臨床微生物標(biāo)本的采集運(yùn)送和處理

1、臨床微生物標(biāo)本的采集、運(yùn)送和處理,臨床微生物檢測(cè)的目的,協(xié)助臨床醫(yī)生明確疾病的診斷并治療感染性疾病 規(guī)范臨床抗生素的應(yīng)用 幫助院感加強(qiáng)多重耐藥菌和特殊病原菌的監(jiān)測(cè),從微生物標(biāo)本接收后，實(shí)驗(yàn)室的工作就是：,生物安全柜,恒溫培養(yǎng)箱,標(biāo)本采集、運(yùn)送及處理過程中的生物安全,一、采集標(biāo)本過程中需戴手套、穿工作服、戴防護(hù)口罩，必要時(shí)戴防護(hù)眼鏡、穿隔離服。 二、采集到的原始標(biāo)本應(yīng)采用防漏可密封的無(wú)菌管或杯型容器收集。外加防漏可密封的塑料袋，袋上應(yīng)注明標(biāo)本信息以及印有生物安全標(biāo)志。,標(biāo)本采集、運(yùn)送及處理過程中的生物安全,三、用帶針頭的注射器采集的標(biāo)本應(yīng)移至無(wú)菌管內(nèi)或用防護(hù)性裝置套住針頭，再置于密封、防漏的塑料

2、袋內(nèi)送檢。 四、不要將泄漏的標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室或隨意處理。若需重送，舊的標(biāo)本需高壓滅菌后棄去。,標(biāo)本采集的基本原則,標(biāo)本的正確選擇、采集和運(yùn)送 是實(shí)驗(yàn)室工作準(zhǔn)確和有效的前提，是保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，。 (早、無(wú)、藥、適、時(shí)機(jī)),標(biāo)本采集的基本原則,一、盡早采集 一旦懷疑細(xì)菌感染，應(yīng)及時(shí)采集標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，盡早獲得病原學(xué)診斷和抗生素敏感資料，對(duì)細(xì)菌感染的治療具有極其重要意義。采集時(shí)間最好是病程早期、急性期，確保病原菌的檢出。,標(biāo)本采集的基本原則,二、遵守?zé)o菌操作 在采取血液、穿刺液或腦脊液等正常狀態(tài)下的無(wú)菌部位標(biāo)本，應(yīng)嚴(yán)格注意無(wú)菌操作，不得被其他部位細(xì)菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部

3、、鼻咽部和泌尿生殖道等部位應(yīng)采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。 盛放標(biāo)本的容器應(yīng)無(wú)菌。,臨床常見的各種送檢標(biāo)本,無(wú)菌標(biāo)本 血液 骨髓 腦脊液 胸腹水 關(guān)節(jié)液 膽汁,非無(wú)菌標(biāo)本 痰 尿 大便 生殖道標(biāo)本 耳泌物,微生物標(biāo)本送檢,天然棉花及木棒,bact,微生物標(biāo)本送檢,bact,微生物標(biāo)本送檢,標(biāo)本采集的基本原則,三、在抗生素應(yīng)用前采集 感染會(huì)發(fā)生生命危險(xiǎn)，臨床醫(yī)生會(huì)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)出結(jié)果之前使用抗生素治療，而抗生素的使用將影響病原菌的檢出。,標(biāo)本采集的基本原則,四、選擇不同采集時(shí)機(jī)和標(biāo)本種類 根據(jù)臨床癥狀和流行病學(xué)資料，可大致對(duì)感染性疾病的病原體作大致的估計(jì)，根據(jù)病程和感染部位的不同，選擇合

4、適時(shí)機(jī)采集不同標(biāo)本。如傷寒患者，發(fā)病第一周應(yīng)采集血液、第二周應(yīng)采集糞便和尿液，否則影響細(xì)菌的檢出率。,標(biāo)本采集的基本原則,五、適量標(biāo)本 標(biāo)本量太少，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果； 標(biāo)本盡量不用以天然棉花及木棍制成的拭子采集標(biāo)本（不飽和脂肪酸、干燥）；,標(biāo)本的運(yùn)送,1.把握好時(shí)間 標(biāo)本采集后立即送檢，送檢時(shí)間不得超過2h，否則會(huì)影響病原菌的檢出。 少量液體（1ml）或組織（1cm3）應(yīng)在1530min內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，以免蒸發(fā)、干燥及暴露于周圍環(huán)境。,標(biāo)本的運(yùn)送,2.控制好環(huán)境 一般性的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本延遲送檢時(shí)，應(yīng)放置4冰箱保存，且不超過24h。 若疑似標(biāo)本中有對(duì)周圍環(huán)境敏感的微生物，如淋病奈氏菌、腦膜炎奈氏菌

5、和流感嗜血桿菌（低溫易死亡），應(yīng)立即運(yùn)送和處理。通常血液、腦脊液、生殖道、眼或內(nèi)耳標(biāo)本不要冷藏保存。,標(biāo)本的運(yùn)送,3、做好包裝和防護(hù) 臨床標(biāo)本及感染性物質(zhì)，不管運(yùn)送距離有多遠(yuǎn)，應(yīng)嚴(yán)格注意標(biāo)本的包裝，并且應(yīng)采取安全防護(hù)措施。,標(biāo)本送檢樣本,標(biāo)本的接受、處理原則,當(dāng)標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)有病人基本信息、標(biāo)本來源、采集時(shí)間等。 實(shí)驗(yàn)室遇到下列情況標(biāo)本時(shí)拒絕接受 1.不正確的運(yùn)送溫度 2.不正確的運(yùn)送工具 3.延長(zhǎng)送檢時(shí)間 4.標(biāo)本容器上未貼病人信息或貼錯(cuò) 5.標(biāo)本有泄漏 6.盛標(biāo)本的容器有破損 7.標(biāo)本有明顯污染 8.標(biāo)本量不足或已干涸 9.24h內(nèi)重復(fù)送檢的標(biāo)本（不包括血培養(yǎng)） 10.對(duì)某種試驗(yàn)不適

6、合的標(biāo)本,臨床常見標(biāo)本采集、運(yùn)送與接種,臨床常見的標(biāo)本：,血液 痰及鼻咽分泌物 尿液 糞便 穿刺液（腦脊液、膽汁、胸腹水等） 膿液及創(chuàng)傷感染分泌物 生殖道,血液 正常人的血液是無(wú)菌的。當(dāng)細(xì)菌侵入時(shí)可引起菌血癥或敗血癥。,血液培養(yǎng)的意義：,菌血癥 感染性心內(nèi)膜炎 臨床不明原因的感染 假體植入后感染（人工關(guān)節(jié)、人工瓣膜） 靜脈導(dǎo)管相關(guān)性感染 肺炎,血培養(yǎng)采集指征：,高熱（38）或低溫（10*109/L） 皮膚黏膜出血 休克 多器官衰竭 血壓降低 C反應(yīng)蛋白升高及呼吸加快 血液病患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少、血小板減少,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率偏低 血培養(yǎng)污染問題 血培養(yǎng)瓶的保存與運(yùn)送不當(dāng) 沒有及

7、時(shí)送檢,送檢率偏低 采血時(shí)機(jī)不合適 藥物對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)的影響 采血量不足影響細(xì)菌生長(zhǎng) 套數(shù)的影響,血培養(yǎng)送檢率,國(guó)內(nèi)多數(shù)三甲綜合醫(yī)院1020 瓶/天 復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院2050瓶/天 香港瑪麗醫(yī)院200瓶/天 臺(tái)灣大學(xué)醫(yī)院300瓶/天,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率偏低 血培養(yǎng)污染問題 血培養(yǎng)瓶的保存與運(yùn)送不當(dāng) 沒有及時(shí)送檢,送檢率偏低 采血時(shí)機(jī)不合適 藥物對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)的影響 采血量不足影響細(xì)菌生長(zhǎng) 套數(shù)的影響,血液標(biāo)本采集時(shí)機(jī),使用抗菌藥物之前或停藥24小時(shí)后 寒戰(zhàn)和發(fā)熱高峰3060min內(nèi) （研究表明細(xì)菌通常在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前1小時(shí)左右進(jìn)入血流）,血液標(biāo)本采集時(shí)機(jī),懷疑感染性心內(nèi)膜炎或其他靜脈內(nèi)

8、感染（如導(dǎo)管相關(guān)性感染）時(shí)，可分開時(shí)段分部位采集：,導(dǎo)管相關(guān)血流感染,導(dǎo)管相關(guān)血流感染（Catheter Related Blood Stream Infection,簡(jiǎn)稱CRBSI） 指帶有血管內(nèi)導(dǎo)管或者拔除血管內(nèi)導(dǎo)管48小時(shí)內(nèi)的患者出現(xiàn)菌血癥或真菌血癥，并伴有發(fā)熱（38）、寒顫或低血壓等感染表現(xiàn)，除血管導(dǎo)管外沒有其他明確的感染源。,導(dǎo)管,送檢指征 在ICU 病房?jī)?nèi)攜帶中心靜脈導(dǎo)管超過48小時(shí)，出現(xiàn)原因不明的發(fā)燒或低血壓的患者，兒童患者出現(xiàn)低體溫者。,送檢方法,1、保留情況：采取至少2套血培養(yǎng)，其中至少一套來自外周靜脈，另外的一套則從導(dǎo)管中心無(wú)菌采獲，兩個(gè)來源的采血時(shí)間必須接近（5分鐘），各

9、自做好標(biāo)記。 2、不保留情況：從獨(dú)立的外周靜脈無(wú)菌采集2套血培養(yǎng)。無(wú)菌狀態(tài)下取出導(dǎo)管并剪下 5cm導(dǎo)管尖端或近心端送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行Maki 半定量平板滾動(dòng)培養(yǎng)。,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率偏低 血培養(yǎng)污染問題 血培養(yǎng)瓶的保存與運(yùn)送不當(dāng) 沒有及時(shí)送檢,送檢率偏低 采血時(shí)機(jī)不合適 藥物對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)的影響 采血量不足影響細(xì)菌生長(zhǎng) 套數(shù)的影響,血培養(yǎng)瓶,需氧瓶,厭氧瓶,一套血培養(yǎng)=1瓶需氧+1瓶厭氧,血液標(biāo)本采集方法,采集量： 成人每瓶采血量為810ml，兒童每瓶采血量為13ml 采用“雙側(cè)雙瓶”原則。即2套血培養(yǎng)（1套為1瓶需氧和1瓶厭氧）。成人每套不少于10ml，嬰幼兒僅用需氧瓶，采用兩只需

10、氧瓶為2套血培養(yǎng)，不少于4ml。,兒童患者因血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無(wú)需等同于成人,采血的總量是影響檢出病原菌的重要因素之一。,采血量 一套血培養(yǎng)（抽20ml血液） 二套血培養(yǎng) 三套血培養(yǎng),陽(yáng)性檢出率 65% 80% 96%,血液標(biāo)本采集時(shí)機(jī)+采血量,急性感染患者，應(yīng)在5min內(nèi)從不同部位分別采23套血培養(yǎng) 發(fā)熱原因不明患者，在24h內(nèi)應(yīng)從不同部位采23套，間隔不少于60min。 可疑心內(nèi)膜炎患者，起始采集3套血培養(yǎng)（每次間隔不少于30min），如果24h內(nèi)培養(yǎng)陰性，則應(yīng)繼續(xù)采集2套血培養(yǎng) 亞急性感染性心內(nèi)膜炎，需在30min至1h內(nèi)連續(xù)抽取數(shù)套血培養(yǎng)（以證明細(xì)菌感染的連續(xù)性）然后才開始

11、抗菌藥的經(jīng)驗(yàn)治療。,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率偏低 血培養(yǎng)污染問題 血培養(yǎng)瓶的保存與運(yùn)送不當(dāng) 沒有及時(shí)送檢,送檢率偏低 采血時(shí)機(jī)不合適 藥物對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)的影響 采血量不足影響細(xì)菌生長(zhǎng) 套數(shù)的影響,血液標(biāo)本采集方法,靜脈采血，應(yīng)嚴(yán)格消毒血培養(yǎng)瓶蓋和皮膚，用無(wú)菌采血裝置采血，不換針頭，直接將血液標(biāo)本注入血培養(yǎng)瓶中，注入血液后應(yīng)顛倒混勻以防凝固。采用真空采血裝置可降低污染。 采血部位：成人采用肘靜脈，兒童和嬰幼兒多為頸部和腹股溝。成人不建議采集動(dòng)脈血，不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血，因其常伴有高污染率。,嚴(yán)格消毒原因?yàn)椋翰裳课黄つw皺褶多，易造成皮膚寄生菌污染,血培養(yǎng)瓶接種順序有學(xué)問,用注射

12、器采血時(shí)： 首先接種厭氧瓶避免空氣進(jìn)入，所以接種順序?yàn)橄冉臃N厭氧瓶，后需氧瓶。 用蝶形針采血時(shí)： 血液首先裝入需氧瓶，以免裝置里的空氣傳送到厭氧瓶中。所以它的順序?yàn)橄冉臃N需氧瓶，后接種厭氧瓶。 特殊情況： 如果抽取血液量很少時(shí)，血液應(yīng)首先接種到需氧瓶中，因?yàn)槎鄶?shù)菌血癥是由需氧菌和兼性厭氧菌感染導(dǎo)致的，剩余的血再接種厭氧瓶。,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率偏低 血培養(yǎng)污染問題 血培養(yǎng)瓶的保存與運(yùn)送不當(dāng) 沒有及時(shí)送檢,送檢率偏低 采血時(shí)機(jī)不合適 藥物對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)的影響 采血量不足影響細(xì)菌生長(zhǎng) 套數(shù)的影響,血液標(biāo)本的運(yùn)送,采集后的血培養(yǎng)應(yīng)在1h內(nèi)送達(dá)，不能及時(shí)送達(dá)時(shí)，需置室溫下保存，不可冷藏或冷

13、凍。(因?yàn)槿舾腥揪鸀榉窝祖溓蚓?、腦膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌遇冷易死亡),泌尿生殖道標(biāo)本 一、尿液標(biāo)本 適應(yīng)癥：尿路感染 腎結(jié)核 泌尿系結(jié)石 膀胱排空功能受損 前列腺增生的患者,送檢指針：,出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛等膀胱刺激癥， 肉眼膿尿或血尿， 尿常規(guī)檢查有白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性， 不明原因的發(fā)熱或留置尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱、尿道口有膿性分泌物等癥狀， 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前等情況,采集時(shí)間： 抗菌藥物使用前或停藥5天后采集尿液標(biāo)本，通常采集晨尿，確保尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上。,采集方法,1、清潔中段尿采集法：囑患者晨起用溫和肥皂水清潔會(huì)陰后，棄去前段尿，留取中段尿10ml15ml于滅菌容器內(nèi)，立即加蓋送

14、檢。 2、膀胱穿刺采集法：嚴(yán)格無(wú)菌操作消毒恥骨聯(lián)合上皮膚，用無(wú)菌注射器穿刺入膀胱抽取510ml尿液于滅菌容器送檢。該方法帶給病人有一定的痛苦 3、導(dǎo)尿法：直接導(dǎo)尿采集法、留置導(dǎo)尿采集法,采集方法,直接導(dǎo)尿 按常規(guī)方法消毒會(huì)陰后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，先棄去前段15ml，再留取1015ml膀胱尿液于無(wú)菌容器送檢。 留置導(dǎo)尿 用碘酒消毒尿道口處的導(dǎo)尿管壁，用聯(lián)空針筒的細(xì)針斜穿管壁抽吸尿液1015ml，置于無(wú)菌容器中送檢,采集方法,四、集尿法 懷疑結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，可用一清潔容器留24h尿，取其沉渣1015ml送檢。,尿液標(biāo)本的運(yùn)送,標(biāo)本采集后及時(shí)送檢和接種，室溫下存放時(shí)間不得超過2h（夏季

15、保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），48保存時(shí)間不得超過24h，當(dāng)應(yīng)注意冷藏保存不用于疑為淋病奈瑟菌感染病人,常見臨床標(biāo)本的采集及處理,泌尿生殖道標(biāo)本 二、生殖道和尿道標(biāo)本 送檢指針：,女性患者 外陰陰道炎 細(xì)菌性陰道炎 陰道潰瘍 尿道炎 宮頸炎 子宮頸炎 子宮內(nèi)膜炎 輸卵管炎 卵巢膿腫,男性患者 尿道炎 附睪炎 前列腺炎 生殖器,標(biāo)本采集（根據(jù)不同感染種類和病變特征采集不同的標(biāo)本）,尿道分泌物 患者排尿1h后采集，男性用生理鹽水局部清洗，采取從尿道口溢出的膿性分泌物，或尿道內(nèi)24cm旋轉(zhuǎn)拭子停留20s后取出分泌物；女性清洗尿道口后，從尿道內(nèi)壓迫尿道，使分泌物溢出后采集標(biāo)本，無(wú)肉眼可見的膿液，可用

16、滅菌拭子輕輕深入前尿道內(nèi)24cm旋轉(zhuǎn)拭子停留20s取樣送檢 生殖器標(biāo)本 用無(wú)菌鹽水和手術(shù)刀清除潰瘍面，暴露出潰瘍基底，滲出物積聚較明顯時(shí)，用拭子或吸管采集,送檢指針： 腹瀉病人出現(xiàn)以下任一情況時(shí)建議采集糞便標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)： 腹瀉、大便每日3次，糞便的性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便及血便，可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發(fā)熱、腹痛及全身不適等； 病情嚴(yán)重者，因大量丟失水分引起脫水、電解質(zhì)紊亂甚至休克； 糞便涂片鏡檢白細(xì)胞5個(gè)/hp； 抗菌藥物治療后腹瀉； 來自疫區(qū)的患者,常見臨床標(biāo)本的采集及處理糞便標(biāo)本,采集方法,自然排便采集法 自然排便后，挑取有膿血或粘液部分的糞便，液狀糞便取絮狀物盛于

17、無(wú)菌容器內(nèi)或置于保存液中送檢，若不能及時(shí)送檢，應(yīng)按1:10比例與ph7.0磷酸鹽甘油緩沖液混合保存，以防病原菌死亡而影響檢出率,直腸拭子采集法 適于排便困難患者或嬰幼兒。,采集量,一般用拭子采集大于2g的標(biāo)本送檢，若標(biāo)本為水樣，采集大于2ml的標(biāo)本置于無(wú)菌容器中送檢,采集時(shí)間及頻率,采集時(shí)間 盡可能在發(fā)病早期（急性期）和應(yīng)用抗菌藥物治療之前，采集新鮮糞便送檢，以提高檢出率。懷疑沙門菌感染時(shí)，應(yīng)在發(fā)病2周以后采集標(biāo)本送檢 采集頻率 重復(fù)采集標(biāo)本的頻率每日最多1次,痰標(biāo)本,適應(yīng)癥： 咳嗽 咳出膿性痰或鐵銹樣痰 咯血 鮮血和痰中帶血等 呼吸困難 呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛、 X線檢查提示肺 部有炎性

18、浸潤(rùn)或胸腔積液 發(fā)熱 伴有白細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞升高或CRP明顯升高,標(biāo)本的采集,一般以晨痰為好； 支氣管擴(kuò)張癥患者清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采集痰標(biāo)本。 自然咳痰采集法：在留取痰之前，用溫清水反復(fù)漱口，以減少常居菌的污染，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入無(wú)菌容器中。 氣管穿刺法：在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本。,不合格標(biāo)本的處理,對(duì)下列不合格的標(biāo)本應(yīng)拒收 申請(qǐng)單姓名、科別、床號(hào)與標(biāo)本的標(biāo)簽不符 痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣 痰涂片白細(xì)胞25/LP 標(biāo)本容器溢漏，無(wú)蓋子 痰標(biāo)本留取放置時(shí)間太長(zhǎng)，超過2h 未用指定的無(wú)菌容器留痰做細(xì)菌培養(yǎng),標(biāo)本的運(yùn)送,標(biāo)本采集后需盡快（小于2h）送至實(shí)驗(yàn)室，不及時(shí)運(yùn)送可導(dǎo)致肺炎

19、鏈球菌、流感嗜血桿菌等病原菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶想象而死亡。 延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4冰箱保存（疑為肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌感染標(biāo)本不能冷藏），以免雜菌生長(zhǎng)，但保存標(biāo)本應(yīng)在24h小時(shí)內(nèi)處理。 對(duì)可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者檢驗(yàn)標(biāo)本，在采集、運(yùn)送或保存過程中必須注意生物安全防護(hù)。,膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本采集,送檢指針： 局部感染：紅、腫、熱、痛和功能障礙 全身癥狀：輕重不一、常有發(fā)熱、頭痛、全身不適、乏力食欲減退等。（白細(xì)胞計(jì)數(shù)增加、crp升高） 疑為軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染,采集方法：,開放性膿腫： 包括眼、耳、扁桃體、術(shù)后切口感染等膿性分泌物 首先用無(wú)菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，用無(wú)菌棉拭子先蘸少許無(wú)菌生理鹽水，然后采取靠近組織部分膿液及病灶深部的分泌物立即送檢。 閉鎖性膿腫： 指完整膿壁與體腔，及與外界不相通的膿腫 采集前需對(duì)患者病灶局部皮膚或粘膜表面用2.5%-3%碘酊消毒、75%乙醇脫碘，用無(wú)菌注射器將膿腫內(nèi)容物吸出。,明明送檢的是膿