細胞工程期末復習

1、細胞工程期末復習（必考）細胞工程：研究真核細胞的核質(zhì)關(guān)系以及細胞器、細胞質(zhì)基因轉(zhuǎn)移的技術(shù)。組織工程：研究開發(fā)用于修復或改善人體病損組織或器官的結(jié)構(gòu)、功能的生物活性替代物的一門科學。染色體工程：是按照一定的設(shè)計，有計劃的消減添加或替換同種或異種染色體從而達到定向改變遺傳特性和選育新品種的一種技術(shù)。細胞連接：使細胞間的聯(lián)系結(jié)構(gòu)。細胞表面的特化結(jié)構(gòu)或特化區(qū)域，是細胞間建立長期組織上聯(lián)系的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。涉及細胞外基質(zhì)蛋白、跨膜蛋白、胞質(zhì)溶膠蛋白、細胞骨架蛋白等。細胞全能性：指分化細胞保留著全部的核基因組，具有生物個體成長、發(fā)育所需要的全部遺傳信息，具有發(fā)育成完整個體的潛能。細胞分化：指細胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功

2、能上發(fā)生差異的過程。包括時間和空間上的分化。脫分化：又稱去分化，指分化細胞失去特有的結(jié)構(gòu)和功能變?yōu)榫哂形捶只毎匦缘倪^程。即分化的細胞在適當條件下轉(zhuǎn)變?yōu)榕咝誀顟B(tài)而重新獲得分裂能力的過程。再分化：是指在離體條件下，無序生長的脫分化細胞在適當條件下重新進入有序生長和分化狀態(tài)的過程。細胞培養(yǎng)：指從體內(nèi)組織分離細胞，模擬體內(nèi)環(huán)境，在無菌適當?shù)臈l件使其生長繁殖的技術(shù)。人工種子：又稱合成種子或體細胞種子，指將植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體或芽包裹在含有養(yǎng)分和保護功能的人工胚乳和人工種皮中形成的類似種子的顆粒。植物胚胎培養(yǎng)：指對植物的胚及胚器官進行人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。試管受精：指在無菌條件

3、下離體培養(yǎng)未受精子房或胚珠和花粉萌發(fā)產(chǎn)生的花粉管進入胚珠從而完成受精過程。細胞核移植：一種利用顯微操作技術(shù)將一種動物的細胞核移入同種或異種動物的去核成熟卵細胞內(nèi)的技術(shù)。體外受精：指使哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù)。胚胎移植:指將受精卵或發(fā)育到一定階段的胚胎移植到與供體同時發(fā)情排卵但為配種的受體母畜輸卵管或子宮的技術(shù)。人工受精：指將采集的精子注入人發(fā)情處理的母體內(nèi)完成受精過程。試管嬰兒：指將卵子與精子取出在體外受精，培養(yǎng)發(fā)育成早期胚胎，再植回母體子宮內(nèi)發(fā)育出生的嬰兒，也就是采用體外受驚聯(lián)合胚胎移植技術(shù)培育的嬰兒。胚胎核移植：一種利用顯微操作技術(shù)將一種動物的細胞核移入

4、同種或異種動物的去核成熟卵細胞內(nèi)的技術(shù)。愈傷組織：脫分化后的細胞經(jīng)過細胞分裂，產(chǎn)生無組織結(jié)構(gòu)、無明顯極性的松散的細胞團。胚狀體：由外植體或愈傷組織產(chǎn)生的與正常受精卵發(fā)育成的胚相類似的胚狀結(jié)構(gòu)。胞質(zhì)體：除去細胞核后由質(zhì)膜包裹的無核細胞。細胞融合：指使用人工的方法使2個或2個以上的細胞合并形成1個細胞的技術(shù)。對稱融合：兩個完整的細胞間的融合。異核體：來自不同基因型的融合細胞。不對稱融合：用物理或化學方法使某親本的核或細胞質(zhì)失活再與另一完整的細胞進行融合。體細胞雜交：指將不同來源的體細胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術(shù)。花藥和花粉培養(yǎng)：指離體培養(yǎng)花藥和花粉，使小孢子改變原有的配子體發(fā)育途徑，轉(zhuǎn)向

5、孢子體發(fā)育途徑，形成花粉胚或花粉愈傷組織，最后形成花粉植株，從中鑒定出單倍體植株并使之二倍化的技術(shù)。植物細胞培養(yǎng)：在離體條件下，將分離的植物細胞繼代培養(yǎng)增殖，獲得大量細胞群體的技術(shù)。動物細胞培養(yǎng)：模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動物細胞在體外生存、增殖的技術(shù)。細胞懸浮培養(yǎng)：將細胞接種于液體培養(yǎng)基中并保持良好的分散狀態(tài)的培養(yǎng)方式。細胞固定化培養(yǎng)：將游離的細胞包埋在支持物內(nèi)部或表面進行培養(yǎng)的技術(shù)。貼壁培養(yǎng)：指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng)。原代培養(yǎng)：接種組織塊直接長出單層細胞或?qū)⒔M織分散成單個細胞再進行培養(yǎng)，在首次傳代前的培養(yǎng)成為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：指將原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的過程。原代細胞：有分

6、裂但不旺盛，且多呈二倍體核型的細胞。細胞系：由原代培養(yǎng)經(jīng)傳代培養(yǎng)純化，獲得的能在體外生存的細胞群體。細胞株：指從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，有單細胞增殖形成的細胞群。天然培養(yǎng)基：只要有血清、組織提取液、雞胚汁等，營養(yǎng)價值高，成分復雜來源有限。單克隆抗體：經(jīng)過免疫哺乳類動物單一的B淋巴細胞，可以分泌單一性抗體，這種具有特異性的同質(zhì)性的抗體為單抗。轉(zhuǎn)基因技術(shù)：通過人工方式將外源基因整合到生物體基因組內(nèi)，并使該轉(zhuǎn)基因生物能穩(wěn)定地將此基因遺傳給后代的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因生物反應器：將外源基因轉(zhuǎn)入細胞或動植物，利用細胞增殖或動植物代謝制備外源基因的表達產(chǎn)物的技術(shù)。乳腺生物反應器：

7、將外源基因置于乳腺特異性調(diào)節(jié)序列指下，使之在乳腺中表達，然后通過回收乳汁獲得有重要價值的生物活性蛋白的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因克隆動物：通過核移植產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因動物。轉(zhuǎn)基因動物：指在基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的基因工程動物。轉(zhuǎn)基因植物：指將外源基因轉(zhuǎn)入到植物的細胞或組織獲得了新的遺傳性狀的植物。轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)化方法：載體介導法、基因直接導入法、種質(zhì)系統(tǒng)法、病毒感染法。干細胞：一類具有自我更新和分化潛能的細胞。分為胚胎干細胞和成體干細胞。胚胎干細胞（ES細胞）：從著床前胚胎內(nèi)細胞團或原始生殖細胞經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細胞，是可以分化成任何一種組織類型的細胞。成體干細

8、胞：是成體組織內(nèi)具有進一步分化潛能的細胞，是多能或單能干細胞。單能干細胞：只能分化為單一類型細胞的干細胞。如表皮的基質(zhì)細胞只能分化產(chǎn)生表皮細胞。多能干細胞：能夠形成兩種或兩種以上類型細胞的干細胞。如骨髓造血干細胞可以分化成紅細胞、巨噬細胞、粒細胞、巨核細胞、淋巴細胞等多種類型細胞。全能干細胞：具有無限分化潛能的干細胞。如胚胎干細胞。細胞重組：是指從活細胞中分離出細胞器及其組分，在體外進行重組裝配成為具有生物活性的細胞的一種技術(shù)。胞質(zhì)雜種：將兩種來源不同的核外遺傳物質(zhì)（細胞器）與一個特定的核組合在一起得到的細胞是胞質(zhì)雜種。同核體：基因型相同的細胞融合成的細胞。異核體：來自不同基因型的融合細胞。胚

9、乳培養(yǎng)：指處于細胞期的胚乳組織的離體培養(yǎng)。胚乳是獨特的組織，它的功能是為胚發(fā)育和種子萌發(fā)提供營養(yǎng)。胚珠培養(yǎng)：指未受精或受精后的胚珠離體培養(yǎng)。未受精胚珠培養(yǎng)可為；離體受精提供雌配子體，也可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體植株。細胞工程發(fā)展史：1839年，施萊登和施旺發(fā)現(xiàn)了細胞學。1902年，Haber labdt提出了細胞全能學說。1958年，Stwovrd有胡蘿卜韌皮部組織誘導生成再生植株。1907年，Harrison創(chuàng)立動植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。細胞核移植：一種利用現(xiàn)為操作技術(shù)將一種動物的細胞核移入同種或異種動物的去核成熟卵細胞內(nèi)的技術(shù)。細胞核移植事件：1997年，英格蘭愛丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司

10、利用高度分化的綿羊乳腺上皮細胞，通過核移植克隆了一只雌性小綿羊多莉植物原生質(zhì)體融合有關(guān)事件：1960年，科金應用酶解法首次成功的從番茄幼苗根部制備出大量原生質(zhì)體。1972年，卡爾森用NaNO3做誘導劑將來自不同種的兩個煙草原生質(zhì)體進行融合，得到一個體細胞雜種植株。體細胞雜交：將不同來源的體細胞融合并使之分化再生形成新品種的技術(shù)。體細胞雜交相關(guān)事件：1972年，卡爾森開發(fā)出第一個體細胞雜種植物1978年，米歇爾斯首次將番茄與馬鈴薯細胞雜交成功。動物細胞培養(yǎng)：模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動物細胞在體外生存，增值的一門技術(shù)。動物細胞培養(yǎng)相關(guān)事件：1907年，哈里森開創(chuàng)了動物組織培養(yǎng)的先河1923年，卡雷

11、爾設(shè)計的卡氏培養(yǎng)瓶，用于培養(yǎng)基胚的心肌組織取得成功，機打推動了動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的建立。1951年，厄爾利等人開發(fā)了動物細胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。發(fā)展歷史：19世紀30年代，施萊登和施旺創(chuàng)立了細胞學說。1902年，哈波蘭德提出人工培育植物。1934年，懷特配置出了植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)了維生素和植物激素在植物組織培養(yǎng)中的重要作用。1943年，懷特正式提出植物細胞具有全能性的學說。1948年，催繳和斯庫格發(fā)現(xiàn)腺嘌呤和生長素的比例是控制芽和根形成的主要條件之一。1953年，繆爾開創(chuàng)了單細胞無性繁殖的工作。1956年，米勒發(fā)現(xiàn)了有高度活力的促進細胞分裂和芽形成的物質(zhì)命名為激動素。1958年，史都華德

12、首次通過實驗證實了細胞具有全能性。1960年，莫雷爾采用蘭屬的莖尖培養(yǎng)，實現(xiàn)了去病毒和快速繁殖兩個目的。轉(zhuǎn)基因技術(shù)：通過人工方式將外源g整合到生物體g組內(nèi)，并使該g生物能穩(wěn)定地將此g遺傳給后代的技術(shù)。緒論：細胞工程的地位，內(nèi)容和技術(shù)從某種意義上來說，基因工程是現(xiàn)在生物技術(shù)的核心，而細胞工程則是它的基礎(chǔ)和公共平臺，基因工程與細胞工程的結(jié)合決定著生物技術(shù)的發(fā)展按照生物類型可以分為：動物細胞工程，植物細胞工程，微生物細胞工程，按照操作對象可以分為細胞與植物培養(yǎng)，細胞融合，細胞核移植，染色體操作，轉(zhuǎn)基因生物等，2-5，常用的化學消毒方法有哪些化學方法（75%的酒精，甲醛，環(huán)氧乙烷，氯已定，戊二醛，過氧

13、乙酸，等）4-1 體培養(yǎng)細胞有哪些類型其生長有什么區(qū)別一；貼壁型細胞1 成纖維型細胞：細胞貼壁后呈長梭形，圓形細胞核位于中央，生長呈放射狀，旋渦狀走向。細胞之間排列疏散，有較大的細胞間隙。2 上皮型細胞：細胞貼壁后呈三角形及不規(guī)則扁平的多角形，中央有扁圓形核，細胞彼次緊密連接。3 游走型細胞：細胞在支持物上分散生長，一般不連接成片形成菌落，呈活躍的游走和變形運動，速度快且方向不固定，外形不規(guī)則且不斷變化。4 多形型細胞：形態(tài)上不規(guī)則，一般分胞體和胞突兩部分，其中胞突為細長型，類似絲狀偽足，胞體呈現(xiàn)多角形。二：懸浮型細胞：某些細胞體外培養(yǎng)不需要貼附支持物上而生存空間大，能大量繁殖細胞，容易進行傳

14、代培養(yǎng)。4-2細胞系的生長過程包括哪些每一個生長階段有什么特征（1）原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，是指從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一代的階段，一般持續(xù)14周。此期細胞移動比較的活躍，可見細胞分裂，但是不旺盛。（2）傳代期：原代細胞生長一定時間后，如是貼附型細胞就會連接成片而鋪滿瓶底，這時需要將原代細胞分開至多個培養(yǎng)瓶中。細胞增殖旺盛，并維持二倍體核型。（3）衰退期：此期細胞仍生存，但是不增殖或者增殖很慢，最后衰退死亡。4-3 每代細胞的生長曲線包括那幾個主要時期各期細胞有何特點（1）潛伏期：此時細胞已存活具有代謝及運動功能，但是尚未增殖（2）指數(shù)生長期：又稱對數(shù)期，此期細胞增殖旺盛，成倍增長，活力最

15、佳，適用于進行實驗研究。（3）停止期，又稱平臺期，此期細胞幾經(jīng)將其支持物表面沾滿，細胞活力減退，已不再進行分裂增殖。4-4體外培養(yǎng)的細胞應滿足哪些營養(yǎng)成分（1）水（2）平衡鹽溶液（3）消化液（4）消化酶抑制液（5）PH 調(diào)整液：NaHCO3溶液，HEPES溶液，（6）抗生素液（7）谷氨酰胺補充液4-5 什么是細胞系，細胞株如何建立細胞系在研究中細胞系和細胞株能發(fā)揮哪些作用國際上有哪些著名的細胞庫細胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的一種細胞為主的，能在體外長期生存的不均一的細胞群體。細胞株：細胞系經(jīng)過進一步的克隆化，便得到由單一細胞組成的細胞株。初代培養(yǎng)，又稱為原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細胞

16、，組織和器官進行第一次的培養(yǎng)物。一旦進行傳代培養(yǎng)的細胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細胞系美國的美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）和人遺傳突變細胞庫（HGMR），細胞衰老細胞庫（CAR）等。4-6 細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細胞培養(yǎng)包括天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基主要來自動物體液或從組織分離提純制備的，營養(yǎng)成分高，但是成分復雜，來源有限，合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學物質(zhì)模擬合成的，細胞培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)是指細胞或組織離開有機體之后的首次培養(yǎng)，培養(yǎng)到細胞生長到一定密度后就需要更新培養(yǎng)液，這就是細胞的傳代培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)的方法通常有：懸滴培養(yǎng)

17、法，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法，和旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法。4-7 動物的細胞與組織培養(yǎng)是從動物體內(nèi)取出組織或細胞，模擬有機體內(nèi)生理條件，在體外建立無菌，適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)，動物細胞和組織培養(yǎng)的動物細胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細胞融合，組織工程，胚胎工程，動物克隆等都離不開細胞的培養(yǎng)，4-8 培養(yǎng)細胞的生長特點細胞的生長特點有：貼附，接觸抑制，密度依賴性等。接觸抑制：是體外培養(yǎng)中某些貼附型細胞生長特征之一，當兩個細胞由于移動而相互靠近發(fā)生接觸時，細胞不在移動，在接觸區(qū)域的細胞膜皺褶樣活動停止，從而使細胞停止運動，這種由于細胞接觸而抑制細胞運動的現(xiàn)象稱為接觸抑制。密度抑制：當細胞密

18、度進一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細胞因為營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制，導致細胞分裂停止。4-9細胞培養(yǎng)常用的液體【1】水【2】平衡鹽溶液【3】消化液【4】消化酶抑制液【5】PH調(diào)整液;常用的有碳酸氫鈉溶液和HEPES溶液【6】抗生素液【7】谷氨酰胺補充液4-10原代培養(yǎng)的過程：原代培養(yǎng)就是初次培養(yǎng)，是從供體獲取組織后的首次培養(yǎng)，過程一般包括：取材培養(yǎng)材料的制備接種加培養(yǎng)液培養(yǎng)4-11傳代培養(yǎng)的過程：傳代培養(yǎng)分為第一次傳代和常規(guī)傳代兩種方法。第一次傳代，當原代培養(yǎng)的細胞生長到一定的階段時，可以進行第一次傳代，通常取決于原代培養(yǎng)方法，培養(yǎng)物的細胞活性，細胞類型和特點，

19、接種的細胞密度，培養(yǎng)條件。常規(guī)傳代：【1】貼壁細胞的消化傳代法，【2】懸浮細胞傳代5-1 簡述單克隆抗體的制備過程及其主要原理。動物免疫、細胞融合、選擇雜交細胞、檢測抗體、雜交瘤細胞的克隆化、單克隆抗體的大量產(chǎn)生幾個步驟。免疫小鼠注射特定的抗原蛋白 培養(yǎng)骨髓溜細胞 B淋巴細胞 骨髓瘤細胞 融合 雜交細胞 篩選雜交細胞（抗體檢驗） 克隆能產(chǎn)生抗體的陽性細胞 在克隆陽性細胞 注射小鼠 體外培養(yǎng) 單克隆抗體 單克隆抗體5-2 HAT的選擇原理是什么HAT培養(yǎng)基是根據(jù)細胞由次黃嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途徑而設(shè)計的。5-3細胞融合的定義細胞融合是又稱體細胞雜交或細胞雜交，是指在離體條件下用人工的

20、方法將不同的生物或同種生物不同類型的單細胞通過無性方式融合成一個雜合細胞的技術(shù)。細胞融合技術(shù)的出現(xiàn)標志著細胞工程的誕生。5-4 細胞融合的核心過程（P82）6-1 胚胎工程的概念：胚胎工程是在胚胎移植的技術(shù)上發(fā)展起來的現(xiàn)代生物技術(shù)，主要包括體外受精技術(shù)，胚胎移植技術(shù)，胚胎分割技術(shù)，胚胎冷凍保存技術(shù)和性別控制技術(shù)。6-2 體外受精體外受精：是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù)。它的基本原理是人工模擬體內(nèi)環(huán)境，包括溫度，濕度，營養(yǎng)，氣體，滲透壓，PH等，使卵丘卵母細胞復合體中的初級卵母細胞成熟，同時使精子獲能，完成受精。6-3體外受精技術(shù)卵母細胞的采集和成熟培養(yǎng)；【1】

21、超數(shù)排卵，從活體卵巢中采集卵母細胞；從屠宰后母畜卵巢上采集卵母細胞；【2】卵母細胞的選擇，【3】卵母細胞的成熟培養(yǎng)精子的獲能處理；體外受精【1】常規(guī)的體外受精技術(shù)【2】與分離精子相結(jié)合的體外受精技術(shù)【3】顯微受精技術(shù)。受精卵的體外培養(yǎng)；胚胎移植。7-1干細胞的定義干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞，根據(jù)其發(fā)育階段，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞，按照分化的潛能的大小，可以將干細胞分為全能干細胞，多能干細胞，定向干細胞。7-2成體干細胞的類型成體干細胞是分布在成體組織中尚未分化的，具有自我更新，并能構(gòu)建和補充相應組織的各種類型細胞潛能的干細胞，分為：造血干細胞，神經(jīng)干細胞，胰島干細胞，

22、皮膚干細胞。7-3 組織工程組織工程是指應用工程學和生命科學的原理和方法來研究正?；虿±頎顩r下的哺乳動物組織的結(jié)構(gòu)功能和生長的機制，研究開發(fā)能夠修復，維持或改善損傷組織的人工生物替代物的一門學科。8-1 簡述細胞核移植的發(fā)展史，討論“多莉”羊產(chǎn)生的學術(shù)意義1952年Briggs和King發(fā)明了細胞核移植技術(shù)，首次把兩棲淚囊體胚的細胞核移植到去核卵中，發(fā)育成為可攝食的蝌蚪1997年，英格蘭愛丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司利用高度分化的綿羊乳腺上皮細胞，通過核移植克隆了一只雌性小綿羊多莉它是人類首次用成年的體細胞乳腺上皮細胞獲得的克隆后代，證明了哺乳動物高度分化的細胞核在卵母細胞質(zhì)的支持下也能夠

23、恢復其全能性，為細胞的全能性增加了新的實驗證據(jù)。8-2簡述細胞核移植的類型和主要的操作技術(shù)【1】胚胎細胞核移植技術(shù)【2】干細胞核移植技術(shù)【3】體細胞核移植技術(shù)操作技術(shù)：【1】核受體細胞的準備【2】核供體細胞的準備【3】細胞核移植【4】激活【5】重組胚的體內(nèi)或體外培養(yǎng)【6】胚胎移植8-3 核移植技術(shù)的應用【1】制備基因克隆動物，進行生物藥物的生產(chǎn)【2】培育優(yōu)良畜種，擴大良種種群【3】開展異種動物克隆，拯救瀕危動物【4】與干細胞技術(shù)結(jié)合。開展治療性克隆【5】利用核移植技術(shù)，研究生物學的基本問題。9-1什么是轉(zhuǎn)基因動物指在基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的基因工程動物。9

24、-2簡述轉(zhuǎn)基因動物的制備方法，分析比較幾種方法的原理與特點。方法原理特點基因顯微注射法通過顯微注射儀將外源基因直接注射到受精卵的雄原核內(nèi)使外源基因整合到DNA中，發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物外源分子的DNA大小不受限制，每次注射外源基因的長度可達50KB。方法簡單，導入過程直觀逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法將目的基因重組到逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組上，人為的感染床前或者著床后的胚胎，能夠高效哦的感染宿主細胞，感染率達到100%胚胎干細胞介導法外源DNA導入體外培養(yǎng)的ES細胞，經(jīng)篩選后獲得整合穩(wěn)定和表達好的轉(zhuǎn)化細胞系，然后將這些細胞注入受體類囊配腔中，精子載體導入法以精子作為外源DNA載體的轉(zhuǎn)基因方法YAC介導的基因轉(zhuǎn)移細胞核移植

25、技術(shù)9-6 轉(zhuǎn)基因動物的應用，【1】改良動物品種【2】生物制藥【3】建立診斷和治療人類疾病的動物模型【4】生產(chǎn)可用于人體器官移植的動物器官【5】基因治療【6】基因打靶9-7動物乳腺生物反應器的制備【1】表達載體的構(gòu)建【2】目的基因的選擇【3】體外重組【4】基因轉(zhuǎn)導【5】胚胎移植【6】鑒定，轉(zhuǎn)基因動物乳腺生物反應器可以從分子水平和乳腺分泌物兩個方面鑒定10-1 什么是染色體工程動物染色體工程主要包括哪些方面是按照人們的需要對生物的染色體進行操作，添加，消減或者替換染色體，從而達到定向選育新品種或者創(chuàng)造人工新物種的目的，動物染色體工程主要包括染色體倍性改造，結(jié)構(gòu)改造及人工染色體的利用。10-2 動

26、物染色體加倍技術(shù)主要有哪些 【1】化學誘導法；利用秋水仙素，細胞松弛素，麻醉劑N2O【2】物理方法；溫度休克法，水靜壓法【3】生物學方法；通過雜交技術(shù)11-1 結(jié)合細胞工程的發(fā)展，全面分析和理解細胞學說和植物全能性理論的意義細胞工程發(fā)展史：1839年，施萊登和施旺發(fā)現(xiàn)了細胞學。1902年，Haber labdt提出了細胞全能學說。1958年，Stwovrd有胡蘿卜韌皮部組織誘導生成再生植株。1907年，Harrison創(chuàng)立動植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。植物細胞的全能性：植物體的一部分組織或者器官具有發(fā)育成完整植株的潛在能力，稱之為植物細胞的全能性。植物全能性理論是植物細胞工程的理論基礎(chǔ)。11-2 愈傷

27、組織有什么特點它在植物細胞工程中有什么作用脫分化后的細胞經(jīng)過細胞分裂，產(chǎn)生無組織結(jié)構(gòu)、無明顯極性的松散的細胞團。愈傷組織的誘導是植物細胞體外再生的第一步。也是關(guān)鍵的一步。11-3 愈傷組織形成再生植株需要經(jīng)過什么途徑要經(jīng)過器官的發(fā)生和胚狀體發(fā)生兩條途徑。器官的發(fā)生是由愈傷組織首先在一種培養(yǎng)基生誘導形成的芽（或根），再在另一種培養(yǎng)基上誘導形成根（或芽）。胚狀體發(fā)生是由愈傷組織形成類似種子的胚的結(jié)構(gòu)，同時產(chǎn)生芽端和根端的結(jié)構(gòu)，稱為胚狀體。11-4 分析影響植物組織脫分化和再分化的因素內(nèi)部因素：包括植物的遺傳性狀和生理狀況，外部因素：包括營養(yǎng)條件（如植物激素，無機鹽，有機營養(yǎng)成分）和環(huán)境條件（如培養(yǎng)

28、基的PH，滲透壓，溫度，濕度，光照）11-5 植物組織培養(yǎng)基的組成成分有哪幾類在離體培養(yǎng)中的功能是什么【1】無機營養(yǎng)成分。如鎂是葉綠素分子的一部分，鈣是細胞壁的組成之一，氮是各種氨基酸，維生素，蛋白質(zhì)和核酸的重要組成部分?！?】有機營養(yǎng)成分。碳源，含氮物質(zhì)【3】 植物激素類，生長素類，細胞分裂素類，赤霉素類【4】瓊脂 它是培養(yǎng)基中的一種必需成分【5】PH值在滅菌之前培養(yǎng)基的PH值一般都調(diào)節(jié)到11-6 分析植物離體培養(yǎng)的環(huán)境條件及對培養(yǎng)的影響環(huán)境的影響主要有：【1】光的影響：光對培養(yǎng)基所產(chǎn)生的影響是不同的，在煙草細胞培養(yǎng)物中泛醌的合成不受光的影響，【2】溫度的影響：不同植物細胞培養(yǎng)物的生長和次生

29、產(chǎn)物的合成對溫度有一定的要求?！?】振蕩的頻率：搖床的振蕩頻率對細胞培養(yǎng)物的生長和代謝物的積累都會產(chǎn)生影響。11-13植物幾種大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)各有什么特點培養(yǎng)體系營養(yǎng)特點懸浮細胞培養(yǎng)細胞生長較慢，易成團產(chǎn)物含量較低，遺傳不穩(wěn)定，培養(yǎng)后期粘性大固定化培養(yǎng)載體固定化：生長慢，產(chǎn)物含量較高，遺傳穩(wěn)定，可以連續(xù)培養(yǎng)，自固定化：生長較快，細胞聚集，成大顆粒，產(chǎn)量高。培養(yǎng)夜澄清植物器官培養(yǎng)毛狀根生長迅速，分支多，不需要外源激素，向地型弱，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定芽生長較慢，遺傳較穩(wěn)定，產(chǎn)物含量高，需要光照，體細胞胚生長慢，遺傳穩(wěn)定，次級代謝產(chǎn)物含量較高。冠癭組織生長快，不需要外源激素，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定，懸浮培養(yǎng)為顆

30、粒狀12-1什么是植物快繁技術(shù)總結(jié)其主要的操作步驟。利用組織培養(yǎng)技術(shù)，將優(yōu)良植株的莖尖，腋芽，葉片，鱗片等器官，組織和細胞進行離體培養(yǎng)，在短時間內(nèi)獲得大量遺傳性一致的植株的技術(shù)稱為植物的快繁技術(shù)。其主要的操作流程包括無菌母株的制備，不定芽增殖，完整植株的形成，再生植株的鍛煉和馴化及再生植株的鑒定等步驟。12-2植物脫毒方法有哪些有微莖尖培養(yǎng)法，株心組織培養(yǎng)法，熱處理法13-1通過離體培養(yǎng)獲得單倍體的途徑有哪些通過離體培養(yǎng)花藥和花粉，是離體培養(yǎng)獲得單倍體的主要途徑13-2 花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性有何關(guān)系花藥再生植株有兩種方式：【1】花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再分化形成

31、植株，【2】胚狀體再生，即花藥中的花粉通過形成胚狀體，發(fā)育成單倍體植株，在花藥培養(yǎng)中，花藥中的花粉最容易形成胚狀體或愈傷組織，但是，有時花藥的體細胞也可以分裂繁殖，因此，體外花藥培養(yǎng)除了得到小孢子來源的單倍體植物，還會的到花藥體細胞來源的二倍體植株。13-3 花粉培養(yǎng)過程花粉培養(yǎng)是指把花粉從花藥中分離出來，以花粉粒作為外植體進行離體培養(yǎng)的技術(shù)。13-4花藥與花粉培養(yǎng)的方法13-4-1材料如何選擇【1】材料的遺傳差異【2】母本生理狀態(tài)的影響【3】花粉發(fā)育時期13-4-2 材料的預處理【1】低溫處理【2】高溫處理【3】離心處理【4】激光照射【5】乙烯利處理【6】甘露醇處理13-4-3培養(yǎng)基基本培養(yǎng)

32、基，【1】碳源【2】激素【3】附加成分13-4-4，接種與再生植株的培養(yǎng)【1】材料的滅菌處理【2】培養(yǎng)條件【3】花粉的培養(yǎng)【4】花粉植株的鑒定【5】單倍體植物的染色體加倍14-1 植物胚乳有哪些類型植物胚乳可以分為兩大類：被子植物胚乳和騾子植物胚乳。胚乳發(fā)育初期是否形成細胞壁可分為：【1】核型胚乳【2】細胞型胚乳【3】沼生目型胚乳14-2 植物胚胎培養(yǎng)的定義和發(fā)展植物胚胎培養(yǎng)包括：胚培養(yǎng)，胚珠培養(yǎng)，子房培養(yǎng)和胚乳培養(yǎng)。胚培養(yǎng)包括成熟胚培養(yǎng)和幼胚培養(yǎng)。1904年Hanning培養(yǎng)羅卜和辣根菜的胚，Laibach在1925年19289年培養(yǎng)亞麻種間雜種幼胚成功的獲得了種間雜種，首次證實了這種方法在

33、實際應用中的價值14-3 胚培養(yǎng)的意義1克服了遠源雜交不孕和幼胚敗育2成熟胚培養(yǎng)快速繁殖3胚培養(yǎng)作為轉(zhuǎn)基因受體材料15-1 愈傷組織與體細胞胚胎發(fā)生愈傷組織原來是指植物受損時在愈合傷口處長出的一團瘤狀突起，突起內(nèi)的細胞已發(fā)生脫分化的變化，培養(yǎng)中的愈傷組織是指從外植體的內(nèi)部或切口表面形成的一團沒有分化的均勻一致，無序生長的薄壁細胞團。這種組織具有再分化能力。愈傷組織的形成大致要經(jīng)過起動期，分裂期，形成期三個階段。愈傷組織器官的發(fā)生：【1】不定芽方式：是指愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽的再生植株，【2】胚狀體的形成，是指培養(yǎng)的組織或細胞中直接或間接形成胚胎的生長方式。15-2人工種子就是將植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細胞胚包埋在含有營養(yǎng)成分和保護功能的物質(zhì)中而制成的，在條件適宜時他同普通種子一樣可以發(fā)芽成苗。人工種子包括：體細胞胚，人工胚乳，人工中皮。15-3人工種子的研究現(xiàn)狀【1】人工種子結(jié)構(gòu)完整，體積小，便于儲藏和運輸?！?】供制作人工種子的體細胞胚數(shù)量多，繁殖快【3】制作人工種子時還可以加入菌肥，微生物，農(nóng)藥，以抵抗外來病毒和微生物的侵染，【4】對生育周期長的