實驗二-普通顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)觀察

1、實驗二 普通光學(xué)顯微鏡的使用 和細(xì)菌形態(tài)觀察,一 實驗?zāi)康?1、學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法。 2、學(xué)習(xí)普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能和使用方法。 3、了解細(xì)菌的三種基本形態(tài),二、基本原理,微生物是個體微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼無法看到的微小生命體。因此，我們要借助顯微鏡來進(jìn)行觀察。顯微鏡的種類很多，但基本構(gòu)造可分為兩大部分 ：一是機(jī)械裝置，二是光學(xué)系統(tǒng) 1、機(jī)械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉(zhuǎn)移器、載物臺、移動器粗細(xì)調(diào)節(jié)器組成。 2光學(xué)系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光圈組成。,現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又稱為復(fù)式顯微鏡。它們由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。

2、,1.鏡座；2.載物臺；3.鏡臂；4.棱鏡套；5.鏡筒；6.接目鏡；7.轉(zhuǎn)換器；8.接物鏡；9.聚光器；10.虹彩光圈；11.光圈固定器；12.聚光器升降螺旋；13.反光鏡；14.細(xì)調(diào)節(jié)器；15.粗調(diào)節(jié)器；16.標(biāo)本夾,顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率 1.放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2.顯微鏡的分辨率 是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為： D=/2nsin(/2 ) 式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。 ：可見光的波長（平均0.55m) n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。 ：鏡口角（即入射角）。,油鏡使用的原理 1.香柏油的折射率與玻璃接近，提高了視野的

3、照明度。 2.提高了顯微鏡的 分辨率,三、實驗器材,1、菌種 金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和四聯(lián)球菌染色玻片標(biāo)本等。 2、溶液或試劑 香柏油、二甲苯 3、儀器或其他用具 顯微鏡、擦鏡紙。,顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項： 1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。 2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度 3.觀察標(biāo)本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。 4.觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。 5.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂

4、，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。 6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。,四、實驗步驟,1、觀察前的準(zhǔn)備 （1） 顯微鏡的安置 置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約34。鏡檢時姿勢要端正。 取、放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。 （2） 光源調(diào)節(jié) 安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視

5、野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。,（3） 根據(jù)使用者的個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當(dāng)調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。 （4） 聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)聚光器虹彩光圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些顯微鏡的聚光器只標(biāo)有最大數(shù)值孔徑，而沒有具體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時可在樣品聚焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略小于其邊緣。因為各物鏡的數(shù)值孔徑值不同，所以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應(yīng)該進(jìn)行這種調(diào)節(jié)。,在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需要改變光照強(qiáng)度，可通過升降聚光器或改變光

6、源的亮度來實現(xiàn)，原則上不應(yīng)再通過光圈的調(diào)節(jié)。當(dāng)然，有關(guān)虹彩光圈、聚光器高度和照明光源強(qiáng)度的使用原則也不是固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，有時也可根據(jù)不同的具體情況靈活運(yùn)用，不一定拘泥不變。,2、顯微觀察 在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達(dá)到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學(xué)者，進(jìn)行顯微觀察時應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因為低倍數(shù)物鏡視野相對大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)及確定檢查的位置。,（1） 低倍鏡觀察 將染色標(biāo)本玻片置于載物臺上，用標(biāo)本夾夾住，移動推進(jìn)器使觀察對象處在物鏡的正下方。下降10 物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使標(biāo)本在視野中初

7、步聚焦，再使用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進(jìn)器慢慢移動玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄觀察到的結(jié)果。 在任何時候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時，必須養(yǎng)成先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標(biāo)本，然后用目鏡觀察，慢慢調(diào)節(jié)物鏡離開標(biāo)本進(jìn)行準(zhǔn)焦的習(xí)慣，以免因一時的誤操作而損壞鏡頭及玻片。,（2） 高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進(jìn)器移動標(biāo)本仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置

8、進(jìn)行觀察時，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（parfocal）。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。,（3） 油鏡觀察 在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標(biāo)本相接。將聚光器升至最高位置并開足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過1.0，還應(yīng)在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達(dá)到最大的效能。調(diào)節(jié)照明使視野的

9、亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細(xì)調(diào)節(jié)器使其清晰準(zhǔn)焦為止。 有時按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下降還沒有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃而過的物像。遇此情況，應(yīng)重新操作。另外應(yīng)特別注意不要因在下降鏡頭時用力過猛，或聚焦時誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片。,3、顯微鏡用畢后的處理 （1）上升鏡筒，取下載玻片。 （2） 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。 切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。 （3）用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡，用稠布清潔顯微鏡的金屬部件。 （4） 將各部分還原，反光鏡垂直于鏡座，將物鏡轉(zhuǎn)成“ 八 ”字形，再向下旋。同時把聚光鏡降下，以免接物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危險。,4 細(xì)菌基本形態(tài)的觀察： 利用油鏡，結(jié)合細(xì)菌三型等染色片觀察細(xì)菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪圖。,金黃色葡萄球菌,基本形態(tài)的觀察,大腸