多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段(優(yōu)質(zhì)課)ppt課件

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，因此也被稱為體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。主題2通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)1，1擴(kuò)增DNA片段。脫氧核糖核酸分子的組成和結(jié)構(gòu)。DNA分子的基本單位是。常見(jiàn)物種。每個(gè)基本單位由一個(gè)分子、一個(gè)分子和一個(gè)分子組成。脫氧核糖核酸，4，磷酸，堿基，脫氧核糖？DNA分子的平面結(jié)構(gòu)怎么樣？基礎(chǔ)知識(shí)，2，A，G，C，T，1，脫氧核苷酸，DNA的基本單位，3，脫氧核苷酸鏈的結(jié)構(gòu)圖，4，一個(gè)分子的水在一個(gè)核苷酸的磷酸基團(tuán)上的“-oh”和另一個(gè)核苷酸分子的第三個(gè)碳原子上的羥基之間損失，形成磷酸二酯鍵，即在兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸的3和5碳原子之間形成磷酸二酯鍵。大量的四個(gè)脫氧核苷酸通過(guò)3，5，磷酸二酯鍵相互連接，形成脫氧核苷酸鏈。通常，脫氧核糖核酸的羥基末端稱為3末端，而磷酸基團(tuán)的末端稱為5末端。4.多脫氧核苷酸鏈的形成。5，2。DNA分子的平面結(jié)構(gòu)，5端和3端。識(shí)別：DNA分子的3末端和5末端羥基末端是3；磷酸基團(tuán)的末端是5。6，2，脫氧核糖核酸分子復(fù)制過(guò)程，7，解旋酶，脫氧核糖核酸母鏈，4種脫氧核苷酸，脫氧核糖核酸聚合酶，引物(核糖核酸)，打開(kāi)脫氧核糖核酸雙鏈，模板，合成子鏈原料，催化子鏈的合成，使脫氧核糖核酸聚合酶從引物的3末端連接脫氧核糖核酸，思考：體內(nèi)脫氧核糖核酸復(fù)制的條件是什么？體外DNA擴(kuò)增如何提供類似的環(huán)境？變性(80-100)，Taq聚合酶(耐高溫)，20-30個(gè)核苷酸組成脫氧核糖核酸或核糖核酸，8個(gè)核苷酸組成脫氧核糖核酸雙鏈，單鏈，變性(加熱80-100)，復(fù)性(緩慢冷卻)，4個(gè)核苷酸組成脫氧核糖核酸分子的熱變性原理，變性目的，復(fù)性目的，解鏈雙鏈，這有利于引物一和引物二與兩條單鏈的結(jié)合，9，首先，聚合酶鏈反應(yīng)的原理(聚合酶鏈反應(yīng)的技術(shù)原理)，時(shí)間(分鐘)，溫度，()，合適的溫度重復(fù)1-3個(gè)步驟30輪，3、DNA復(fù)制的方向，DNA合成的方向總是從亞鏈的5端延伸到3端，2、步驟：變性復(fù)性延伸，10、總結(jié)了聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的原理，利用DNA分子熱變性的原理，通過(guò)控制溫度來(lái)控制雙鏈的解鏈和結(jié)合，從而完成了丹分子的體外擴(kuò)增。 體外復(fù)制DNA的條件：四個(gè)脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、引物和模板；緩沖溶液，嚴(yán)格控制溫度的溫控設(shè)備。復(fù)制方向：子鏈的5端延伸到3端。在25-30個(gè)循環(huán)(復(fù)制)后，模板DNA的含量可增加100萬(wàn)(220)倍以上。13、每個(gè)循環(huán)包括：變性、復(fù)性、延伸，從第二個(gè)循環(huán)開(kāi)始，前一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物也可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物延伸形成的DNA單鏈將與引物結(jié)合進(jìn)行DNA延伸，從而使DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這種固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)過(guò)程概述，14，3，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的實(shí)驗(yàn)操作，1，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀器、設(shè)備和工具，2，微量離心管，總體積為0.5毫升的薄壁塑料管，3，微量移液管，用于定量轉(zhuǎn)移聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)配方中的液體，一次性移液管吸頭一次更換一次，本質(zhì)上是一種能自動(dòng)調(diào)節(jié)和控制溫度的儀器，15，3，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的實(shí)驗(yàn)操作， (1)將所需試劑按配方(制劑)放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，(2)用微型離心器裝置(3)將離心管開(kāi)口蓋緊，按配方順序?qū)⒏鹘M分(移液)加入微型離心管中，用手指輕敲管壁(混合)，(4)將微型離心管放在離心機(jī)上(離心)，(5)將離心管放在聚合酶鏈反應(yīng)儀上，建立聚合酶鏈反應(yīng)儀(16，4)結(jié)果分析和評(píng)價(jià)的循環(huán)程序(反應(yīng))。 DNA含量的測(cè)定：稀釋對(duì)照調(diào)零測(cè)定計(jì)算(見(jiàn)公式P63)，在260納米波長(zhǎng)下讀數(shù)，蒸餾水為對(duì)照，50倍，17，(1)DNA擴(kuò)增數(shù)的理論計(jì)算，4。項(xiàng)目成果評(píng)價(jià)，1。一個(gè)DNA，n個(gè)復(fù)制，DNA 2n，2，一個(gè)DNA，n個(gè)復(fù)制，DNA ax2n，(2)實(shí)驗(yàn)中DNA含量的測(cè)定，1。原則上，擴(kuò)增效果可以通過(guò)測(cè)量DNA含量來(lái)評(píng)估。DNA在260納米的紫外波段有一個(gè)強(qiáng)吸收峰。峰值的大小與DNA含量有關(guān)。18，2。過(guò)程：稀釋，2L聚合酶鏈反應(yīng)溶液，加入98L蒸餾水，即樣品稀釋50倍；控制零點(diǎn)，以蒸餾水為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)260納米時(shí)，將紫外分光光度計(jì)的讀數(shù)調(diào)至零點(diǎn)。將100升的脫氧核糖核酸稀釋劑加入試管，測(cè)量260納米處的吸光值。測(cè)量和計(jì)算：DNA含量(克/毫升)=50(260納米讀數(shù))稀釋倍數(shù)，19，50:1厘米厚試管中的光吸收值為1，DNA含量為50克/毫升，20，體內(nèi)DNA復(fù)制和聚合酶鏈反應(yīng)的技術(shù)差異：21，課堂總結(jié)，22，練習(xí)和鞏固。1.關(guān)于聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的應(yīng)用，其中一個(gè)錯(cuò)誤是古生物學(xué)，犯罪調(diào)查和檢測(cè)，基因測(cè)序，基因疾病診斷，基因克隆，古生物學(xué)，基因克隆，犯罪調(diào)查和檢測(cè)，基因疾病診斷，合成核苷酸，基因測(cè)序。23，2。DNA合成的方向總是從子鏈的哪一端延伸到哪一端？聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是原理a簡(jiǎn)單，原料b容易找到，聚合酶具有耐熱性，d快速、高效、靈活、易操作，從亞鏈的