生物安全培訓(xùn)資料

1、臨床實(shí)驗(yàn)室生物污染與生物安全,概述,生物安全防護(hù)（biosafety containment） （定義）：指在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下處理和 保存感染性物質(zhì)的過(guò)程中采用 的一系列的防護(hù)措施，包括一 級(jí)防（primary containment） 和二級(jí)防護(hù)（secondary- containment）。,概述,生物安全防護(hù)（biosafety containment） （目的）：是減低或消除潛在危險(xiǎn)因子 對(duì)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外環(huán)境的 污染。 （要素）：1、實(shí)驗(yàn)室操作和技術(shù) 2、實(shí)驗(yàn)室安全設(shè)備 3、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)計(jì) 其中一級(jí)防護(hù)與二級(jí)防護(hù)有別,一級(jí)防護(hù)與二級(jí)防護(hù)的區(qū)別,一級(jí)防護(hù)： 包括規(guī)范操作技術(shù)與規(guī)程，配

2、置適當(dāng) 的安全設(shè)備，保護(hù)操作人員和室內(nèi)直 接環(huán)境免遭感染性物質(zhì)的污染。 二級(jí)防護(hù)： 包括合理的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)計(jì)和嚴(yán)格規(guī) 范的操作流程，用以保護(hù)實(shí)驗(yàn)室外環(huán) 境免受感染性物質(zhì)污染。,一、臨床實(shí)驗(yàn)室生物污染的原因及種類(lèi),原因：致病因子，包括細(xì)菌、病毒、真菌 寄生蟲(chóng)及其他。 種類(lèi)：空氣污染、水的污染、人體污染、 物體表面的污染。,空氣污染,內(nèi)： 平面布局、氣流方向 合理 死角區(qū)域 縮小 外： 直接外排或擴(kuò)散 高效過(guò)濾 密閉或壓力差,水、人體、物體表面污染,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的大量污水 特殊處理后排放 工作人員實(shí)驗(yàn)室感染（接觸、吸入） 專(zhuān)門(mén)防護(hù)規(guī)程 物體表面污染（濺出、溢出、穿用錯(cuò)誤等） 正確實(shí)施,二、臨床實(shí)

3、驗(yàn)室的生物安全防護(hù),概述： 1、目的:(p234 兩個(gè)確保) 2、內(nèi)容:(根據(jù)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別) 3、評(píng)估:(實(shí)驗(yàn)對(duì)象對(duì)人或環(huán)境的危害性),（一）實(shí)驗(yàn)室的分類(lèi)、分級(jí)及適用范圍,分類(lèi)：一般生物 脊椎動(dòng)物 一級(jí)（BSL-1） 分級(jí)：二級(jí)（BSL-2） 三級(jí)（BSL-3） 四級(jí)（BSL-4） 適用范圍：級(jí)別不同 要求不同 適用范圍不同 (biological safety labolatory, BSL),分級(jí)原則: 據(jù)所處理的微生物及其 毒素的危害程度,（BSL-1) 無(wú)致病作用的微生物。 （BSL-2）具有中等潛在危害的微生物。 （BSL-3) 呼吸傳播，使人傳染嚴(yán)重甚至是致病 微生物及其毒素，傳播途

4、徑明，目前 已有疫苗。 (BSL-4) 高度危險(xiǎn)性，通過(guò)氣溶膠傳播或傳播途 徑不明，目前尚無(wú)疫苗或治療方法的致 病微生物及其毒素。,不同級(jí)實(shí)驗(yàn)室的適用范圍和設(shè)置,一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,1、適用于： 用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室 2、要求： 無(wú)須使用生物安全柜,二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）,1、適用于： (1) 含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測(cè) (2) 溶液、固定或用其他方法處理滅活的病毒和/或無(wú)傳染性病毒基因片段 (3）常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢測(cè) (4）能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理 (5）臨床樣品的包裝、分裝 (6）離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉與開(kāi)啟,二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）,2、特殊情

5、況: （1）致病微生物氣溶膠或?yàn)R出的操作 （2）處理高濃度或大容量感染性材料 3、要求： 在生物安全柜或物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使 用個(gè)體防護(hù)設(shè)備。,三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室 （BSL- 3）或相當(dāng)于P3實(shí)驗(yàn)室,1、適用于： 主要通過(guò)呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至 是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽 流感），通常已（可）有預(yù)防傳染的疫 苗。艾滋病病毒的研究（血清學(xué)實(shí)驗(yàn)除 外） 2、要求： 在三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。,BSL-2（P2） BSL-3（P3）,BSL 4,戲稱(chēng)為 魔鬼 實(shí)驗(yàn)室 分 五個(gè)區(qū) 有 10道門(mén),潔凈臺(tái)/生物安全柜(BSCs),潔凈工作臺(tái),1、環(huán)境空氣工作臺(tái)過(guò)濾樣本直接 吹

6、向操作者排入室內(nèi) 2、保護(hù)產(chǎn)品，不保護(hù)操作人員及操作環(huán)境 3、通過(guò)樣本的空氣過(guò)濾對(duì)直徑大于0.3微 米的顆粒，過(guò)濾效率99.9%無(wú)醫(yī)院藥房 或無(wú)菌設(shè)備的組裝。,生物安全柜,1、環(huán)境空氣進(jìn)入工作臺(tái)過(guò)濾樣本 高效過(guò)濾排入室內(nèi)或室外 2、經(jīng)過(guò)樣本的空氣及排放出的空氣均經(jīng)過(guò) 濾，對(duì)直徑大于0.3微米的顆粒，超高 效過(guò)濾器的過(guò)濾效率為99.999%。 3、采用負(fù)壓裝置，形成氣幕防護(hù)屏障，保 護(hù)操作人員安全應(yīng)用于有一定生物危險(xiǎn) 的操作。,潔凈工作臺(tái)生物安全柜,1、環(huán)境空氣（流動(dòng)/排出方式） 2、使用目的（產(chǎn)品、操作人、環(huán)境） 3、空氣濾過(guò)能力 4、氣幕屏障 5、應(yīng)用,生物安全柜工作原理,1. 物理屏障 2

7、. 高效過(guò)濾 3. 空氣屏障 4. 定向?qū)恿?生物安全柜 的分型,CLASS級(jí)生物安全柜 CLASS級(jí)生物安全柜： 1、 CLASSTAPY A型 2、 CLASSTAPY B1型 3、 CLASSTAPY B2型 4、 CLASSTAPY B3型 CLASS級(jí)生物安全柜,I級(jí)生物安全柜,保護(hù)操作者和操作環(huán)境。 樣品沒(méi)有得到保護(hù)。 通過(guò)樣品區(qū)的空氣，經(jīng)高效過(guò)濾器的過(guò)濾之后，100%地排放到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中。,II 級(jí)生物安全柜 A型(B3),30% 外排進(jìn)入環(huán)境 30% 外界空氣補(bǔ)充 70% 經(jīng)過(guò)濾后循環(huán)使用,II 級(jí)生物安全柜 B1型,70% 外排進(jìn)入環(huán)境 70% 外界空氣補(bǔ)充 30% 過(guò)濾后循

8、環(huán)使用,II 級(jí)生物安全柜 B2型,100%外排進(jìn)入環(huán)境 100%外界空氣補(bǔ)充 無(wú)循環(huán)使用的氣流,III級(jí)生物安全柜,樣品、操作者、操作環(huán)境都得到保護(hù)（操作時(shí)戴全密封手套） 100%外排進(jìn)入環(huán)境 100%外界空氣補(bǔ)充 無(wú)循環(huán)使用的氣流,(二)實(shí)驗(yàn)室生物安全的個(gè)人防護(hù),一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,無(wú)須使用生物安全柜和專(zhuān)用特殊設(shè)備等。 應(yīng)穿工作服，手上有皮膚破損戴手套。 操作中可能有危險(xiǎn)物濺出應(yīng)有適當(dāng)防護(hù)。,二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,（1）可能產(chǎn)生病菌氣溶膠、濺出的用生物安全柜 （2）當(dāng)操作不能在安全柜內(nèi)進(jìn)行，必須外部操作 時(shí)，必須使用面部保護(hù)（護(hù)目鏡、面罩、個(gè)體呼 吸保護(hù)用品或其他防濺出保護(hù)設(shè)備）。

9、（3）應(yīng)穿工作服或罩衫，離開(kāi)時(shí)，不得穿著外 出，應(yīng)先在實(shí)驗(yàn)室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟 棄。 （4）當(dāng)手可能接觸感染材料，應(yīng)戴手套。如可能 發(fā)生溢出或?yàn)R出，應(yīng)戴兩副手套，一次性手套不 得清洗和再次使用。,三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,（1）必須安裝級(jí)或以上生物安全柜，感 染性材料的操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。 （2）當(dāng)操作不得不在柜外進(jìn)行時(shí)，必須個(gè) 體防護(hù)與使用物理抑制設(shè)備綜合防護(hù)措施 （3）在進(jìn)行感染性組織培養(yǎng)、有可能產(chǎn)生 感染性氣溶膠的操作時(shí)，必須使用個(gè)體防 護(hù)設(shè)備（如呼吸保護(hù)裝置等）。 （4）入室工作前/后有專(zhuān)用更衣室，室內(nèi)有必備品（消毒劑、沖洗液、藥品等）。,四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,1、在級(jí)生物

10、安全柜中進(jìn)行操作。 2、入室必須換上全套實(shí)驗(yàn)室服裝。 3、實(shí)驗(yàn)室必備的配套裝置與裝備。,臨床實(shí)驗(yàn)室的消毒與滅菌,消毒滅菌方法： 熱力滅菌 物理 輻射消毒 超聲消毒 濾過(guò)除菌 干燥或低溫抑菌 化學(xué) 消毒 防腐,手衛(wèi)生,目的： 控制醫(yī)院性感染的最重要 最簡(jiǎn)便易行 的措施 之一。 （包括保護(hù)個(gè)人自己）,手衛(wèi)生,依據(jù)： 常居菌的存在（大部分人體皮膚上能 分離到的，如凝固酶陰性葡萄球菌、棒狀 桿菌類(lèi)、不動(dòng)桿菌屬、丙酸菌屬及某些腸 道細(xì)菌族成員等），固有，不易被機(jī)械性 的摩擦清除。,手衛(wèi)生,暫居菌的存在（接觸病人或被污染的物體 表面時(shí)獲得）。如果沒(méi)有通過(guò)肥皂和水的 沖洗和機(jī)械摩擦或者用消毒手刷將其破壞 ，

11、它可隨時(shí)通過(guò)手傳播。,手衛(wèi)生,種類(lèi)： 洗手（handwashing） 手消毒（hand antisepsis） 外科手消毒 （surgical hand antisepsis ）,手衛(wèi)生,設(shè)施： 1、流動(dòng)水、非手觸式龍頭開(kāi)關(guān) 2、洗手清潔劑普通皂/液 （plain soap and detergent ） 抗菌皂 （antimicrobial soap） 手消毒劑 （hand disinfector） 3、干手設(shè)施（紙巾、干手器、專(zhuān)用毛巾）,手衛(wèi)生,洗手指征： 直接接觸病人前后 無(wú)菌操作前后 穿脫工作服等前后 再進(jìn)入清潔區(qū)前 接觸特殊易感病人前后 接觸或處理病人的血液、體液、分泌物后 等等,1

12、. 消毒 去除或殺滅傳播媒介上病原微生物，使其達(dá)到無(wú)害化的處理 2. 滅菌 殺滅或去除傳播媒介上一切微生物的處理 3消毒劑 用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達(dá)消毒或滅菌要求的制劑 4.滅菌劑 可殺滅一切微生物使其達(dá)到滅菌要求的制劑 - 消毒和滅菌為兩個(gè)不同概念 - 消毒處理不一定都能達(dá)到滅菌要求 而滅菌一定都能達(dá)到消毒目的,基本概念 消毒和滅菌,5抗菌 采用化學(xué)或物理方法殺滅細(xì)菌或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程 6.抗菌劑 能夠殺滅或去除微生物或抑制其生長(zhǎng)和繁殖的制劑 7.抑菌 采用化學(xué)或物理方法抑制或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程 8.防腐 用化學(xué)或物理方法殺滅或清除或抑制無(wú)生命有機(jī)物內(nèi)的微生

13、物，防止其腐敗的處理 9防腐劑 能夠抑制微生物生長(zhǎng)和繁殖但不足以殺滅的化學(xué)物質(zhì),基本概念,基本概念,熏蒸消毒 在密閉空間內(nèi)進(jìn)行熏蒸以達(dá)到消毒目的的一種方法（污染的空氣、表面） 清潔與預(yù)清潔去垢/污劑 指去除污垢、灰塵、有機(jī)物和污漬 清潔的過(guò)程主要依靠機(jī)械作用 清除污染 指去除/殺死微生物的任何過(guò)程，清除污染的應(yīng)用范圍更廣,消毒與滅菌的方法,化學(xué)消毒滅菌 通過(guò)化學(xué)消毒劑殺滅微生物繁殖體或芽孢 消毒對(duì)象：包括物體表面、空氣和污染物等 方式：有擦拭、噴灑（霧）、熏蒸和浸泡等。 物理消毒滅菌 紫外線(xiàn) 熱力消毒（干熱/焚燒、濕熱、微波) 等離子體 HEPA過(guò)濾除菌,常用的消毒方法,物理消毒方法 （1）機(jī)

14、械除菌 用機(jī)械的方法從物體表面、空氣中除去有害病原微生物，以降低其數(shù)量，減少感染機(jī)會(huì)。如流動(dòng)水洗手、開(kāi)窗通風(fēng)、過(guò)濾除菌、物體表面沖刷、擦拭等。 （2）熱力滅菌 又分為干熱滅菌和濕熱滅菌兩種。,包括干烤消毒和焚燒消毒，前者適用于高溫下不損壞、不變質(zhì)物品的消毒，如玻璃和金屬制品；后者適用于無(wú)保留價(jià)值的醫(yī)用垃圾和廢棄物。 濕熱滅菌：常用的有煮沸和壓力蒸汽滅菌，適用于耐熱耐濕物品和液體的消毒。 （3）紫外線(xiàn)消毒：適用于空氣、污染物體表面消毒。,化學(xué)消毒方法,利用化學(xué)藥物殺滅病原微生物的方法，稱(chēng)為化學(xué)消毒方法。用于消毒的化學(xué)藥物被稱(chēng)為化學(xué)消毒劑。常用的化學(xué)消毒劑有：戊二醛、過(guò)氧乙酸、含氯消毒劑、過(guò)氧化氫

15、、碘和碘制劑、75乙醇等。,使用方法： 刷、吸、干擦、洗滌 或用浸泡肥皂水或清潔劑的濕墩布擦洗 嚴(yán)重污染的物品會(huì)影響除污染劑的殺菌作用，不能被迅速地消毒或滅菌；許多殺菌劑只對(duì)經(jīng)過(guò)預(yù)清潔的物品才具有殺菌活性。 注意！ 預(yù)清潔時(shí)必須謹(jǐn)慎，以避免暴露于感染性物質(zhì); 必須使用與以后使用的殺菌劑化學(xué)上相容的物質(zhì); 通常采用相同的清洗消毒劑進(jìn)行預(yù)清潔和消毒; 清洗消毒劑通常由化學(xué)消毒劑和洗滌劑或除垢劑以及助洗劑、穩(wěn)定劑、緩蝕劑等成分組成； 是否進(jìn)行預(yù)清潔應(yīng)根據(jù)工作性質(zhì)和需要來(lái)決定,化學(xué)方法一. 清潔的作用,化學(xué)消毒劑種類(lèi)（按標(biāo)簽說(shuō)明使用）,（1）高效（水平）消毒劑： 指可殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括分枝桿菌）

16、、病毒、真菌及其孢子等，對(duì)細(xì)菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定殺滅作用，達(dá)到高水平消毒要求的制劑。主要有環(huán)氧乙烷、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫、戊二醛、二氧化氯、次氯酸鈉等；其中環(huán)氧乙烷、戊二醛可作為滅菌劑 （2）中效消毒劑： 指僅可殺滅分枝桿菌、病毒、真菌及細(xì)菌繁殖體等微生物，達(dá)到消毒要求的制劑。主要有酚類(lèi)消毒劑、乙醇、碘伏等 （3）低效消毒劑： 指僅可殺滅細(xì)菌繁殖體及親脂病毒，達(dá)到消毒要求的制劑。主要有季銨鹽（苯扎溴銨、杜米芬等）、氯己啶等,化學(xué)消毒劑,理想的消毒劑 快速的殺菌效果 快速的溶解作用 有一定去污洗滌作用 有警示顏色 刺激性味道小,不易燃易爆 較好的穩(wěn)定性 對(duì)物體的損壞作用小 對(duì)人體無(wú)毒、副

17、作用 合理的價(jià)格 方便運(yùn)輸,常用化學(xué)消毒劑的性能比較,常用化學(xué)消毒劑的安全性及特征,防止過(guò)度使用消毒劑!,正確使用化學(xué)消毒劑以確保實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所的安全， 減少來(lái)自感染性物質(zhì)的危險(xiǎn) -選擇合適的化學(xué)消毒劑 應(yīng)考慮經(jīng)濟(jì)、控制庫(kù)存以及限制環(huán)境污染等因素，盡可能減少化學(xué)消毒劑的使用量 化學(xué)消毒劑的作用時(shí)間因品種和廠(chǎng)商而異 應(yīng)按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制和使用 消毒劑的濃度（濃度越高, 消毒效果越好？ ） 消毒劑的作用時(shí)間 注意消毒劑有效期！-消毒劑的有效期 消毒劑使用的有效期限,（一）表面消毒,含氯消毒劑 特性 :含氯消毒劑是指溶于水后能產(chǎn)生次氯酸的消毒劑。其品種較多，可分為有機(jī)化合物類(lèi)和無(wú)機(jī)化合物類(lèi)，最常用的有次氯酸

18、鈉、 次氯酸鈣、漂白粉、 二氯異氰尿酸鈉、三氯異氰尿酸、氯胺等。,（1）次氯酸鈉（分子式為NaOCl）,作為消毒劑/漂白劑使用時(shí)為強(qiáng)堿性，具金屬腐蝕性 1）更換頻率取決于 有機(jī)物（蛋白質(zhì)） 開(kāi)口容器(無(wú)蓋) 工作液的初始濃度(儲(chǔ)藏高濃度或使用濃度) 使用頻率和特性 室內(nèi)條件(高溫時(shí)能釋放氯氣) 2）有效氯濃度 常規(guī)實(shí)驗(yàn)室用于消毒的有效氯濃度應(yīng)為1 g/L。 感染性物質(zhì)的溢出以及含有大量有機(jī)物的物質(zhì)，推薦使用更強(qiáng)作用的含5 g/L有效氯的溶液來(lái)處理。 一般情況： 一天多次浸泡、含高濃度有機(jī)物的材料，應(yīng)每天至少更換一次； 使用頻率較低的溶液，則可以維持一周時(shí)間。,（2）次氯酸鈣,次氯酸鈣Ca（Cl

19、O）2的顆?；蚱瑒┮话愫?0%的有效氯； 其有效氯濃度分別為1g/L和5 g/L； 用顆?；蚱瑒┡渲茲舛?.4 g/L或7.0 g/L溶液 不要把漂白劑當(dāng)作防腐劑使用 可以用作普通目的的消毒劑 用于浸泡非金屬類(lèi)的污染材料 在緊急情況下可用終濃度含12 mg/L有效氯的漂白劑消毒飲用水,注意事項(xiàng),1）氯氣具有強(qiáng)毒性！ 因此只能在通風(fēng)良好的地方儲(chǔ)存和使用。 2）漂白劑也不能與酸混合以避免氯氣快速釋放。 3）氯的許多副產(chǎn)物可能對(duì)人體及環(huán)境有害， 避免濫用含氯消毒劑，特別是漂白劑。,（3）二氯異氰尿酸鈉,二氯異氰尿酸鈉（NaDCC）的粉劑含有60%的有效氯。 用NaDCC粉劑配制的濃度為1.7 g/

20、L和8.5 g/L的溶液將分別含有1 g/L和5 g/L的有效氯 NaDCC粉劑和片劑儲(chǔ)存方便、安全 血液或其他生物危害性液體溢出時(shí)，可以使用固體NaDCC，并使其作用至少10min后再除去，然后對(duì)污染區(qū)進(jìn)行進(jìn)一步的清理。,（4）氯胺,氯胺粉劑含有大約25的有效氯 -氯胺釋放氯的速度比次氯酸慢 因此如果需要獲得與次氯酸相同的效力，就需要較高的初始濃度。 -有機(jī)物對(duì)氯胺溶液的影響沒(méi)有次氯酸溶液那么大 在“清潔”和“污染”情況下都推薦使用20 g/L的濃度。 -在氯胺中浸泡過(guò)的物品必須要徹底清洗，以除去加入到氯胺-T（甲苯磺酰氯醛甲酰胺鈉）粉劑中的填充劑的殘留物。,（5）二氧化氯,二氧化氯是一種高

21、效快速消毒劑。 氣態(tài)的二氧化氯不穩(wěn)定，可分解為氯氣（Cl2）和氧氣（O2），并釋放熱。二氧化氯溶于水，在水溶液中穩(wěn)定。 有兩種方法可獲得二氧化氯： 1）將鹽酸（HCl）和亞氯酸鈉（NaClO2）兩種單獨(dú)成分混合時(shí)即可生成； 2）訂購(gòu)其穩(wěn)定態(tài)，然后在需要時(shí)隨時(shí)活化生成。,常規(guī)含氯消毒劑的推薦使用濃度,a 去除大部分污染材料后 b 溢流情況（如血液）或大量污染材料沒(méi)有除去時(shí),2乙醇,（1）特性 乙醇稱(chēng)酒精，無(wú)色透明液體，屬中效消毒劑，可殺滅分枝桿菌，病毒，但所有濃度對(duì)細(xì)菌芽孢均無(wú)效。具有速效、無(wú)毒、對(duì)皮膚粘膜有刺激性、對(duì)金屬無(wú)腐蝕性，受有機(jī)物影響很大，易揮發(fā)、不穩(wěn)定等特點(diǎn)。 乙醇作為其他消毒劑的助

22、溶劑和增效劑使用，如乙醇與氯己定、碘、苯扎溴銨等復(fù)配，其效果更佳。 （2）適用范圍 適用于皮膚、環(huán)境表面及醫(yī)療器械的消毒等。,（3）使用方法 消毒處理：常用消毒方法有浸泡法和擦拭法。 1）浸泡法。將待消毒的物品放入裝有乙醇溶液的容器中，加蓋。對(duì)細(xì)菌繁殖體污染醫(yī)療器械等物品的消毒，用75% 的乙醇溶液浸泡 10min以上；個(gè)別對(duì)其它消毒劑過(guò)敏者，可用 75% 的乙醇溶液浸泡5min。 2） 擦拭法。對(duì)皮膚的消毒,用75%乙醇棉球擦拭。,（4）注意事項(xiàng) 1）乙醇易燃，忌明火；必須使用醫(yī)用乙醇，嚴(yán)禁使用工業(yè)乙醇消毒和作為原材料配制消毒劑。 2) 對(duì)酒精過(guò)敏者慎用。,3.戊二醛,（1）特性 呈無(wú)色或淡

23、黃色液體，揮發(fā)性低，有醛的氣味。常用消毒滅菌濃度為2%。 國(guó)外還有2.5%和3.4%。具有廣譜、高效殺菌作用。對(duì)金屬腐蝕性小，受有機(jī)物影響小等特點(diǎn)。 （2）適用范圍 適用于不耐熱的醫(yī)療器械和精密儀器等 消毒與滅菌。,（3）使用方法 1)滅菌處理：常用浸泡法。將清洗、晾干待滅菌處理的醫(yī)療器械及物品浸沒(méi)于裝有戊二醛的容器中，加蓋，浸泡 10h 后，無(wú)菌操作取出，用無(wú)菌水沖洗干凈，并無(wú)菌擦干后使用。 2)消毒處理：用浸泡法，將清洗、晾干的待消毒處理醫(yī)療器械及物品浸沒(méi)于裝有戊二醛的容器中，加蓋，一般20min45min，取出后用滅菌水沖洗干凈并擦干。 3）2%的戊二醛一般可連續(xù)使用7-14天，3.4%

24、的戊二醛可連續(xù)使用28天。,（4）注意事項(xiàng) 1)戊二醛對(duì)手術(shù)刀片等碳鋼制品有腐蝕性，使用前應(yīng)先加入 0.5% 亞硝酸鈉防銹。 2)戊二醛對(duì)皮膚粘膜有刺激性，接觸戊二醛溶液時(shí)應(yīng)戴橡膠手套，防止濺入眼內(nèi)或吸入體內(nèi)。 3)盛裝戊二醛消毒液的容器應(yīng)加蓋，放于通風(fēng)良好處。,4.過(guò)氧乙酸,（1）特性：為無(wú)色透明弱酸性液體，易揮發(fā)、有很強(qiáng)的揮發(fā)性氣味，腐蝕性強(qiáng)，有漂白作用。性質(zhì)不穩(wěn)定?？蓺缂?xì)菌繁殖體、真菌、病毒 分枝桿菌和細(xì)菌芽孢。具有廣譜、高效、低毒、對(duì)金屬及織物有腐蝕性，受有機(jī)物影響大，穩(wěn)定性差等特點(diǎn)。其濃度為 16%20%(g/100ml)。,(2) 適用范圍: 適用于耐腐蝕物品滅菌、環(huán)境及空氣等的

25、消毒。 (3) 使用方法 1)消毒液配制：過(guò)氧乙酸一般為二元包裝，A液為冰醋酸液和硫酸的混合液，B液為過(guò)氧化氫，使用前按產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)要求將 A、B 兩液混合后產(chǎn)生過(guò)氧乙酸，在室溫放置24-48小時(shí)后即可使用。,2) 消毒處理：常用的施藥方法有噴霧、浸泡、擦拭、噴灑。 噴霧法：用氣溶膠噴霧器以濃度為0.1%-0.5%的過(guò)氧乙酸，以20ml/m3 的用量對(duì)室內(nèi)空氣和物體表面進(jìn)行噴霧消毒，作用1小時(shí)。 浸泡法：將清洗、晾干的待消毒物品浸沒(méi)于裝有0.2-0.5 % 過(guò)氧乙酸的容器中，加蓋, 浸泡 30 min。 擦拭法：對(duì)大件物品或其它不能用浸泡法消毒的物品用0.2%0.5% 過(guò)氧乙酸擦拭作用30m

26、in。 噴灑法：對(duì)一般污染表面的消毒用0.2%0.4%過(guò)氧乙酸噴灑作用 30 min60min。,(4) 注意事項(xiàng)： 1) 過(guò)氧乙酸不穩(wěn)定，應(yīng)貯存于通風(fēng)陰涼處，用前應(yīng)測(cè)定有效含量，原液濃度低于 12% 時(shí)禁止使用。 2) 稀釋液臨用前配制。 3) 配制溶液時(shí)，忌與堿或有機(jī)物相混合。 4) 過(guò)氧乙酸對(duì)金屬有腐蝕性，對(duì)織物有漂白作用。 金屬制品與織物經(jīng)浸泡消毒后，及時(shí)用清水沖洗干凈。 5) 使用濃溶液時(shí)，謹(jǐn)防濺入眼內(nèi)或皮膚粘膜上，一旦濺上，即時(shí)用清水沖洗。 6) 消毒被血液、膿液等污染的物品時(shí)，需適當(dāng)延長(zhǎng)作用時(shí)間。,5. 季胺鹽類(lèi)化合物,屬于低效消毒劑 通常用于環(huán)境衛(wèi)生消毒，如地面、家具、及墻壁。

27、 可殺滅真菌、細(xì)菌、包膜病毒；不能殺滅芽孢、結(jié)核分枝桿菌及無(wú)包膜病毒。 有機(jī)物 水的硬度影響其消毒效果 陰離子去污劑 使用時(shí)，選擇預(yù)清潔劑的品種,（二）空氣熏蒸,多使用甲醛（HCHO）進(jìn)行空氣熏蒸 在溫度高于20時(shí)，甲醛是一種能夠殺滅所有微生物及其孢子的氣體 甲醛對(duì)朊病毒沒(méi)有殺滅活性 市場(chǎng)上出售的產(chǎn)品： 甲醛多聚體 （固體） 甲醛（福爾馬林）甲醛濃度約為370 g/L（37）的氣體水溶液，其中含甲醇（100 mL/L）作為穩(wěn)定劑,甲醛,兩種產(chǎn)品經(jīng)加熱都可以產(chǎn)生氣體，用于封閉空間（如生物安全柜和房間）的清除污染和消毒 甲醛是一種致畸、致癌物質(zhì)，具有刺鼻的氣味，其氣體能夠刺激眼睛和黏膜； 因此必須

28、在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的地方儲(chǔ)存和使用； 甲醛的使用必須遵守國(guó)家化學(xué)品安全規(guī)定；,1.產(chǎn)生甲醛氣體的方法 （1）加熱法：在150200可使甲醛很快釋放，將甲醛直接均勻鋪放于耐熱容器內(nèi)置于熱源上加熱蒸發(fā)。為保證甲醛用量和滅菌時(shí)間的控制，最好使用甲醛發(fā)生器。 （2）化學(xué)反應(yīng)法：常用的反應(yīng)劑有高錳酸鉀、重鉻酸鉀等氧化劑，最通用是高錳酸鉀與甲醛反應(yīng)，常用反應(yīng)比例為甲醛2份對(duì)1份高錳酸鉀。 2.室內(nèi)空氣消毒 在常溫下，相對(duì)濕度70左右，使用甲醛25ml/m3或多聚甲醛10g/m3。用加熱或化學(xué)法釋放甲醛氣體，密閉門(mén)窗作用12h以上可達(dá)到消毒要求。 3.中和殘余甲醛 以25氨水按25ml/m3加熱蒸發(fā)即可。,

29、物理方法,一. 紫外線(xiàn) 紫外線(xiàn)適用于空氣、物體表面等消毒 消毒使用的紫外線(xiàn)是C波紫外線(xiàn)，波長(zhǎng)范圍是100nm280nm 殺菌作用最強(qiáng)的波段是250nm280nm 紫外線(xiàn)光源必須使用能夠產(chǎn)生達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的輻照值殺菌紫外燈 普通30W 直管紫外燈在距離燈管1m處檢測(cè)的輻射253.7nm紫外線(xiàn)強(qiáng)度不得低于70uW/cm2 室內(nèi)安裝紫外燈的數(shù)量為平均每m3不少于1.5W，照射時(shí)間不少于30min。,二. 高壓蒸汽滅菌和其他加熱滅菌消毒,加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段。 “干”熱沒(méi)有腐蝕性，可用來(lái)處理實(shí)驗(yàn)器材中許多可耐受160或更高溫度24 h的物品 燃燒或焚化也是一種干熱方式 濕熱高壓滅菌則最

30、為有效 煮沸消毒具有方法簡(jiǎn)單、使用方便，并不一定能殺滅所有的微生物或病原體，但在其他方法（化學(xué)殺菌、清除污染、高壓滅菌）不可行或沒(méi)有條件時(shí)，可以作為一種有效的消毒措施。,滅菌后的物品必須小心操作并保存，以保證在使用之前不被污染。 壓力飽和蒸汽滅菌（高壓蒸汽滅菌）是對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌的最有效和最可靠的方法 對(duì)于大多數(shù)目的，下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果： 1. 134 3 min 2. 126 10 min 3. 121 15 min 4. 115 25 min,1. 預(yù)真空式高壓滅菌器,蒸汽進(jìn)入前使空氣從滅菌器排出。 氣體是通過(guò)一個(gè)裝有HEPA過(guò)濾器的排氣閥排出。 在滅菌結(jié)束時(shí)

31、，蒸汽自動(dòng)排出。 這種高壓滅菌可以在134下進(jìn)行，因此滅菌周期可以縮短至3min。 預(yù)真空式高壓滅菌器對(duì)于多孔性物品的滅菌很理想，但由于要抽真空而不能用于液體的高壓滅菌。,2.重力置換式（“下排氣式”）高壓蒸汽滅菌器,蒸汽在壓力作用下進(jìn)入滅菌器，由上而下置換較重（冷）的空氣并通過(guò)滅菌器的排氣閥（裝有HEPA過(guò)濾器）排出。,3.脈動(dòng)真空蒸汽內(nèi)循環(huán)高壓滅菌器,脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器利用真空控制系統(tǒng)、經(jīng)預(yù)抽真空及有限次脈動(dòng)抽取，通過(guò)壓力蒸汽循環(huán)，強(qiáng)制以飽和蒸汽替換殘余空氣，可將柜內(nèi)冷空氣抽除98以上； 避免了因內(nèi)部冷空氣排除不徹底而存在的滅菌效果不穩(wěn)定等問(wèn)題。 滅菌后真空加溫?zé)岷娓?，可快速干燥滅菌?/p>

32、品。,（二）高壓蒸汽滅菌器的裝載,高壓蒸汽滅菌器的： 待滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi)： 上下左右均應(yīng)有空隙； 不能接觸器壁； 物品應(yīng)放在金屬網(wǎng)狀籃筐內(nèi)或金屬網(wǎng)架上； 物品裝載量不應(yīng)超過(guò)滅菌器內(nèi)總體積的80% -利于蒸汽的滲透和空氣排出 -使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物；,壓力蒸汽滅菌包內(nèi)化學(xué)指示卡/條,（三）高壓蒸汽滅菌質(zhì)量保證的生物指標(biāo),1. 干熱滅菌 常用滅菌時(shí)間和溫度是170, 60min；160, 120 min;150, 150 min。應(yīng)用枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372，菌片含菌量為5.0105cfu/片 5.0106cfu/片）監(jiān)測(cè)滅菌效果。監(jiān)測(cè)培養(yǎng)物應(yīng)置35 37培養(yǎng)24

33、48h后觀(guān)察。 2. 高壓蒸汽滅菌 指示菌株為耐熱嗜熱脂肪芽孢桿菌（ATCC7953，菌片含菌量為5.0105cfu/片 5.0106cfu/片）監(jiān)測(cè)滅菌效果。監(jiān)測(cè)培養(yǎng)物應(yīng)置55培養(yǎng)2448h后觀(guān)察（自含式生物指示物按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行）。,（四）高壓滅菌器使用注意事項(xiàng),下列規(guī)定能夠減少操作壓力容器時(shí)可能發(fā)生的危害： 1. 應(yīng)由受過(guò)良好培訓(xùn)人員負(fù)責(zé)高壓滅菌器的操作和維護(hù)。 2.預(yù)防性的維護(hù)程序應(yīng)包括：由有資質(zhì)人員定期檢查滅菌器柜腔、門(mén)的密封性以及所有的儀表和控制器。 3.應(yīng)使用不含腐蝕性抑制劑或其他化學(xué)品飽和蒸汽，否則可能污染滅菌的物品。 4.所有需要高壓蒸汽滅菌的物品都應(yīng)放在空氣能夠排出并具有良好熱

34、滲透性的容器中；滅菌器柜腔裝載要松散，以便蒸汽可以均勻作用于裝載物。 5.當(dāng)滅菌器內(nèi)部加壓時(shí)，互鎖安全裝置可以防止門(mén)被打開(kāi)，而沒(méi)有互鎖裝置的高壓蒸汽滅菌器，應(yīng)當(dāng)關(guān)閉主蒸汽閥并待溫度下降到80以下時(shí)再打開(kāi)門(mén)。！,（四）高壓滅菌器使用注意事項(xiàng),6.當(dāng)對(duì)液體高壓蒸汽滅菌時(shí)，由于取出液體時(shí)可能因過(guò)熱而沸騰，故應(yīng)采用慢排式設(shè)置。 7.即使溫度下降到80以下，操作者打開(kāi)門(mén)時(shí)也應(yīng)當(dāng)戴適當(dāng)?shù)氖痔缀兔嬲謥?lái)進(jìn)行防護(hù)。 8.在進(jìn)行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，生物指示劑或熱電偶計(jì)應(yīng)置于每件高壓滅菌物品的中心。最好在滿(mǎn)載時(shí)用熱偶計(jì)和記錄儀進(jìn)行定時(shí)監(jiān)測(cè)，以確定滅菌程序是否恰當(dāng)。(或用化學(xué)指示條) 9.如果有滅菌器的排水過(guò)濾

35、器應(yīng)當(dāng)每天拆下清洗。 10. 應(yīng)當(dāng)注意保持高壓滅菌器安全閥的通暢。,三. 焚燒,在處理經(jīng)或未經(jīng)清除污染的動(dòng)物尸體以及解剖組織或其他實(shí)驗(yàn)室廢棄物時(shí)，焚燒是一種有效的方法。 只有在實(shí)驗(yàn)室可以控制焚燒爐的條件下，才能用焚燒代替高壓滅菌來(lái)處理感染性物質(zhì)。 需要有效控制溫度，并配備二級(jí)焚燒室時(shí)才能實(shí)現(xiàn)徹底焚燒。 許多焚燒爐，尤其是那些只有單個(gè)焚燒室的，不能滿(mǎn)足處理感染性物質(zhì)、動(dòng)物尸體和塑料制品的要求，微生物、有毒化學(xué)品和煙塵可能通過(guò)煙囪排放而污染大氣 理想的是一級(jí)焚燒室的溫度至少應(yīng)達(dá)到800 二級(jí)焚燒室的溫度至少應(yīng)達(dá)到1000,HEPA過(guò)濾,HEPA濾器更換程序： 1HEPA濾器消毒 1）福爾馬林熏蒸(

36、同生物安全柜消毒步驟) 2）或用過(guò)氧乙酸對(duì)HEPA濾器的濾膜、外周和濾器后方檢測(cè)孔處噴霧消毒,消毒時(shí)間依所用消毒劑種類(lèi)而定。 2HEPA濾器卸載 卸載HEPA濾器時(shí)，根據(jù)所從事的病原微生物的分類(lèi)來(lái)對(duì)操作人員進(jìn)行相應(yīng)的防護(hù)。將HEPA濾器裝入醫(yī)用廢物塑料袋。 3高壓滅菌 壓力及時(shí)間依病原微生物種類(lèi)而定。 4焚燒 高壓滅菌完成后，用醫(yī)用廢物塑料袋包裝后送焚燒。,第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)室消毒滅菌的應(yīng)用,清除局部環(huán)境污染 生物安全柜的清除 廢物的處理,一. 清除局部環(huán)境污染,（一）表面污染的清除 使用次氯酸鈉（NaOCl）溶液 含有1有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備 當(dāng)處理高危環(huán)境時(shí): 建議使用高濃度（5 g

37、/L）溶液。用于清除環(huán)境污染時(shí),（二）一般實(shí)驗(yàn)器材的消毒 凡直接或間接接觸臨床標(biāo)本或?qū)嶒?yàn)微生物的器材均應(yīng)視為有傳染性，均應(yīng)作消毒處理。 1金屬器材、玻璃器皿可用壓力蒸汽和干熱滅菌的方法適用于耐高溫、高濕的醫(yī)用器械和物品的滅菌。 1）壓力蒸汽滅菌器的種類(lèi)：下排氣壓力蒸汽滅菌器，預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器。,2玻璃器材 使用過(guò)的玻璃吸管、試管、離心管、玻片、玻璃棒、三角瓶和平皿等應(yīng)立即浸入0.5%過(guò)氧乙酸噴灑或有效氯為2000mg/L的含氯消毒劑中1小時(shí)以上，消毒后用超聲波清洗的方法洗凈瀝干，使用前再進(jìn)行高壓滅菌處理。,3塑料、橡膠、無(wú)紡布制品 1）一次性帽子、口罩、手套、帽子工

38、作服、防護(hù)服等 使用后應(yīng)放入污物袋內(nèi)集中銷(xiāo)毀。 2）耐熱的塑料器材可用0.5%1.0%肥皂液或洗滌劑溶液煮沸15-30分鐘，然后清水洗地瀝干后，121， 15分鐘高壓滅菌處理。,3）不耐熱的塑料器材可用0.5%過(guò)氧乙酸噴灑或有效氯為2000mg/L的含氯消毒劑中浸泡1小時(shí)以上，然后清水洗滌瀝干后，用環(huán)氧乙烷消毒柜，在溫度為54，相對(duì)濕度為80%，環(huán)氧乙烷氣體濃度為800 mg/L的條件下，作用46 h。 4）一般血清學(xué)反應(yīng)使用過(guò)的塑料板，可直接浸入1%鹽酸溶液中2小時(shí)以上。,5）橡膠制品 橡膠手套等受污染后可用0.5%1.0%肥皂液或洗滌劑溶液煮沸15-30分鐘，然后清水洗地瀝干后，121，1

39、5分鐘高壓滅菌處理。 6）紡織品 棉織工作服、帽子、口罩等一般放入專(zhuān)用的污物袋中，用70以上熱水加洗滌劑洗滌。有明顯污染時(shí)，隨時(shí)噴灑消毒劑消毒或放入專(zhuān)用的污物袋中，121，15分鐘高壓滅菌處理。 7）貴重儀器、不易加熱、不能用消毒劑浸泡的儀器， 局部輕度污染時(shí)，可用75%醫(yī)用酒精擦拭，污染嚴(yán)重或傳染性強(qiáng)的，半小時(shí)后重復(fù)擦拭2-3次。,二. 生物安全柜污染的清除（1）,在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，包括儀器在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品應(yīng)清除表面污染后，才能移出安全柜； 在每次使用前后清除生物安全柜內(nèi)表面的污染，工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭（殺滅任何微生物），但不包括送風(fēng)濾器的擴(kuò)散板； 在每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，應(yīng)擦拭生物安全柜的工作臺(tái)面、四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位來(lái)清除表面的污染。 在對(duì)目標(biāo)生物體有效時(shí)，可以采用含氯溶液或70%酒精來(lái)消毒。在使用腐蝕性的消毒劑后，還必須用無(wú)菌水再次進(jìn)行擦拭。,研究試劑溢漏或潑灑后，立即清除污染物及污染的