不同干細胞在口腔再生醫(yī)學中的運用

1、不同干細胞在口腔再生醫(yī)學中的運用關鍵詞：干細胞; 胚胎干細胞; 間充質(zhì)干細胞; 誘導多能干細胞; 牙槽骨修復; 骨再生; 成骨; 骨組織; 國家自然科學基金;Abstract：BACKGROUND: In recent years, with the development of stem cell and regeneration technologies, bone tissue engineering has been rapidly developed. Despite there are a variety of seed cells for bone tissue engineer

2、ing, researchers need to decide which types of stem cells are the best suitable for their specific purposes. To date, there is no ideal treatment for oral bone tissue repair, although a plenty of therapeutic methods have been proposed. Therefore, it will provide a new idea for repairing oral bone de

3、fects by fully utilizing the potential of stem cells during bone regeneration.OBJECTIVE: To review the osteogenic potential of stem cells from different sources on oral bone regeneration, thereby providing a basis for selecting seed cells for tissue engineering.METHODS: Databases of CBM, CNKI, PubMe

4、d, Elsevier, and Web of Science were retrieved with the keywords of stem cell, bone repair, alveolar bone regenerate, osteogenesis, bone tissue; in English and Chinese, respectively. After initial screening of titles and abstracts, irrelevant articles were excluded and 81 eligible articles were incl

5、uded in final analysis.RESULTS AND CONCLUSION: Tissue engineering technology provides a new approach to oral bone regeneration, but the choice of stem cells has not been standardized. Many types of stem cells have been used for bone tissue regeneration, but their roles in the body vary due to differ

6、ent origins of stem cells. Therefore, choosing a suitable type of stem cells is important for the repair of specific tissue damage. In this review, we compared the advantages and disadvantages of embryonic stem cells, mesenchymal stem cells and induced pluripotent stem cells in the oral bone regener

7、ation, and attempted to provide a reference for the selection of seed cells for the regeneration and repair of oral bone tissue.Keyword：stem cells; embryonic stem cells; mesenchymal stem cells; induced pluripotent stem cells; alveolar bone repair; bone regeneration; osteogenesis; bone tissue; Nation

8、al Natural Science Foundation of China;0、引言Introduction牙槽骨缺損通常是由先天性畸形、骨折、創(chuàng)傷、腫瘤手術以及牙周炎等相關疾病所引起1。目前的治療標準是使用骨移植來恢復牙槽骨缺損進而重建口腔的正常功能, 主要有自體骨移植、同種異體骨移植以及合成材料, 自體骨移植雖可以實現(xiàn)少量骨缺損的修復, 但是并不能滿足大塊骨缺損的修復以及可能會帶來供區(qū)感染風險2;同種異體骨移植和合成材料對骨誘導能力較差甚至可引起免疫排斥反應3。隨著再生醫(yī)學的發(fā)展, 干細胞在口腔骨再生修復中的潛力已經(jīng)得到良好的展現(xiàn)4,5。目前, 胚胎干細胞、間充質(zhì)干細胞和誘導多能干細胞已

9、經(jīng)用于口腔骨缺損修復6,7。文章綜述了不同干細胞在口腔再生醫(yī)學中的使用情況及其優(yōu)缺點, 旨在為骨組織工程中種子細胞的選擇提供方向。此外, 還介紹了不同信號分子 (細胞因子、生長因子) 對干細胞成骨分化的影響。1、 資料和方法Data and methods1.1、 資料來源計算機檢索中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫 (CBM) 、CNKI、Pub Med、Elsevier以及Web of Science數(shù)據(jù)庫在2003至2018年期間收錄的干細胞在口腔骨組織再生方面的相關文章。1.2、 入選標準納入標準: (1) 有關胚胎干細胞在骨修復方面的相關文獻; (2) 有關間充質(zhì)干細胞在口腔骨再生修復方面的相關

10、文獻; (3) 有關誘導多能干細胞在口腔骨缺損修復方面的相關文獻; (4) 干細胞與病理相關聯(lián)的文獻; (5) 同一領域中論點、論據(jù)可靠的文獻。排除標準: (1) 重復性研究且與研究目的無相關性的文章; (2) 資料無法提取的部分文獻。1.3、 數(shù)據(jù)的提取研究內(nèi)容由3人獨立提取并通過討論解決分歧。信息記錄側重于不同來源干細胞在口腔骨組織再生修復方面的相關文獻。1.4、 文獻證據(jù)綜合提煉計算機檢索初檢得到542篇文獻, 通過閱讀文題和摘要進行初步篩選, 排除與文章主題不相關的文獻, 根據(jù)納入標準和排除標準, 最后納入81篇文獻進行綜述, 見圖1。圖1 文獻檢索流程簡圖2、 結果Results2.

11、1、 用于再生醫(yī)學的干細胞類型自20世紀80年代至今, 干細胞已經(jīng)用于遺傳疾病、免疫疾病、血液病以及骨肌肉系統(tǒng)疾病的治療8。干細胞來源豐富、制備簡單, 是再生醫(yī)學領域最具有應用前景的種子細胞9。干細胞具有良好的免疫調(diào)節(jié)活性和旁分泌功能, 能夠釋放多種細胞因子, 促進細胞增殖, 抑制細胞凋亡, 修復損傷組織10,11。文章討論了在口腔骨組織再生中應用較多的3種干細胞, 見圖212, 比較了每種干細胞的優(yōu)缺點以及成骨分化潛能。圖2 三種干細胞在骨組織再生方面的應用2.1.1、 胚胎干細胞胚胎干細胞是骨組織再生修復的種子細胞之一, 它是一種多能干細胞, 其高表達OCT4、c MYC、KLF44、NA

12、NOG、SOX2等干細胞特異性分子13, 具有無限的自我更新能力和多向分化潛能, 在特定環(huán)境和細胞因子的作用下, 可以定向分化為骨細胞14。Bielby等15在體外將小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)在含有抗壞血酸、β-甘油磷酸鹽和地塞米松的培養(yǎng)液中, 發(fā)現(xiàn)小鼠胚胎干細胞具有成骨分化能力, 此外, 他們將人胚胎干細胞復合到聚乳酸支架內(nèi), 然后植入到裸鼠體內(nèi)35 d, 通過von Kossa染色發(fā)現(xiàn)存在礦化組織, 而且沒有任何畸胎瘤形成的痕跡。另外也有學者在體外將小鼠胚胎干細胞誘導為軟骨組織, 然后將其植入免疫缺陷小鼠的皮下, 在這個已經(jīng)分化的基礎上, 21 d后有成骨細胞的出現(xiàn)以及層狀骨形成16。L

13、iu等6研究了人胚胎干細胞在大鼠顱骨嚴重缺損中的體內(nèi)骨再生作用, 首先將人胚胎干細胞誘導成間充質(zhì)干細胞, 進而與碳酸鈣結合植入大鼠體內(nèi), 結果發(fā)現(xiàn)堿性磷酸酶、骨鈣素的基因表達以及礦化能力都得到增強。Hwang等17、Kuznetsov等18、Both等19也都證明了胚胎干細胞能夠成骨分化, 進而促進骨缺損修復。關于胚胎干細胞在口腔方面的應用, 有學者體外將胚胎干細胞誘導分化為擬胚體細胞, 然后與牙髓成纖維細胞共培養(yǎng), 15 d后發(fā)現(xiàn)ALP、COLIA2、DSPP的表達逐漸增強, 結果表明擬胚體細胞在一定條件下可以向成牙本質(zhì)樣細胞分化20。Zhang等21也利用胚胎干細胞成功誘導生成了牙齒-牙周

14、組織復合結構。盡管胚胎干細胞具有良好的成骨能力, 但關于其來源的爭議限制了其應用, 其在再生醫(yī)學中使用還需考慮其他因素, 主要問題是腫瘤的發(fā)生、免疫原性以及高純度的功能分化?；チ龅陌l(fā)生被認為是胚胎干細胞在再生醫(yī)學中應用的主要限制之一, 為了避免這一問題, 研究人員提出先將胚胎干細胞定向分化成所需的細胞類型。然而這就面臨著細胞分化的純度問題22。雖然將胚胎干細胞進行體外分化被認為是一種更安全的方法, 但這些分化的細胞在移植用于再生目的時, 會在活體組織中引起免疫反應23。雖然可以應用免疫抑制劑來抑制胚胎干細胞移植后產(chǎn)生的免疫反應, 但也保證不了絕對的安全, 再加上胚胎干細胞來源有限, 其在口腔

15、骨組織缺損修復中的應用受到了一定的約束。目前胚胎干細胞在骨損傷修復中的應用還處于初期研究階段, 還不能得出其臨床應用的確切結論, 特別是在口腔方面。2.1.2、 間充質(zhì)干細胞口腔中含有多種具有成骨潛能的間充質(zhì)干細胞, 牙髓、牙囊、牙根尖乳頭、牙周韌帶以及牙齦中均可發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞24,25。這些細胞的增殖活性和成骨能力是不同的。早在2003年, Miura等26首次從脫落乳牙的牙髓組織中發(fā)現(xiàn)并分離出具有高分化潛能的脫落乳牙干細胞 (stem cell from human exfoliated deciduous teeth, SHED) 。在體外, 脫落乳牙干細胞的克隆率、增殖率都要高于骨髓

16、間充質(zhì)干細胞, 而且脫落乳牙干細胞更容易獲取且損傷最小, 另外研究人員也發(fā)現(xiàn)低溫冷凍保存脫落的乳牙比恒牙更具有可行性27。關于脫落乳牙干細胞在體內(nèi)的研究, Behnia等28將凍存5年的脫落乳牙干細胞移植到犬下頜骨缺損模型中, 發(fā)現(xiàn)其仍然具有增殖活力和促進成骨分化的能力, 并且無任何免疫排斥反應。Seo等29將脫落乳牙干細胞植入到裸鼠皮下, 能夠產(chǎn)生非板層骨和牙本質(zhì)樣結構。也有學者應用組織工程技術將脫落乳牙干細胞與三維聚乳酸羥基乙酸支架結合植入到小鼠下頜骨缺損模型中, 1個月后處死動物, 發(fā)現(xiàn)缺損處有新骨形成, 且實驗整個過程中小鼠無任何不良反應30, 這也就提示脫落乳牙干細胞在口腔骨組織中具

17、有很大的應用前景。根尖乳頭間充質(zhì)干細胞來源于牙根尖乳頭, 它的成骨分化能力要弱于牙髓間充質(zhì)干細胞31。與骨髓間充質(zhì)干細胞相比, 盡管牙髓間充質(zhì)干細胞高表達干性標志物OCT4, 但是骨髓間充質(zhì)干細胞具有更強的成骨能力32。而且, 與牙髓間充質(zhì)干細胞相比, 骨髓間充質(zhì)干細胞和滑膜干細胞的堿性磷酸酶活性和骨再生能力更強33。此外, 骨髓間充質(zhì)干細胞釋放的可溶性生長因子在誘導人牙髓細胞成骨分化方面非常有效34。雖然外源性骨髓間充質(zhì)干細胞更適合骨再生, 但其也意味著相對侵襲性較強, 對患者存在潛在風險35。口腔骨組織再生修復與局部微環(huán)境有關, 口腔局部微環(huán)境能夠影響干細胞的增殖活性和成骨分化潛能。體外研

18、究結果表明骨髓間充質(zhì)干細胞和牙髓間充質(zhì)干細胞在局部p H值較低時成骨能力和再生能力下降36。牙周病是導致牙齒缺失和牙槽骨缺損的一個重要原因, 這類患者的口腔干細胞數(shù)量減少。另外, 由于局部炎癥, 這些細胞的再生能力也較低。Han等37將重組人IGFBP5蛋白轉入到牙周韌帶干細胞 (periodontal ligament stem cells, PDLSCs) 中, 結果表明其增殖能力增強, 而且在體內(nèi)成骨分化能力也增強。影響口腔干細胞成骨分化的主要因素是促炎微環(huán)境, 實驗表明骨髓間充質(zhì)干細胞在體外條件下具有更好的耐受性38。將骨髓間充質(zhì)干細胞和牙周韌帶干細胞在富含腫瘤壞死因子α的

19、培養(yǎng)基中培養(yǎng)14 d, 牙周韌帶干細胞的Runx2基因表達水平降低, 堿性磷酸酶活性下降, 而骨髓間充質(zhì)干細胞的相應成骨蛋白表達要高于牙周韌帶干細胞39。成人口腔中革蘭陰性菌分泌的脂多糖是通過與Toll樣受體4的結合, 而激活NF-κB通路, 從而下調(diào)牙周韌帶干細胞的成骨分化能力, 然而骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化能力并未受到影響40。為了提高口腔干細胞的骨再生能力, Jin等41將下頜骨骨髓間充質(zhì)干細胞和牙周韌帶細胞體外共培養(yǎng), 發(fā)現(xiàn)下頜骨來源的骨髓間充質(zhì)干細胞能夠增強牙周韌帶細胞的成骨能力。將牙周韌帶細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞共同復合于海藻酸鈣水凝膠中, 研究發(fā)現(xiàn)這2種干細胞在成骨分

20、化方面具有相輔相成的效果42。Zorin等43報道了牙齦源性間充質(zhì)干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞具有相同程度的成骨分化能力。盡管牙齦源性間充質(zhì)干細胞的成骨分化能力僅在少數(shù)研究中得到評估, 但有研究表明其能夠分泌大量牙釉質(zhì)基質(zhì)衍生物, 這將有助于促進牙齦源性間充質(zhì)干細胞成骨分化7。另外將牙周韌帶細胞與脂肪細胞來源的誘導性多能干細胞共培養(yǎng), 可增強誘導性多能干細胞中成骨標志物 (RUNX2、ALP、PPARγ2、Sox9) 的表達44。牙槽骨骨髓源性間充質(zhì)干細胞可能是侵襲性較低的骨髓間充質(zhì)干細胞, 在小鼠體內(nèi)研究表明其成骨分化能力較強45。Cai等46報道了將干細胞在體外定向分化以后再植入骨

21、缺損處, 其修復效果不如干細胞直接移入骨缺損。不同的細胞在不同的微環(huán)境下具有不同的功能, 而且在炎癥條件下有不同的機制控制其功能的變化, 抑制Wnt信號通路可促進牙周韌帶細胞的成骨分化, 而骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨功能則會降低38。目前間充質(zhì)干細胞在骨損傷修復中的應用很多, 但還缺乏統(tǒng)一的標準, 干細胞在臨床骨缺損修復的應用中還面臨著安全性、有效性、可控性等問題需要解決。2.1.3、 誘導性多能干細胞在一個成年生物體中, 分化細胞的可用性和數(shù)量都大于干細胞, 因此誘導性多能干細胞為組織再生提供了巨大的潛力。Choi等47利用病毒將4個轉錄因子 (OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC) 轉

22、入到牙齦組織成纖維細胞中, 體外使其重新編程為多能干細胞, 然后將多能干細胞在成骨培養(yǎng)基中進行培養(yǎng), 28 d后發(fā)現(xiàn)有骨細胞的形成。Wang等48將誘導性多能干細胞復合水凝膠在體外培養(yǎng), 結果顯示誘導性多能干細胞展現(xiàn)出了與人臍帶間充質(zhì)干細胞相類似的成骨能力。Yin等49體內(nèi)實驗結果表明, 在生長/分化因子5 (GDF5) 的作用下, 來自牙齦組織的誘導性多能干細胞比骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化能力更強。骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、骨形態(tài)發(fā)生蛋白7、轉化生長因子β和成纖維細胞生長因子等均能促進誘導性多能干細胞成骨分化50。利用誘導性多能干細胞修復口腔骨缺損 (主要是牙槽骨) 的研究已經(jīng)有很多, Du

23、an等51體外實驗結果表明, 釉質(zhì)基質(zhì)衍生物能夠促進誘導性多能干細胞Runx2和OSX的基因表達, 這也就提示釉質(zhì)基質(zhì)衍生物與誘導性多能干細胞的聯(lián)合使用可以為口腔骨組織損傷修復提供一種新方法。Chien等52將骨形態(tài)發(fā)生蛋白6轉入大鼠成纖維細胞中, 將構建的誘導性多能干細胞復合水凝膠移植到大鼠上頜骨磨牙缺損處, 6周后發(fā)現(xiàn)缺損得到修復。Jamal等53報道了轉染骨形態(tài)發(fā)生蛋白6的誘導性多能干細胞能夠減少炎癥反應并刺激上頜磨牙骨缺損的再生。Hynes等54將誘導性多能干細胞應用于牙周炎小鼠, 研究發(fā)現(xiàn)誘導性多能干細胞可以減少炎癥反應引起的骨質(zhì)流失。成體細胞逆轉為具有干細胞功能的能力各不相同, 這

24、主要取決于誘導性多能干細胞的自我更新能力。例如, 牙齦成纖維細胞在培養(yǎng)中能夠進行多達50次傳代, 而皮膚成纖維細胞只能進行幾次傳代, 這使得牙齦成纖維細胞成為成體細胞重新編程的良好種子細胞選擇55。新生骨組織的血管化很重要, 研究表明將磷酸鈣支架與3種細胞 (周細胞、血管內(nèi)皮細胞、誘導性多能干細胞) 一起植入比單獨使用其中1種或2種細胞更能有效促進骨再生56。Chen等57研究發(fā)現(xiàn)將誘導性多能干細胞與人內(nèi)皮細胞在磷酸鈣支架上共培養(yǎng)時, 其新生骨和血管再生能力與骨髓間充質(zhì)干細胞類似。microRNAs (miRNAs) 是目前癌癥診斷和治療中廣泛探索的非編碼小序列, 能夠調(diào)控基因的多樣性58。F

25、arhang等59利用CRISPR/Cas9靶向白細胞介素1受體1來改變白細胞介素1信號通路, 從而設計出抗炎作用的誘導性多能干細胞。腺病毒介導的基因治療增強了自體骨髓間充質(zhì)干細胞中骨形態(tài)發(fā)生蛋白2和Pluronic F127 (PF127) 基因的表達, 成功地實現(xiàn)了包括牙槽骨在內(nèi)的牙周組織的再生60。以下將對不同類型干細胞的特征總結于表161,62,63,64,65,66,67,68。2.2、 干細胞的成骨潛能及其與病理的關系考慮到干細胞在臨床中應用時, 最主要的擔憂是致癌風險69。目前對于這方面的研究還存在一定的分歧, 有些研究者發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞對惡性腫瘤的形成具有抑制作用, 而另一些研

26、究則強調(diào)間充質(zhì)干細胞對腫瘤的形成有促進作用70。此外, 誘導性多能干細胞通常被認為是一種危險;的干細胞, 因為它們的基因組不穩(wěn)定, 可能會發(fā)生惡性轉化71。最近的一項研究表明, 來自正常牙齦組織的間充質(zhì)干細胞能分泌可溶性因子, 其可以促進促凋亡基因p-JNK、cleaved PARP、cleaved caspase-3、Bax過表達, 并下調(diào)抑凋亡基因p-ERK1/2、Bcl-2、CDK4、cyclin D1、PCNA、survivin的表達, 從而可以抑制口腔癌的發(fā)展72。Katagiri等73報道了間充質(zhì)干細胞首次應用于人牙槽骨的修復, 并無局部或全身不良反應的發(fā)生, 且能夠促進骨再生。就

27、目前來看, 在使用間充質(zhì)干細胞的臨床試驗研究中尚未發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的發(fā)生。表1 用于再生醫(yī)學的不同類型干細胞的特征表注:+:低;+:中;+:高。糖尿病是牙周病的主要危險因素, 牙周韌帶干細胞在牙周組織再生中起著重要作用, Kato等74用人牙周韌帶干細胞和高糖培養(yǎng)基體外模擬糖尿病微環(huán)境, 探討高血糖對牙周組織再生的影響, 結果發(fā)現(xiàn)高糖培養(yǎng)基抑制了牙周韌帶干細胞向成骨細胞的增殖和分化。Yan等75發(fā)現(xiàn)高糖抑制牙髓干細胞的增殖分化以及成骨能力。雖然干細胞的成骨能力受機體局部微環(huán)境的影響, 但是研究發(fā)現(xiàn)牙髓干細胞和牙齦源性間充質(zhì)干細胞在炎癥組織中增殖率更高, 細胞骨架標志物profilin-1、cofi

28、lin-1、vinculin和熱休克蛋白 (HSP90和HSPA9) 表達水平也要高于健康組織中的間充質(zhì)干細胞76。另外, 間充質(zhì)干細胞暴露于富含促炎因子環(huán)境時, 骨鈣素、Runx2、血管內(nèi)皮生長因子和血管生成素也會上調(diào)77。Liu等38體外實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子α能夠通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路來抑制牙周韌帶干細胞的成骨分化, 且這種抑制程度超過骨髓間充質(zhì)干細胞, 這主要是因為炎癥條件下DKK-1可阻斷典型的Wnt通路, 重建牙周韌帶干細胞成骨分化, 而Wnt3a激活可促進骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化。Yamawaki等78發(fā)現(xiàn)堿性磷酸酶的活性隨著葡萄糖濃度的升高而降低, 另外高葡萄糖濃度情

29、況下增加了骨組織的形成, 但礦化組織的質(zhì)量下降, 且組織結構紊亂。牙齦卟啉單胞菌 (P.gingivalis, P.g) 脂多糖誘導促炎癥細胞因子產(chǎn)生, 如白細胞介素1、白細胞介素6和白細胞介素8, 進而導致牙周組織破壞, 另外脂多糖能夠促進牙周韌帶干細胞的增殖, 抑制牙周韌帶干細胞的堿性磷酸酶活性、COL1A1、骨鈣素的產(chǎn)生及礦化, 但是不影響細胞表面干細胞標記79,80。不同干細胞的成骨分化能力在不同的病理狀態(tài)不盡相同, 不同病理狀態(tài)對干細胞成骨潛能的影響, 見表2, 圖338,74,75,78,79,80,81。3 、總結Conclusions目前, 組織工程在再生醫(yī)學領域具有巨大的發(fā)展

30、潛力, 為應用干細胞治療骨相關疾病提供了重要基礎, 但是對于干細胞的選擇還沒有標準化, 間充質(zhì)干細胞移植修復骨缺損擁有廣泛的應用前景, 從倫理道德角度來看, 胚胎干細胞似乎不適合作為種子細胞應用到組織工程;從客觀的角度來看, 由于誘導多能干細胞收獲方法的最小侵入性和較高的可用性, 對于口腔骨再生而言, 似乎是較合適的細胞類型, 然而, 誘導多功能干細胞的免疫原性以及致瘤性在一定程度上限制了其在臨床上的應用;從再生能力、收集方法以及儲存潛能方面來看, 脫落乳牙源性干細胞可能是一個較為理想的種子細胞選擇。但是鑒于不同來源的干細胞其分化能力不同, 在進行種子細胞選擇時, 研究人員和臨床醫(yī)生應仔細權衡

31、不同干細胞的有效性和收集方法的可用性以及侵襲性, 同時還要考慮到所使用條件以及病理的影響。表2 不同病理狀態(tài)對干細胞成骨潛能的影響圖3 病理狀態(tài)下對骨組織再生的影響參考文獻1Intini G, Katsuragi Y, Kirkwood KL, et al.Alveolar bone loss:mechanisms, potential therapeutic targets, and interventions.Adv Dent Res.2014;26 (1) :38-46.2 Sakkas A, Wilde F, Heufelder M, et al.Autogenous bone gra

32、fts in oral implantology-is it still agold standard?A consecutive review of 279patients with 456 clinical procedures.Int J Implant Dent.2017;3 (1) :23.3Sheikh Z, Hamdan N, Ikeda Y, et al.Natural graft tissues and synthetic biomaterials for periodontal and alveolar bone reconstructive applications:a

33、review.Biomater Res.2017;21:9.4Zhang Z.Bone regeneration by stem cell and tissue engineering in oral and maxillofacial region.Front Med.2011;5 (4) :401-413.5 Euler de Souza Lucena E, Guzen FP, Lopes de Paiva Cavalcanti JR, et al.Experimental considerations concerning the use of stem cells and tissue

34、 engineering for facial nerve regeneration:a systematic review.J Oral Maxillofac Surg.2014;72 (5) :1001-1012.6Liu X, Wang P, Chen W, et al.Human embryonic stem cells and macroporous calcium phosphate construct for bone regeneration in cranial defects in rats.Acta Biomater.2014;10 (10) :4484-4493.7 W

35、u SM, Chiu HC, Chin YT, et al.Effects of enamel matrix derivative on the proliferation and osteogenic differentiation of human gingival mesenchymal stem cells.Stem Cell Res Ther.2014;5 (2) :52.8 Hodgkinson CP, Gomez JA, Mirotsou M, et al.Genetic engineering of mesenchymal stem cells and its applicat

36、ion in human disease therapy.Hum Gene Ther.2010;21 (11) :1513-1526.9Oldershaw RA.Cell sources for the regeneration of articular cartilage:the past, the horizon and the future.Int J Exp Pathol.2012;93 (6) :389-400.10Fahy N, de Vries-van Melle ML, Lehmann J, et al.Human osteoarthritic synovium impacts

37、 chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells via macrophage polarisation state.Osteoarthritis Cartilage.2014;22 (8) :1167-1175.11朱瑜琪, 王金榮, 王智耀.間充質(zhì)干細胞促進關節(jié)軟骨的修復與再生J.中國組織工程研究, 2015, 19 (50) :8195-8200.12 Buduru SD, Gulei D, Zimta AA, et al.The Potential of Different Origin Stem Cells in Modu

38、lating Oral Bone Regeneration Processes.Cells.2019;8 (1) :E29.13 Andrews PW, Benvenisty N, McKay R, et al.The International Stem Cell Initiative:toward benchmarks for human embryonic stem cell research.Nat Biotechnol.2005;23 (7) :795-797.14 Nishikawa S, Jakt LM, Era T.Embryonic stem-cell culture as

39、a tool for developmental cell biology.Nat Rev Mol Cell Biol.2007;8 (6) :502-507.15 Bielby RC, Boccaccini AR, Polak JM, et al.In vitro differentiation and in vivo mineralization of osteogenic cells derived from human embryonic stem cells.Tissue Eng.2004;10 (9-10) :1518-1525.16 Aldahmash A, Atteya M,

40、Elsafadi M, et al.Teratoma formation in immunocompetent mice after syngeneic and allogeneic implantation of germline capable mouse embryonic stem cells.Asian Pac J Cancer Prev.2013;14 (10) :5705-5711.17 Hwang NS, Varghese S, Lee HJ, et al.Biomaterials directed in vivo osteogenic differentiation of m

41、esenchymal cells derived from human embryonic stem cells.Tissue Eng Part A.2013;19 (15-16) :1723-1732.18 Kuznetsov SA, Cherman N, Robey PG.In vivo bone formation by progeny of human embryonic stem cells.Stem Cells Dev.2011;20 (2) :269-287.19 Both SK, van Apeldoorn AA, Jukes JM, et al.Differential bo

42、ne-forming capacity of osteogenic cells from either embryonic stem cells or bone marrow-derived mesenchymal stem cells.J Tissue Eng Regen Med.2011;5 (3) :180-190.20江中明, 季佩紅, 劉軍, 等.小鼠胚胎干細胞向成牙本質(zhì)樣細胞的誘導分化J.上海口腔醫(yī)學.2006, 15 (6) :653-656.21Zhang Y, Li Y, Shi R, et al.Generation of tooth-periodontium comple

43、x structures using high-odontogenic potential dental epithelium derived from mouse embryonic stem cells.Stem Cell Res Ther.2017;8 (1) :141.22Tomioka I, Honma Y, Sasada H, et al.In Vitro Induction of Potential Primordial Germ Cells from Mouse Embryonic Stem Cells by Culture with Undifferentiated Gona

44、dal Cells.J Mamm Ova Res.2008, 25 (1) :37-43.23 English K, Wood KJ.Immunogenicity of embryonic stem cell-derived progenitors after transplantation.Curr Opin Organ Transplant.2011;16 (1) :90-95.24 Estrela C, Alencar AH, Kitten GT, et al.Mesenchymal stem cells in the dental tissues:perspectives for ti

45、ssue regeneration.Braz Dent J.2011;22 (2) :91-98.25Yang H, Gao LN, An Y, et al.Comparison of mesenchymal stem cells derived from gingival tissue and periodontal ligament in different incubation conditions.Biomaterials.2013;34 (29) :7033-7047.26 Miura M, Gronthos S, Zhao M, et al.SHED:stem cells from

46、 human exfoliated deciduous teeth.Proc Natl Acad Sci U S A.2003;100 (10) :5807-5812.27Lindemann D, Werle SB, Steffens D, et al.Effects of cryopreservation on the characteristics of dental pulp stem cells of intact deciduous teeth.Arch Oral Biol.2014;59 (9) :970-976.28 Behnia A, Haghighat A, Talebi A

47、, et al.Transplantation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth for bone regeneration in the dog mandibular defect.World J Stem Cells.2014;6 (4) :505-510.29Seo BM, Sonoyama W, Yamaza T, et al.SHED repair critical-size calvarial defects in mice.Oral Dis.2008;14 (5) :428-434.30Vakhrushev I

48、V, Antonov EN, Popova AV, et al.Design of tissue engineering implants for bone tissue regeneration of the basis of new generation polylactoglycolide scaffolds and multipotent mesenchymal stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED cells) .Bull Exp Biol Med.2012;153 (1) :143-147.31 Cantore

49、 S, Ballini A, De Vito D, et al.Characterization of human apical papilla-derived stem cells.J Biol Regul Homeost Agents.2017;31 (4) :901-910.32 Aghajani F, Hooshmand T, Khanmohammadi M, et al.Comparative Immunophenotypic Characteristics, Proliferative Features, and Osteogenic Differentiation of Stem

50、 Cells Isolated from Human Permanent and Deciduous Teeth with Bone Marrow.Mol Biotechnol.2016;58 (6) :415-427.33 Isobe Y, Koyama N, Nakao K, et al.Comparison of human mesenchymal stem cells derived from bone marrow, synovial fluid, adult dental pulp, and exfoliated deciduous tooth pulp.Int J Oral Ma

51、xillofac Surg.2016;45 (1) :124-131.34 Al-Sharabi N, Xue Y, Fujio M, et al.Bone marrow stromal cell paracrine factors direct osteo/odontogenic differentiation of dental pulp cells.Tissue Eng Part A.2014;20 (21-22) :3063-3072.35 Ichiyanagi T, Anabuki K, Nishijima Y, et al.Isolation of mesenchymal stem

52、 cells from bone marrow wastes of spinal fusion procedure (TLIF) for low back pain patients and preparation of bone dusts for transplantable autologous bone graft with a serum glue.Biosci Trends.2010;4 (3) :110-118.36Massa A, Perut F, Chano T, et al.The effect of extracellular acidosis on the behavi

53、our of mesenchymal stem cells in vitro.Eur Cell Mater.2017;33:252-267.37Han N, Zhang F, Li G, et al.Local application of IGFBP5 protein enhanced periodontal tissue regeneration via increasing the migration, cell proliferation and osteo/dentinogenic differentiation of mesenchymal stem cells in an inf

54、lammatory niche.Stem Cell Res Ther.2017;8 (1) :210.38 Liu W, Konermann A, Guo T, et al.Canonical Wnt signaling differently modulates osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells derived from bone marrow and from periodontal ligament under inflammatory conditions.Biochim Biophys Acta.2014;184

55、0 (3) :1125-1134.39Zhang J, Li ZG, Si YM, et al.The difference on the osteogenic differentiation between periodontal ligament stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells under inflammatory microenviroments.Differentiation.2014;88 (4-5) :97-105.40 Li C, Li B, Dong Z, et al.Lipopolysaccharide di

56、fferentially affects the osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells through Toll-like receptor 4mediated nuclear factorκB pathway.Stem Cell Res Ther.2014;5 (3) :67.41 Jin Z, Feng Y, Liu H.Conditioned media from differentiating craniofac

57、ial bone marrow stromal cells influence mineralization and proliferation in periodontal ligament stem cells.Hum Cell.2016;29 (4) :162-175.42 Chen L, Shen R, Komasa S, et al.Drug-Loadable Calcium Alginate Hydrogel System for Use in Oral Bone Tissue Repair.Int J Mol Sci.2017;18 (5) :E989.43Zorin VL, Komlev VS, Zorina AI, et al.Octacalcium phosphate ceramics com