細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)四巨噬細(xì)胞吞噬觀察

1、實(shí)驗(yàn)四、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞,噬現(xiàn)象觀察,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞,活動(dòng)的觀察,加深理解細(xì)胞吞噬作用的過,程及意義,實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞吞噬作用原是單細(xì)胞動(dòng)物攝取營養(yǎng)的方式之一,也,具有原始的防御作用。隨著動(dòng)物進(jìn)化，在高等動(dòng)物中,主要有兩類細(xì)胞具有吞噬作用，一是巨噬細(xì)胞，二是,嗜中性粒細(xì)胞。他們的吞噬作用成為動(dòng)物體非特異性,免疫的重要組成部分,巨噬細(xì)胞廣泛分布于全身各處。當(dāng)病原微生物或其他,異物進(jìn)入機(jī)體時(shí)，能招引巨噬細(xì)胞向異物所在處移動(dòng),伸出偽足將之包圍并內(nèi)吞入細(xì)胞形成吞噬體，繼而和,溶酶體融合形成吞噬溶酶體，在其中將異物殺傷消除,吞噬過程,大致分為四個(gè)階段,識(shí)別結(jié)合,部分吞入,形

2、成內(nèi)吞體（或稱吞噬體,形成吞噬溶酶體,吞噬過程示意圖,吞噬現(xiàn)象,試驗(yàn)材料、試劑及儀器用品,材料,1,6,8,周齡健康雄性小鼠,2,5,雞紅細(xì)胞,采血,1ml,放入,4ml,阿氏液中，用,PBS,洗,3,次，調(diào)節(jié)成,5% V/V,的混懸液,試劑,1,4,淀粉肉湯,2,D,Hanks,液,3,阿氏,Alsver,血液保存液,葡萄糖,2.05,克,檸檬酸鈉,0.89,克,檸檬酸,0.05,克,氯化鈉,0.42,克,酚紅,0.01,克,蒸餾水加至,100ml,過濾或高壓蒸汽消毒。保存,于,4C,4,0.85,生理鹽水,5,0.01M,PH7.2,的,PBS,6,甲醇,7,吉姆薩染液,儀器及用品,1,普

3、通離心機(jī),2,恒溫箱,3,注射器,4,10ml,玻璃離心管及,1.5ml,塑料離心管,5,載波片,6,自制濕盒,實(shí)驗(yàn)操作,1,巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)前,1,天，每只小鼠腹腔,注射,1ml 4,淀粉肉湯,2,體內(nèi)吞噬。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，先給每只小鼠腹腔注,射,2ml 1,雞紅細(xì)胞生理鹽水懸液，輕揉腹部,使其在腹腔分布均勻。吞噬,45min,3,處死小鼠，吸取巨噬細(xì)胞。脫頸處死小鼠,隨即向腹腔注入,1ml,生理鹽水，揉勻。然后剪開,腹部皮膚，暴露腹膜，用帶針頭的注射器插進(jìn),腹腔吸取腹腔液,4,制片。,1,直接觀察：滴,1,滴腹腔液，蓋上,蓋玻片直接觀察,2,染色觀察,加,0.2ml-0.3ml,腹腔液于蓋玻片上，放濕,盒置,37,恒溫培養(yǎng)箱,30min,使巨噬細(xì)胞粘,附,用帶針頭的注射器吸取,0.01M,PH7.2,的,PBS 5ml,沖洗掉未粘附的細(xì)胞及腹腔液,將玻片浸入甲醇中固定,3,5min,涼干,Giemsa,染色,30min,流水沖去浮液，涼干觀察,結(jié)果觀察,用,40,倍鏡或油鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅,細(xì)胞情況。畫出不同吞噬階