化學(xué)發(fā)光免疫分析PPT課件

1、1,化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)與臨床應(yīng)用,2,化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)起源,Halman在1977年基于放射免疫分析的基本原理，將酶的化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)結(jié)合起來，建立了化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。(Chemiluminescenceimmunoas,3,4,什么是化學(xué)發(fā)光,人體內(nèi)的某些化合物分子被氧化后，可以形成激發(fā)態(tài)并返回基態(tài)同時(shí)發(fā)射光子，這就是化學(xué)發(fā)光。 化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)是利用發(fā)光信號(hào)測量儀器測量光量子的產(chǎn)額。該技術(shù)可以有效的消除樣本的本底干擾，消除樣本對光信號(hào)的散射，從而獲得更高的檢測靈敏度,5,化學(xué)發(fā)光免疫分析原理,6,免疫反應(yīng)系統(tǒng),將發(fā)光物質(zhì)（在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體）直接標(biāo)記在抗原（化學(xué)

2、發(fā)光免疫分析）或標(biāo)記抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析）上，或用酶作用于發(fā)光底物,7,化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng),利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子（hv)，利用發(fā)光信號(hào)測量儀測量光量子的產(chǎn)額，就可測知體內(nèi)某些微量生物活性物質(zhì)的含量,8,化學(xué)發(fā)光免疫分析類型,根據(jù)標(biāo)記物的不同分為三大類： 1、化學(xué)發(fā)光免疫分析 2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析,9,化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)： 優(yōu)點(diǎn)：安全，靈敏度高（10-15g/ml），穩(wěn)定性好，重復(fù)性較佳，結(jié)果漂移小，線性較好，準(zhǔn)確度高，操作方便，試劑貨架期長（半年1年），浪費(fèi)少，出結(jié)果快速。

3、 缺點(diǎn)：儀器價(jià)格昂貴，試劑成本較高，目前有些檢測項(xiàng)目不能用化學(xué)發(fā)光檢測，待開發(fā),10,化學(xué)發(fā)光技術(shù)與其他免疫分析技術(shù)比較： 免疫診斷技術(shù)在經(jīng)歷了放射免疫法、酶標(biāo)免疫法、免疫熒光法等方法后，發(fā)展到今天，化學(xué)發(fā)光技術(shù)的出現(xiàn)并臨床應(yīng)用，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫診斷技術(shù)的發(fā)展奠定了一個(gè)劃時(shí)代的里程碑,11,12,2、 酶標(biāo)記免疫分析缺陷： 由來已久，但是始終沒有能夠替代放射免疫。這種依靠比色法或偏振光法的檢測技術(shù)所受的干擾因素太多，甚至試管的形狀的變化都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，靈敏性、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較差（可測靈敏度為10-8g/ml,13,3、 熒光免疫分析技術(shù)缺陷： 利用特定波長的入射光將分子轉(zhuǎn)換到激發(fā)態(tài)，然后分子

4、回到基態(tài)并發(fā)射光子。但有以下干擾因素：1） 血清樣本中存在內(nèi)源性熒光帶，會(huì)增強(qiáng)非特異性本底熒光；2） 樣本對熒光光信號(hào)的散射也干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,14,化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)臨床應(yīng)用： 1、甲狀腺功能類： T3 、T4、THS、FT3、 FT4、rT3、TG、T-PO 新生兒篩查：T4 sTSH 2、性腺激素類： HCG、-HCG、FSH、 LH、E2、E3、PRL、P、 T、GH等 3、腫瘤檢測： CEA、AFP、Fe、PSA、 CA125、CA153、CA199 CA50、CA211、CA724,15,4、心血管：CK-MB、BNP、Tn-I、 Myoglobin 5、貧血類：鐵蛋白、Vite B

5、12、葉酸 6、藥物濃度：地高辛、洋地黃、托普霉素 可馬西平、苯巴比妥、等 7、糖尿病及代謝：胰島素、C-肽、PTH 8、過敏源類：過敏源篩選、總過敏源 9、傳染病：肝炎系列、風(fēng)疹、弓形體 10、其他：皮質(zhì)醇、還有很多待開發(fā)項(xiàng)目,16,心血管系統(tǒng),如何能,更快,更準(zhǔn)確,更全面的,診斷AMI,17,時(shí)心電圖并不能典型歸類,診斷急性心肌梗塞有一定難度,一半有不穩(wěn)定胸口窒息痛的病人，入 院時(shí)心電圖并不典型,病人再發(fā)梗塞診斷困難,導(dǎo)致不能及時(shí)診斷AMI,延誤及時(shí)治療、護(hù)理,臨床需要,盡早準(zhǔn)確診斷AMI方法,18,肌肉組織,心肌,心肌細(xì)胞特異性標(biāo)志,肌鈣蛋白,I,C,T,肌鈣蛋白 I,釋放入血,心肌壞死

6、,氨基酸順序40差異,19,心肌細(xì)胞,肌紅蛋白,肌酸激酶MB,心肌壞死,釋放入血,含量大,血液濃度 明顯升高,CK-MB,20,6 5 4 3 2 1,0 4 8 12 16 20 24 48 72 96 h,肌紅蛋白,CK-MB,肌鈣蛋白,濃度,急性心肌梗塞后各項(xiàng)指標(biāo)變化,21,肌紅蛋白,升高,高峰,回落,肌酸激酶MB,肌鈣蛋白I,1-2 h,4-8h,6-8h,5-12h,10-24h,12-24h,18-30h,48-72h,5-7d,22,肌紅蛋白的臨床意義,早期診斷,特異性低,靈敏度高,急性心梗后最早(1-2h)出現(xiàn)的標(biāo)記,最早能排除非急性心梗,陰性預(yù)測率為 99 ,體內(nèi)周期短，對再

7、發(fā)梗塞特別靈敏,肌紅蛋白測定能有效分辨非急性心梗，使急性心梗病人能盡早得到治療,有效觀察溶栓療效,23,肌鈣蛋白I的臨床意義,診斷急性心肌梗塞特異性 98 ,特異性強(qiáng)、確診率高,靈敏度低,急性心梗發(fā)病后6 h才出現(xiàn)，應(yīng)與肌紅蛋白一同使用,肌鈣蛋白I升高即可確診為急性心肌梗塞，及時(shí)得到治療,體內(nèi)周期長，對外地病人延誤求診亦能診斷,對極輕微的心肌創(chuàng)傷都能檢出,24,胸痛,ECG,發(fā)病,肌鈣蛋白I,肌紅蛋白 CK-MB,急性心梗,8h,8h,隨訪,再發(fā)心梗,25,肌紅蛋白,注意事項(xiàng),肌酸激酶MB,骨骼肌損傷肌紅蛋白升高,腎功能衰竭 CK-MB 增高,26,甲狀腺功能系列診斷,T3 T4 TSH TS

8、H-3,FrT3 FrT4 Tup T-poAb,27,診斷各種甲亢必須具備的儀器設(shè)備: 1、甲狀腺131-I攝取率測定儀 2、各種放射免疫測定儀或各種全自動(dòng)發(fā) 光免疫測定儀 3、甲狀腺功能顯像設(shè)備：（SPECT、 照相儀,28,甲亢正確診斷（特別是首診） 1、臨床癥狀、體征。 2、實(shí)驗(yàn)室檢查：T3、T4、FT3、FT4、sTSH 或uTSH 、TMAb、TGAb、TPOAb、TRAb 3、131-I攝取試驗(yàn)是必查項(xiàng)目 只靠臨床癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查無法鑒別：碘甲亢、亞甲炎甲亢、亞急性淋巴細(xì)胞性甲炎甲亢、慢甲炎甲亢和醫(yī)源性甲亢。治療和處理是完全不同的,29,30,目前臨床上靠一張甲狀腺功能檢查

9、單（T3、FT3、T4、FT4增高和sTSH降低）診斷甲亢是不正確的，化驗(yàn)單只證明患者血中甲狀腺激素增多（甲狀腺毒癥），而碘甲亢、亞甲炎甲亢、亞急性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎甲亢、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、醫(yī)源性甲亢等靠臨床癥狀、體征及化驗(yàn)檢查是無法區(qū)分的，因此，首診病人必須做131-I攝取試驗(yàn)才不會(huì)造成誤診,31,32,33,甲狀腺炎掃描圖,34,正常甲狀腺掃描圖,治療1個(gè)半月后,35,治療后檢測結(jié)果顯示各項(xiàng)指標(biāo)正常,36,治療后恢復(fù)正常,37,38,39,40,41,42,43,臨床常見的甲狀腺疾病種類： 1、甲亢：大概分為13種，三大類。 2、甲減：分為原發(fā)性、繼發(fā)性。 3、甲狀腺炎：分5種。 4

10、、甲狀腺腫瘤：良性、惡性。 5、甲狀腺腫：青春期、結(jié)節(jié)性甲腫。 6、TH 不敏感綜合征：三大類,44,甲狀腺激素不敏感綜合癥,一、全身型：1、甲減型 T3、T4、TSH 2、代償型 T3、T4、TSH 二、垂體型：甲亢癥狀明顯：T3、T4、TSH 三、外周選擇型： T3、T4、TSH （正常） 臨床甲減癥狀,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,總之，化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)（Chemiluminesent Immunoassay,CLIA）是繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）和時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興高度敏感的微量測定技術(shù),64,其具備以下特點(diǎn)： 高度敏感，極限達(dá)10-17g/mL，遠(yuǎn)高于 RIA、EIA、FIA。 特異性強(qiáng)，重復(fù)性好C.V.5。測定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)。 試劑穩(wěn)定性好，無污染有效期612月。操作簡單，自動(dòng)化、半自動(dòng)化程度高,65,目前