微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-常用培養(yǎng)基的制備消毒與滅菌

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn),常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒,目的要求 培養(yǎng)基分類 消毒與滅菌 結(jié)果檢查,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解培養(yǎng)基的配制原理 2.掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟 培養(yǎng)基是人工配制的，適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代 謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì) 原則：目的明確 ;營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào);控制PH、滲透壓等條 件;經(jīng)濟(jì)節(jié)約 方法：生態(tài)模擬；查閱文獻(xiàn); 精心設(shè)計(jì); 試驗(yàn)比較 步驟：稱量、熔化、調(diào)PH、過(guò)濾、分裝、 加塞、包扎、滅菌、冷卻、無(wú)菌檢查,稱量,熔化,調(diào)pH值,分裝與加塞,包扎(1),包扎(2),滅菌,無(wú)菌檢查,培養(yǎng)基種類: 碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、水 一、按成份的不同劃分 天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基

2、 二、按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)劃分 固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基 三、按培養(yǎng)基用途劃分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基,一級(jí)種培養(yǎng)基:一級(jí)種又稱母種，其培養(yǎng)基一般用試管作為容器，所以又稱試管斜面培養(yǎng)基，這類培養(yǎng)基又常用于菌種分離提純，擴(kuò)大，轉(zhuǎn)管及菌種保存等。 二、三級(jí)種培養(yǎng)基:二、三級(jí)種培養(yǎng)基通常采用天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如秸稈、棉籽殼、蔗渣等農(nóng)作物廢物，加適量的無(wú)機(jī)鹽類等制成固體培養(yǎng)基。,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其配方如下： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂1520g，水1000mL，pH7.07.2(后調(diào)),高

3、氏1號(hào)培養(yǎng)基,高氏1號(hào)培養(yǎng)基是用于分離和培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。其配方如下： 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5g，F(xiàn)eSO47H2O 0.01g，瓊脂1520g，水1000mL，pH7.47.6。,查氏合成培養(yǎng)基,查氏合成培養(yǎng)基是用來(lái)分類和培養(yǎng)霉菌的培養(yǎng)基,其配方如下： NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g,瓊脂1520g, H2O 1000ml,pH自然,麥芽汁培養(yǎng)基,用來(lái)培養(yǎng)酵母菌,干麥芽粉加4倍水,在50-60保溫糖化

4、3-4小時(shí)，用碘液試驗(yàn)檢查至糖化完全為止,調(diào)整糖液濃度,煮沸后，過(guò)濾，調(diào)pH為6.0。,BCG-MSG培養(yǎng)基鑒定幾種常見(jiàn)的絲狀真菌,新鮮平皿培養(yǎng)基,擱置斜面,消毒與滅菌： 消毒：消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體 滅菌：殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體，芽胞和孢子。 方法： 物理的方法：加熱、過(guò)濾、輻射 化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。如重金屬離子，磺胺類藥物及抗生素等。,加熱法： 干熱法：火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌 1、火焰灼燒適用于接種環(huán)、接種針和金屬用具如鑷子等，試管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、熱空氣滅菌利用高溫干燥空氣（160170C）加熱滅菌12h，適用于玻璃器皿和培

5、養(yǎng)皿等。原理加熱使蛋白質(zhì)變性，與水的含量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事項(xiàng)： 1）培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能用此法； 2）溫度控制在180； 3）物品不能太擠； 4）溫度降至70時(shí)才開(kāi)箱門。,濕熱法 ： 原理：因?yàn)闈駸嶂芯w吸水，蛋白質(zhì)容易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的蒸氣有潛熱存在。所以效果比同溫度下干熱好。 高壓蒸汽滅菌法： 1、設(shè)備：高壓滅菌鍋 2、時(shí)間長(zhǎng)短根據(jù)滅菌物品的種類和數(shù)量不同有所變化。 3、適用于培養(yǎng)基、工作服、橡膠物品等的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。 4、注意事項(xiàng)： 1）冷空氣徹底排除；2）加水；3）壓力降為“0”時(shí)方可打開(kāi)。,在

6、使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒魵獾呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系見(jiàn)表2,常壓蒸汽滅菌： 對(duì)于不宜用高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基，含糖培養(yǎng)基等可采用此法。徹底滅菌則采用間歇滅菌方法。 煮沸滅菌法： 適用注射器和解剖器皿，時(shí)間1015min， 超高溫殺菌 135-150C和2-8s對(duì)牛乳和其它液態(tài)食品滅菌。 優(yōu)點(diǎn) ：保持食品價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)成分。,過(guò)濾除菌： 原理：介質(zhì)在有壓力時(shí)阻隔微生物。 適用范圍：許多材料如血清、抗生素及糖溶液

7、采用此法。 設(shè)備：蔡氏過(guò)濾器，濾膜過(guò)濾器。 優(yōu)缺點(diǎn)：不破壞培養(yǎng)基成分，只適用少量濾液。 注意事項(xiàng)：1、壓力適當(dāng)； 2、無(wú)菌條件下進(jìn)行； 3、防止?jié)B透現(xiàn)象。,輻射滅菌： 原理：紫外線波長(zhǎng)在200300nm，具有殺菌作用，以265-266殺菌力強(qiáng)。此段波長(zhǎng)易被細(xì)胞中核酸吸收；可產(chǎn)生臭氧和過(guò)氧化氫。殺菌效力與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。 缺點(diǎn)：穿透力不大。距照射物1.2m為宜。 應(yīng)用：無(wú)菌室，醫(yī)院。 注意事項(xiàng)：對(duì)眼睛和皮膚有刺激作用。,化學(xué)藥品滅菌： 原理：應(yīng)用化學(xué)制劑破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。 殺菌劑如重金屬離子； 抑菌劑如磺胺類及多數(shù)抗生素。 注意：與藥品的濃度高低，時(shí)間長(zhǎng)短，微生物種類以及微 生物所處的環(huán)

8、境有關(guān)。 常用化學(xué)殺菌劑有：乙醇、醋酸、石碳酸 福爾馬林、升汞、高錳酸鉀、新潔爾滅等,常用消毒劑種類,各種消毒劑的應(yīng)用,消毒與滅菌效果的檢查： 消毒與滅菌效果好壞，直接關(guān)系到菌種成品率的高低。因此，除了要嚴(yán)格把好消毒、滅菌關(guān)外，同時(shí)還要嚴(yán)格執(zhí)行檢驗(yàn)制度，兩者缺一不可。 培養(yǎng)基滅菌效果檢驗(yàn)：、試管母種培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，從高壓滅菌鍋中不同部位隨機(jī)抽取支，放置282恒溫箱中培養(yǎng)5-7天,如無(wú)霉菌、細(xì)菌、酵母等雜菌出現(xiàn)，則認(rèn)為滅菌徹底。,、原種及栽培種培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，從滅菌鍋中上、中、下三層進(jìn)行取樣，每層對(duì)角線隨機(jī)取樣瓶（袋），放置28-30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天，檢查是否有霉菌菌落生成。如檢查是否有細(xì)菌沒(méi)有殺死，必須使用細(xì)菌培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。上述抽取的樣品，分別在無(wú)菌下取出少量培養(yǎng)基接入細(xì)菌培養(yǎng)基，然后在37培養(yǎng)24小時(shí)，檢查結(jié)果沒(méi)有細(xì)菌菌落產(chǎn)生，說(shuō)明滅菌徹底。如某一位置試樣出現(xiàn)雜菌，可能是鍋內(nèi)有