EBER檢測(cè)試劑盒(原位雜交)

1、.EBER檢測(cè)試劑盒（原位雜交）（操作之前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀此說(shuō)明書） 檢測(cè)原理和意義EBER是EB病毒編碼的小RNA，是EB病毒的表達(dá)產(chǎn)物，在EB病毒感染的細(xì)胞核中以高拷貝數(shù)存在。根據(jù)EBER的特有序列設(shè)計(jì)的EBER單鏈 DNA探針能特異地與EBER靶序列互補(bǔ)、雜交，從而檢測(cè)EB病毒是否存在。此方法檢測(cè)石蠟組織切片中的EB病毒具有極高的特異性和靈敏性。目前EBER原位雜交已成為組織和細(xì)胞中EB病毒的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，在國(guó)際上廣為使用。 試劑盒提供的材料和試劑成 份保存方法提 供 量20人份50人份1EBER雜交液-20400ul1.0ml2蛋白酶K440ul100ul3一抗41ml2.5ml4二抗41m

2、l2.5ml5HRP聚合物41ml2.5ml6DAB底物41ml2.5ml7DAB 420ul50ul818X18mm蓋玻片4/室溫20片50片9濕盒增效液4/室溫30ml30ml（注意：EBER雜交液請(qǐng) -20保存）；. 用戶自備材料和試劑1. 55恒溫培養(yǎng)箱8.二甲苯2. 37恒溫培養(yǎng)箱9.酒精3. 光學(xué)顯微鏡10. PBS(pH=7.6)4. 移液器11. 蘇木素5. 計(jì)時(shí)器12. 氨水6. 玻片染色缸和染色架13. 鹽酸酒精7. 濕盒2個(gè) 實(shí)驗(yàn)前需配試劑30濕盒增效液取濕盒增效液及蒸餾水，按3:7配制成30%濕盒增效液備用。 實(shí)驗(yàn)時(shí)需配試劑A、1X蛋白酶K將蛋白酶K與1PBS按1：25

3、的比例配制備用。（現(xiàn)配現(xiàn)用）B、DAB顯色液依據(jù)需要配制DAB顯色液，以可覆蓋整個(gè)組織的量為宜。取DAB與DAB底物，按照1：50的比例混勻，避光保存?zhèn)溆谩?現(xiàn)配現(xiàn)用) 操作步驟1切片處理：將4um厚度的組織粘附在APES處理的載玻片上，切片于60-70烘烤60分鐘以上。（建議每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)附加陽(yáng)性、陰性對(duì)照片）2脫蠟及水化：溶液次數(shù)時(shí)間（分）二甲苯3 10100%酒精1 395酒精1 x 380%酒精1 3蒸餾水1 x 3（注意：使用過(guò)的二甲苯，應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間，以保證脫蠟完全）3蛋白酶K消化：甩干切片, 將組織周圍液體用濾紙吸干, 每張切片滴加適量1蛋白酶K工作液(約50 ul，根據(jù)組織大

4、小增、減量), 室溫孵育5分鐘。蒸餾水洗滌11分鐘，小心擦干組織周圍液體。4雜交：4.1 每張切片滴加適量雜交液(約20 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，并加蓋玻片（本試劑盒配備，可根據(jù)加入雜交液量進(jìn)行剪裁）；4.2 放置水濕盒中，55恒溫箱孵育60-90分鐘；4.3 轉(zhuǎn)至37孵育4-16 小時(shí)（放置于30%濕盒增效液濕盒中）。建議過(guò)夜（16小時(shí)）以保證低拷貝樣本的雜交效果；4.4 48（PBS 預(yù)溫）浸泡切片，小心移去蓋玻片，繼續(xù)浸泡5分鐘；4.5 48 PBS洗滌3x 5分鐘 (輕微振蕩容器)；（注意：蓋玻片規(guī)格應(yīng)與雜交液量匹配，切片在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中要保持濕潤(rùn)狀態(tài)，防止干片）5信號(hào)放大與顯色

5、：5.1 小心擦去組織周圍液體，滴加適量一抗(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，37，水濕盒中孵育30分鐘；37 PBS浸泡3x2分鐘（輕微振蕩容器）；5.2 小心擦去組織周圍液體，滴加適量二抗(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育20分鐘；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)；5.3 小心擦去組織周圍液體，滴加適量HRP聚合物(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育30分鐘；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)。5.4 小心擦去組織周圍液體，滴加適量DAB顯色液(約50 ul，根據(jù)組織大小增、減量)，室溫，水濕盒中孵育約10分鐘（不同樣本

6、的顯色時(shí)間可能有所差別，建議鏡下觀察顯色過(guò)程）；室溫PBS浸泡3x2分鐘 (輕微振蕩容器)。5.5 自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染（可用鹽酸酒精分化及氨水返藍(lán)）。梯度酒精脫水，中性樹(shù)膠封片。 陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：僅為細(xì)胞核著色。胞漿和胞膜著色不能視為陽(yáng)性，只有當(dāng)核分裂時(shí)可以出現(xiàn)胞漿陽(yáng)性著色。 其他事項(xiàng)：本試劑保質(zhì)期為12個(gè)月?？蛻粼谑盏疆a(chǎn)品時(shí)請(qǐng)及時(shí)檢查，如發(fā)現(xiàn)有外包裝破損、試劑盒成分不全等產(chǎn)品問(wèn)題，或者在使用過(guò)程中有任何疑問(wèn)，請(qǐng)及時(shí)與泰普客戶服務(wù)中心聯(lián)系，我們將及時(shí)為您解決。 公司信息：公司名稱：福建泰普生物科學(xué)有限公司總部：福建省福州市金山金洲北路7號(hào)金山科技企業(yè)孵化器7號(hào)樓4層 郵編：350002 電話：800-804-8333，0591-2805 3600 傳真：0591-2805 3700研發(fā)中心：北京市昌平區(qū)北清路中關(guān)村生命科學(xué)園創(chuàng)新大廈A座207室 郵編：102206 電話：010-8072 0071 傳真：010-8072 0072操作步驟簡(jiǎn)表操 作參 數(shù)1二甲苯3X102100%酒精1X3395%酒精1X3480%酒精1X35蒸餾水1X36酶消化室溫,57蒸餾水18加雜交液適量955變性60-901030濕盒增效液的濕盒中孵育37，4-16h11PBS（用前48預(yù)溫）脫片浸泡1-5+512PBS（用前48預(yù)溫）浸泡3X513加一抗37，