免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制

1、最新資料推薦免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制免疫組化是一項(xiàng)綜合性的操作技術(shù)，是病理診斷的主要輔助手段之一，其影響因素復(fù)雜，包括技術(shù)人員是否熟練掌握整個(gè)實(shí)驗(yàn)的操作程序，抗體的特異性， 檢測方法的敏感性，組織的固定，抗原的修復(fù)及修復(fù)液的PH 值等眾多因素。步驟較多，且環(huán)環(huán)相扣，加強(qiáng)質(zhì)量管理和可信性尤為重要?，F(xiàn)就我科近年來免疫組化染色和具體操作過程中進(jìn)行精細(xì)而有效的全程質(zhì)控，具體操作規(guī)程和質(zhì)控事項(xiàng)綜述如下：一、標(biāo)本的固定：標(biāo)本的及時(shí)固定是最重要的環(huán)節(jié)，也是不可逆的，我科要求手術(shù)室設(shè)立專人專管制度，普通標(biāo)本離體后要求手術(shù)室及時(shí)固定，特殊標(biāo)本離體后及時(shí)送我科當(dāng)天由取材醫(yī)師及時(shí)剖開固定，淋巴結(jié)切開固定，乳腺標(biāo)本

2、每隔一厘米切開固定，胃腸標(biāo)本剖開固定，首選 10% 的中性緩沖福爾馬林固定液固定，由于中性緩沖福爾馬林液滲透力強(qiáng)，組織收縮小，能夠使大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，提高免疫組織化學(xué)檢測的陽性率。固定液的量一般為組織塊體積的5-10 倍，小標(biāo)本固定時(shí)間為4-6 小時(shí)，大標(biāo)本固定時(shí)間為18-24 小時(shí)，固定后水洗10-20 分，利用蠟塊內(nèi)抗原的長期保存。二、脫水：我科在脫水程序中設(shè)置一個(gè)后固定步驟，彌1最新資料推薦補(bǔ)病理標(biāo)本取材時(shí)固定不良造成的組織形態(tài)缺陷和抗原定位不良現(xiàn)象。同時(shí)建立以處理組織標(biāo)本塊數(shù)2000 塊為標(biāo)準(zhǔn)的組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，保證脫水質(zhì)量是保證組織切片質(zhì)量的前題，這一點(diǎn)對免疫組化染色

3、尤為重要。三、切片、烤片、脫蠟：切片厚度3-4 個(gè)微米之間，淋巴結(jié)更薄些，切片完整，厚薄均勻，無皺褶和刀痕，烤片溫度 60 攝氏度溫箱烤片1-2 小時(shí)，暫不染色的切片放置4 攝氏度的冰箱，短時(shí)間保存，脫蠟必須干凈。四、選擇優(yōu)質(zhì)的抗體及檢測系統(tǒng)是優(yōu)秀染片質(zhì)量的保證，我科每月的組化切片為500 左右，一直是手工操作，嚴(yán)格的操作規(guī)程非常重要，每一步細(xì)化到人，我科一直沿用中杉金橋的工作液試劑盒，效果穩(wěn)定，參加多次省質(zhì)控及全國質(zhì)控都獲得合格證書。五、抗原修復(fù)：我科一直采用高壓修復(fù)，用大功率加熱至沸騰后，將功率調(diào)至中檔，再放入切片，加蓋，加減壓閥繼續(xù)加熱至冒氣并維持 2 分鐘后，撤火緩慢冷卻。高壓修復(fù)具有

4、壓力穩(wěn)定、受熱均勻，背景著色淺的優(yōu)點(diǎn)。對于核染色陽性的抗原用PH9.0 的 EDTA 修復(fù)液效果好，胞質(zhì)、胞膜染色陽性的，用PH8.0 的 EDTA 抗原修復(fù)液效果好。六、 DAB 顯色的穩(wěn)定性：我科用中杉金橋的DAB 顯色試劑盒穩(wěn)定，顯色效果好。在顯色時(shí)，一般陽性部分廣泛或陽性定位在胞質(zhì)的組織顯色非常迅速，1-3 分鐘即可見明顯2最新資料推薦棕色，應(yīng)及時(shí)終止顯色。 陽性部分稀少且定位在胞核的組織，需顯微鏡下觀察，時(shí)間不宜過長，以免造成背景染色。七、復(fù)染：為了襯托免疫組化的陽性染色，蘇木素顏色不宜太深， 1-2 分鐘，同時(shí)操作中使用了粘附載玻片，建議復(fù)染的蘇木素因勤于過濾，減少人為背景染色。八、在整個(gè)染色過程中切片始終保持濕潤，不能干片，滴加一抗時(shí)應(yīng)將切片上的水甩干，以免抗體被稀釋，滴加抗體時(shí)確保覆蓋全部組織，以免邊緣未覆蓋到抗體引起邊緣效應(yīng)，同時(shí)孵育盒要放平，以免抗體流至組織一端，造成假陰性或局部弱陽性結(jié)果。綜上所述，質(zhì)控工作總是發(fā)生在實(shí)驗(yàn)檢測前才能生效，如標(biāo)本制作前的固定及制作中的質(zhì)控流程和切片質(zhì)量對免疫組化的染色效果都是相互影響、相互依存的。在免疫組化操作過程中，有許多至關(guān)重要的步驟都是一環(huán)扣一環(huán)，每走一步都要進(jìn)行有效監(jiān)控，才能做出高質(zhì)量的切片。因此，要求操作人員有高度的責(zé)任心，嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，為病理診斷提供表達(dá)