皰疹病毒載體桿狀病毒載體腺病毒載體RNA病毒,細(xì)菌性活載體卡介苗大腸桿菌傷寒桿菌沙門氏菌,重組活疫苗,10,痘病毒載體,宿主范圍廣、增殖滴度高、穩(wěn)定性好、基因組容量大、含多個(gè)非必需區(qū)基因，易于構(gòu)建和分離重組病毒，適于插入多個(gè)外源基因(40kb)，對(duì)插入的外源基因有較高的表達(dá)水平?？乖苑€(wěn)定，免疫原性持久，能夠同時(shí)誘發(fā)體液和細(xì)胞免疫，相對(duì)安全。痘苗病毒在種痘后局部反應(yīng)較大，在人接種后有百萬(wàn)分之一發(fā)生全身性發(fā)痘和種痘后腦炎等并發(fā)癥傾向。禽類痘病毒，由于用該病毒接種哺乳動(dòng)物后，可以引起頓挫型感染，但卻可以持續(xù)表達(dá)外源基因，并且不影響再次接種。（雞痘病毒）,重組活疫苗,11,腺病毒載體,人Ad2和Ad5：外源基因容量為20kb左右。E3：病毒復(fù)制的非必須區(qū)，允許插入的外源基因的最大長(zhǎng)度為4.0Kb。外源基因一般不需要加基因表達(dá)調(diào)控元件，利用腺病毒本身的調(diào)節(jié)元件，即外源基因可插在E3啟動(dòng)子后,在感染早期有效表達(dá)。HIV-1、狂犬病毒E1：為病毒復(fù)制必須區(qū)。缺失E1區(qū)的人腺病毒必須在特殊的工程細(xì)胞中（比如293細(xì)胞系（人胚腎細(xì)胞）或非缺失的腺病毒輔助下才能復(fù)制增殖，因此稱為病毒缺陷型載體。,重組活疫苗,12,腺病毒的優(yōu)點(diǎn),腺病毒比較安全。腺病毒的靶細(xì)胞范圍廣:復(fù)制分裂細(xì)胞、非復(fù)制分裂細(xì)胞。腺病毒容易制備，對(duì)熱不敏感，高滴度增殖。腺病毒可以在腸道及呼吸道繁殖，能誘導(dǎo)粘膜免疫，能制成藥囊經(jīng)口服途徑接種以預(yù)防消化道及呼吸道感染。Ad2、Ad5等啟動(dòng)子較強(qiáng)，能高水平表達(dá)外源基因，特別是換以更強(qiáng)的啟動(dòng)子如CMV早期啟動(dòng)子后，更可明顯提高外源基因的表達(dá)水平。,重組活疫苗,13,皰疹病毒載體,基因組較大，約150kb，含70個(gè)編碼基因，其中至少20%的基因是非必需基因，可容納多個(gè)外源基因的插入。大多數(shù)皰疹病毒的宿主范圍很窄，其重組病毒的使用不會(huì)產(chǎn)生流行病學(xué)方面的不良后果(偽狂犬病毒除外)。許多皰疹病毒經(jīng)粘膜途徑感染，構(gòu)建的載體活疫苗可經(jīng)粘膜途徑提呈抗原，誘導(dǎo)特異性粘膜免疫。皰疹病毒作為活載體表達(dá)外源基因作為疫苗的研究：?jiǎn)渭儼捳畈《?、偽狂犬病毒、火雞皰疹病毒、牛皰疹病毒I型、馬皰疹病毒I型、傳染性喉氣管炎病毒,重組活疫苗,14,沙門氏菌活疫苗載體,能運(yùn)送抗原至腸道淋巴組織，并引起分泌免疫反應(yīng)，其中分泌性IgA浸潤(rùn)所有粘膜表面及外分泌腺體的分泌物中。傷寒沙門氏菌在人體、鼠傷寒沙門氏菌在小鼠能在寄主腸道中定居，并在腸道淋巴組織、肝和脾中增殖。沙門氏菌人工突變后，它們?nèi)阅茉谀c道淋巴組織中定居。,重組活疫苗,15,卡介苗,BCG不僅是一種活疫苗,而且還是外源基因的表達(dá)載體和較強(qiáng)的免疫佐劑,也是最耐熱的疫苗之一，隨著研究的深入,很多外源蛋白在BCG中獲得表達(dá),有的獲得了較好的免疫效果，是理想的重組菌苗。,重組活疫苗,16,將外源基因?qū)隑CG的途徑1.分枝桿菌噬菌體衍生的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)2.分枝桿菌質(zhì)粒衍生的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)3.同源重組基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),重組活疫苗,17,多價(jià)BCG疫苗可預(yù)防艾滋病、肝炎、白喉、破傷風(fēng)、麻疹和瘧疾等疾病構(gòu)建多價(jià)疫苗時(shí)，可將A菌的表面抗原與B菌的表面抗原連接，也可用A菌的表面抗原與B菌的內(nèi)部抗原連接，也可將A菌的B細(xì)胞表位與B菌的T細(xì)胞表位連接，以產(chǎn)生更大的免疫反應(yīng)。,重組活疫苗,18,重組活疫苗,19,細(xì)菌疫苗載體與病毒疫苗載體相比的優(yōu)點(diǎn),生產(chǎn)相當(dāng)?shù)土?xì)菌載體大多對(duì)抗生素敏感可以通過口服和鼻飼接種，方法簡(jiǎn)便易行可以攜帶較大的基因片段，易于構(gòu)建多價(jià)疫苗具有免疫佐劑的作用，不僅可以刺激全身免疫而且還可以刺激機(jī)體的粘膜免疫誘導(dǎo)作用點(diǎn)比較明確，比較安全可靠,重組活疫苗,20,重組疫苗的研究進(jìn)展,疫苗是最經(jīng)濟(jì)有效的預(yù)防疾病的醫(yī)學(xué)卡介苗（）是分枝桿菌中牛結(jié)核桿菌的一種突變株，它具有的特點(diǎn)可使之發(fā)展成為一種特別有吸引力的重組載體疫苗,重組活疫苗,21,分枝桿菌載體疫苗與其它疫苗相比具有以下特征。產(chǎn)品不需純化，可直接用于免疫保護(hù)試驗(yàn)，免去了蛋白質(zhì)后處理的復(fù)雜工序；單次接種即可持續(xù)誘導(dǎo)對(duì)“靶抗原”的免疫反應(yīng)；運(yùn)用分子生物學(xué)手段，通過對(duì)不同“靶抗原”的剪切、拼接，可使新型疫苗理想化；分枝桿菌本身是一種強(qiáng)免疫性劑；在人類近個(gè)免疫接種者中，證明用于人是安全的。它是推薦的兩種出生時(shí)接種的活疫苗之一；在世界范圍內(nèi)分布著接種點(diǎn)；價(jià)格低廉、便于保存、適于大量生產(chǎn)。近年