人教版教學(xué)課件土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù).ppt

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,課題2:土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),【課題目標(biāo)】,研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用，進(jìn)行微生物數(shù)量的測定。,【研究對象】,土壤中能分解尿素的細(xì)菌,【達(dá)到目的】,（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌 （2）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細(xì)菌,【研究思路】,（一）篩選菌株,原理：,人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、PH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。,回答： 1、在該配方中，為微生物生長提供碳源和氮源的是什么物質(zhì)？ 2、絕大多數(shù)的微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，請分析該培養(yǎng)基是否對微生物有選擇作用？如果有，

2、是如何進(jìn)行選擇的？,葡萄糖、尿素,有選擇作用，,選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。,【統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目】,常用方法：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法， 還可以用過濾膜法,1、稀釋涂布平板法（也叫活菌計(jì)數(shù)法）,原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表 面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋 液中的一個活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的 菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有 多少活菌。,為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。,計(jì)算公式： 每克樣品中的菌落數(shù)=（某一稀釋度下平板上生長的

3、平均菌落數(shù)涂布平板所用稀釋液體積）稀釋倍數(shù),設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù),操作,2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,（1）原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 （2）方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計(jì)數(shù)室，一個計(jì)數(shù)室又被分成25個

4、（或16個）中格，每個中格再被分成16個（或25個）小格，每個計(jì)數(shù)室都由400個小格組成。 （3）操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含的細(xì)菌數(shù)，再按計(jì)數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。 （4）計(jì)算公式 每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù) （5）缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。,3過濾膜法,以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。,思考題,1.想一想，如何

5、從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？,答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。,A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。,（三）設(shè)置對照,究竟是哪個原因，可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。,另一種方案： 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。,實(shí)驗(yàn)方案有兩種,一種方案： 可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。,四、實(shí)驗(yàn)案例,實(shí)