微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)七 微生物的紫外誘變

1、實(shí)驗(yàn)七微生物的紫外誘變,一、目的要求,掌握紫外線誘發(fā)微生物突變的基本原理。 掌握選育高產(chǎn)突變型菌株的方法。,二、基本原理,紫外線是一種最常用的物理誘變因素。它的主要作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復(fù)制和堿基的正常配對，從而引起突變。 紫外線照射引起的DNA損傷，可由光復(fù)活酶的作用進(jìn)行修復(fù)，使胸腺嘧啶二聚體解開恢復(fù)原狀。 為了避免光復(fù)活，用紫外線照射處理時(shí)以及處理后的操作應(yīng)在紅光下進(jìn)行，并將照射處理后的微生物放在暗處培養(yǎng)。,三、實(shí)驗(yàn)器材,菌株 枯草芽孢桿菌 培養(yǎng)基 淀粉培養(yǎng)基 溶液或試劑 碘液，無菌生理鹽水，盛4.5ml無菌水試管 儀器或其他用具

2、1ml無菌吸管，玻璃涂布棒，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，紫外燈（15W），磁力攪拌器，臺(tái)式離心機(jī)，振蕩混合器等。,四、操作步驟,制備菌懸液 取枯草芽孢桿菌48h斜面培養(yǎng)物4-5支用10ml無菌生理鹽水洗下菌苔倒入無菌大試管振蕩30s，打散菌塊3000r/min離心10min棄上清液用無菌生理鹽水洗滌菌體2-3次制成菌懸液用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法調(diào)整細(xì)胞濃度108個(gè)/ml。（老師完成） 制作淀粉瓊脂培養(yǎng)基平板,紫外線處理 打開紫外燈預(yù)熱20min。 各取3ml菌懸液，分別加入2套6cm無菌平皿中，并放入一根無菌磁力棒。 將平皿置于磁力攪拌器上，打開皿蓋，在距離30cm，15W的紫外燈下分別攪拌照射1min和

3、3min。蓋上皿蓋，關(guān)閉紫外燈。 稀釋：把照射過的菌懸液用無菌水稀釋成10-1-10-6； 涂平板：取 10-4、10-5、10-6稀釋液和未經(jīng)照射的稀釋液（對照）各0.1ml涂平板，重復(fù)三個(gè)平板； 培養(yǎng)：用黑布或紙包好，37培養(yǎng)48h。,分別計(jì)算紫外線處理1min和3min后的存活率和致死率 存活率（%）= 致死率（%）=,觀察誘變效應(yīng) 選取cfu數(shù)在5-6個(gè)左右的處理后涂布的平板觀察誘變效應(yīng)。 分別向平板內(nèi)加碘液數(shù)滴，在菌落周圍出現(xiàn)透明圈。 分別測量透明圈直徑與菌落直徑并計(jì)算其比值（HC比值）。 選取HC比值大的菌落轉(zhuǎn)接到試管斜面上培養(yǎng)，可用于復(fù)篩。,五、注意事項(xiàng),紫外線照射計(jì)時(shí)從開蓋起，加蓋止； 先開磁力攪拌器，再開蓋照射，使菌懸液中的細(xì)胞接受均等照射； 從紫外線照射處理開始，直到涂布完平板的所有操作步驟都需在紅光下進(jìn)行。,六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,觀察誘變效應(yīng)，計(jì)算存活率、致死率、HC比值。結(jié)果填入1.(1)(2)。,六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,七、思考題,.(2)、(3) 用紫外線進(jìn)行誘變時(shí)，為什么要打開皿蓋？為什么要在紅光下操作，暗環(huán)境下培養(yǎng)？ 分析你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：