第五節(jié)中藥與其制劑含量測定方法

1、第十四章第十四章 中藥及其制劑分析概論中藥及其制劑分析概論 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 一、中藥及其制劑分析的特點(diǎn) 中藥和中藥制劑應(yīng)具備如下特征： 藥性，即四氣（寒、熱、溫、涼）、五味（酸、甘、 苦、辛、咸），以及臟腑、經(jīng)絡(luò)、三焦、營衛(wèi)氣血等 歸經(jīng)和升降沉浮等。 按中醫(yī)藥學(xué)術(shù)語表達(dá)的功效，如解表、涼血、清熱解 毒、活血化瘀等。 n按君、臣、佐、使關(guān)系考慮藥物之間的 七情、十八反、 十九畏、藥對、禁忌、有毒無毒等配伍組方。 n我國最早中醫(yī)學(xué)著作黃帝內(nèi)經(jīng)及中藥學(xué)著作神農(nóng) 本草經(jīng)為代表。以陰、陽、表、里、寒、熱、虛、實(shí)八 綱表示機(jī)體的功能狀態(tài)；以望、聞、問、切四診作為了解 機(jī)體表觀狀態(tài)的手段。 ChP從

2、1963年版開始，分為兩版，其中第一版收載中藥 材和中藥制劑。 2000版一部收載中藥品種992種，其中中藥材532種， 中藥制劑460種，增修訂品種比1995年版ChP有了發(fā)展。 2000年版ChP中： v 現(xiàn)代分析技術(shù)有：顯微鑒定技術(shù)、化學(xué)鑒別方法、色 譜法等對制劑所含的藥材進(jìn)行鑒別； v 檢查雜質(zhì)方面：雜物、砷鹽、重金屬、農(nóng)藥殘留量等， 并對藥物中明確有效成分的品種建立了含量測定方法 等方面。 中藥制劑質(zhì)量的影響因素：容易吸潮、染菌、有效成 分也可能由于不穩(wěn)定而損失。 原藥材的質(zhì)量受多種因素的影響：生長環(huán)境、采收時 間、貯藏條件的不同，有效成分的含量可能有很大的 差異，可直接影響制劑的質(zhì)

3、量。 總結(jié)：應(yīng)按照GMP的要求，從藥品生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)以 及銷售、使用等加以全面控制，才能確保藥品的質(zhì)量。 中藥制劑分析的樣品一般需要經(jīng)過提取、純化等預(yù)處 理過程，以排除干擾組分的干擾。 GAP中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，由國家藥品監(jiān)督管理局 發(fā)布，2002年6月1日起執(zhí)行。 二、中藥及其制劑的分類與質(zhì)量分析要點(diǎn)。 傳統(tǒng)劑型有：丸、散、膏、丹、酒、湯、茶、錠等； 現(xiàn)在劑型有：口服液、顆粒劑、片劑、硬膠囊劑、軟 膠囊劑、氣霧劑、注射劑等。 按制劑物態(tài)進(jìn)行分類：中藥材及其炮制品、液體制劑、 固體制劑、半固體制劑。 （一）中藥材及其炮制品 （二）液體制劑 v 1合劑與口服液：煎煮法、滲漉法、蒸餾法等； v

4、 2酒劑和酊劑：酒劑用浸漬法、滲漉法或其他制備方 法，酊劑可用溶解法、稀釋法、浸漬法或滲漉法。 v 檢查項(xiàng)目：乙醇量測定法，采用氣相色譜法。進(jìn)行甲 醇限量、微生物限度和最低裝量檢查。 v 3注射劑：中藥注射劑系指從藥材中提取的有效物質(zhì) 制成的可供注入體內(nèi)的滅菌溶液或乳狀液，以及供臨 用前配制成溶液的無菌粉末或濃溶液。 中藥指紋圖譜包括：色譜指紋圖譜（HPLC、GC、TLC 等），光譜指紋圖譜和脫氧核糖核酸指紋圖譜等。 （三）半固體制劑 1煎膏劑：是指藥材煎煮、去渣濃縮后，加煉蜜或糖 制成的半流體制劑，有的煎膏劑還可加入藥材細(xì)粉， 攪拌混勻后制的，又稱膏滋。 2浸膏劑和流浸膏劑： v 流浸膏劑是

5、指用適宜的溶劑劑出藥材中的有效成分， 蒸去部分溶劑，調(diào)整濃度至規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)而制成的制劑， 一般加20%50%濃度的乙醇作為防腐劑。 v 浸膏劑：是指用適宜的溶劑浸出藥材中的有效成分后， 蒸去全部溶劑，濃縮成稠膏狀或塊、粉狀，每1g浸膏 一般相當(dāng)于原藥材2g5g （四）固體制劑 1丸劑：是指藥材細(xì)粉或藥材提取物加適意的粘合劑 或輔料制成的球形或類球形的制劑。分蜜丸、水蜜丸、 水丸、糊丸、濃縮丸、微丸等。 v 檢查項(xiàng)目：水分、重（裝）量差異、溶散時限、無菌 檢查等。 水分檢查：甲苯法、烘干法、減壓干燥法檢查。 2散劑：是指一種或多種藥材混合制成的粉末狀制劑， 分為內(nèi)服散劑和外用散劑兩種。 v 檢查項(xiàng)目

6、：均勻度、水分和裝量差異等。 3顆粒劑：是指適宜的輔料與藥材提取物或與藥材細(xì) 粉制成的顆粒狀制劑。分為可溶性、混懸性和泡騰性 顆粒劑。 v 檢查項(xiàng)目：粒度、水分、溶化性、裝量差異等。 4片劑：是指藥材細(xì)粉或浸膏加輔料壓制而成的片狀 制劑。 v 檢查項(xiàng)目：重量差異和崩解時限。 5膠囊劑：分硬膠囊劑、軟膠囊劑和腸溶膠囊劑。 v 檢查項(xiàng)目：水分、裝量差異、崩解時限，水分含量限 度。 三、中藥及其制劑分析中待測成分的提取分離與 純化方法 （一）提取方法： v1萃取法； v2冷浸法； v3回流提取法；用于固體制劑的提取。 v4連續(xù)回流提取法：； v5水蒸汽蒸餾； v6超聲提取法； v7超臨界流體萃?。⊿

7、FE）。見圖圖14-1 （二）純化方法 v 純化是指組分被提出后，還需進(jìn)一步的處理，以除去 干擾組分的干擾。測定方法：容量法、紫外分光光度 法等。 v 萃取二次可分別除去中性、酸性脂溶性雜質(zhì)及水溶性 雜質(zhì)，達(dá)到純化的目的。 v 柱色譜法也是常用的純化方法，常用的純化方法，常 用的固定相有硅膠、氧化鋁、大孔吸附樹脂等。 第二節(jié)第二節(jié) 中藥及其制劑分析的一般程序中藥及其制劑分析的一般程序 基本程序：供試品的抽取、檢驗(yàn)依據(jù)和分析方法準(zhǔn)備、 樣品的真?zhèn)舞b別試驗(yàn)、樣品質(zhì)量檢查、樣品中主藥的含量測 定和檢驗(yàn)記錄等。 一、取樣與樣品保存 注意事項(xiàng)： v （1）供試品要具有一定的代表性、科學(xué)性、真實(shí)性和代表性

8、； v （2）必須嚴(yán)格按照規(guī)定的取樣方法進(jìn)行取樣：均勻、合理。 （一）中藥材取樣法： 1取樣前應(yīng)注意品名、產(chǎn)地、規(guī)格等，檢查包裝的完 整性，有無水跡、霉變等異常現(xiàn)象； 2從同批藥材包件中抽取樣品的原則； 3對破碎、粉末狀或大小在1cm以下的藥材，可采用 樣器取樣； 4將取得的樣品混合均勻，即為總樣品，可采用四等 分法（又稱“四分法”）反復(fù)數(shù)次直至最后到余量足 夠供檢驗(yàn)用。 （二）中藥制劑取樣法 1粉狀中藥制劑（散或顆粒劑）； 2液體中藥制劑（口服液、酊劑、酒劑、糖漿）； 3固體種成藥（丸劑、片劑）； 4注射劑； 5其他劑型中的中藥制劑。 二、鑒別 性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別等。 三、檢查 一

9、般理化檢查項(xiàng)目、重金屬檢查。 四、含量測定 有效成分測定、有效部位含量測定。 五、檢驗(yàn)記錄 真實(shí)、詳細(xì)、整潔。 第三節(jié)第三節(jié) 中藥及其制劑的定性鑒別方法中藥及其制劑的定性鑒別方法 一、性狀鑒別； 二、顯微鑒別； 三、理化法鑒別； v （一）顯微化學(xué)反應(yīng)法 v （二）微量升華法 v （三）熒光分光光度法 v （四）顏色反應(yīng)及沉淀反應(yīng)法 四、色譜法鑒別。 第四節(jié)第四節(jié) 中藥及其制劑的雜質(zhì)檢查與一般質(zhì)中藥及其制劑的雜質(zhì)檢查與一般質(zhì) 量控制方法量控制方法 雜質(zhì)檢查項(xiàng)目：水分、灰分、酸不溶性灰分、砷鹽和 重金屬限量、有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。 一般質(zhì)量控制項(xiàng)目還有浸出物、揮發(fā)油、總氮測定、 輔料的質(zhì)量檢

10、查與劑型有關(guān)的檢查等內(nèi)容。 一、水分檢查法 檢查目的：水分含量過高，可引起制劑結(jié)塊、霉變或 有效成分的分解； 藥典附錄收載的水分測定法共有四種； 第一法為烘干法； 第二法：甲苯法；甲苯法； 第三法為減壓干燥法； 第四法：氣相色譜法測定水分。 二、總灰分和酸不溶性成分 總灰分是指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化遺留的無機(jī)物。 測定的主要目的：控制泥土、砂土的量，同時還反映 藥材生理灰分的量； 測定方法：熾灼使完全灰化至恒重，根據(jù)殘?jiān)闹亓?計(jì)算總灰分的含量百分率； 檢查原則：如以合格的藥材為原料，原則上可以不再 檢查該項(xiàng)目； 酸不溶性成分測定：灰分加入稀HCl后過濾，再熾灼至 恒重，即得酸不溶性灰分的量

11、。 三、重金屬：以鉛、汞、鎘、銅等對人體均有嚴(yán)重的毒 害的物質(zhì)。 目前現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)控制在百萬分之二十以下。世界衛(wèi)生組 織對鉛應(yīng)控制在百萬分之十以下，鎘應(yīng)控制在百萬分 之0.3以下。 有機(jī)破壞方法：干法和濕法兩類。 例如：制劑中的鉛測定可選用二硫腙比色法和原子分 光光度法。 四、砷鹽 來源：中藥原藥材受除草劑、殺蟲劑和化學(xué)肥料等影 響。 ChP（2000年版一部）中收載的砷鹽有： v （1）古蔡氏法 v （2）二乙基二硫代氨基甲酸銀法。 破壞方法：采用堿融法。 JP中還收載了加硝酸鎂乙醇溶液破壞的方法，適用于 中藥制劑。 五、殘留農(nóng)藥種類： 有機(jī)氯類如艾氏劑、六六六、氯丹等； 有機(jī)磷類如三硫磷、氯硫

12、磷、蠅毒磷等； 氨基甲酯類如西維因； 二硫代氨基酸酯類如福美鐵、代森錳等； 無機(jī)農(nóng)藥如磷化鋁、砷酸鈣等； 苯氧羧酸類除草劑如2，4-D、2，4，5-T等。 檢查內(nèi)容的確定：接觸農(nóng)藥不明的樣品一般可測定總 有機(jī)氯量和總有機(jī)磷量； 注：ChP（200年版一部）新增加有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量 “檢查”項(xiàng)目。 1總氯量的測定：照氧瓶燃燒法破壞； 2總磷量的測定：供試品萃取后，過硅土柱，洗脫液 濃縮后，用氧瓶燃燒法處理，磷鉬酸比色法測定； 3氣相色譜法：分離效能高，具有高靈敏度的專屬的 檢測器，是對殘留農(nóng)藥進(jìn)行定性和定量分析的最常用 的方法； v 固定液：硅氧烷類，如OV-17，OV-21，SE-30等； v

13、載氣：N2；測定有機(jī)氯檢測器； v 電子捕獲檢測器（ECD）；測定有機(jī)磷或硫使用火焰光 度檢測器（FPD）。 示例：中藥中有機(jī)磷農(nóng)藥敵敵畏、樂果、馬拉硫磷和 對硫磷等測定方法： 氣 相 色 譜 條 件 ： 柱 長 2 m ， 內(nèi) 徑 3 m m ， 擔(dān) 體 為 Chromosorb W/AW-DWCS，涂布2.5%SE-30和3%QF-1混 合固定液，火焰光度檢測器檢測，進(jìn)樣口溫度220， 柱溫180，載氣為N2。 對照品溶液：加苯或氯仿定量稀釋成1mg/ml，用前加 二氯甲烷稀釋成1g/ml。 供試品溶液：中藥細(xì)粉10g，加中性Al2O3 0.5g，精密加 入CH2Cl220ml，振搖30m

14、in，濾過，取續(xù)濾液。 本方法快速、簡便、準(zhǔn)確、具有良好通用性。 第五節(jié)第五節(jié) 中藥及其制劑的含量測定方中藥及其制劑的含量測定方 法法 常用含量測定方法：化學(xué)分析法、分光光度法、 薄層掃描法、高效液相色譜法。 一、化學(xué)分析法：包括容量法和重量法。 示例：昆明山海棠片的含量測定方法采用提取后稱定 生物堿重量法。 容量法的應(yīng)用還有酸堿滴定法測定制劑中總生物堿的 含量等。 二、分光光度法：簡便，靈敏。ChP中UV法主要用于幾個 最大吸收波長較高，吸收較強(qiáng)的組分的含量測定，如 小檗堿、蘆丁、黃芩苷、丹皮酚等。 示例： v 左金丸中小檗堿的含量測定：黃連為君藥，小檗堿為 其主要有效成分，故測定其含量。用

15、吸收系數(shù)法測定。 比色法在中藥制劑分析中的應(yīng)用：一般用于一類成分 含量的含量測定，如總黃酮、人參總皂苷的含量測定。 三、薄層掃描法：是用一定波長的光照射在薄層板上， 對薄層色譜有吸收紫外光和可見光的斑點(diǎn)或激發(fā)后能 發(fā)射除熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積 分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查和含量測定的方法。 優(yōu)點(diǎn)：具有分離效能高、快速、簡便等。 1試驗(yàn)條件的選擇： v A、薄層色譜條件：組分應(yīng)能完全分離，斑點(diǎn)對稱，均 勻，不拖尾，是先決條件； v B、檢測方法：吸收測定法和熒光測定法； v C、測定方法：有反射法和透射法兩種； v D、掃描方式： 單波長和雙波長（見圖雙波長（見圖14-3）； 線

16、性掃描和鋸齒掃描。 v E、散射參數(shù)SX：見圖：見圖14-4 2測定方法的選擇： v （1）外標(biāo)法； v （2）內(nèi)標(biāo)法； 3、注意事項(xiàng)： v A、薄層的厚度應(yīng)均勻，表面平整，最好使用預(yù)制板； v B、點(diǎn)樣準(zhǔn)確，原點(diǎn)大小應(yīng)一致； v C、噴灑顯色劑應(yīng)均勻，量應(yīng)適中； v D、某些斑點(diǎn)顏色易揮發(fā)或?qū)諝獠环€(wěn)定，可用一潔 凈的玻璃板蓋在薄層板上，并用膠布加以固定； v E、本法的線性范圍較窄，應(yīng)在其線性范圍內(nèi)測定。 示例：ChP（2000年版）一部中腦得生丸中人參皂苷的 含量測定： 供試品除去脂溶性雜質(zhì)，取出人參皂苷，作為供試品 溶液；另取對照品人參皂苷。 固定相：硅膠G薄層板；展開劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇- 水（15：40：22：10）。 顯色劑：10%硫酸乙醇液，110加熱至斑點(diǎn)顯色清晰， 取出。 掃描波長：S=525nmR=700nm，測定供試品和對照品 的吸收度積分值，計(jì)算，即得。 本法使用兩點(diǎn)校正法，標(biāo)準(zhǔn)曲線可作線性回歸處理。 四、HPLC法 優(yōu)點(diǎn)：分離效能高，分析速度快，應(yīng)用范圍光，其重 現(xiàn)性和準(zhǔn)確度均優(yōu)于薄層掃描法，是中藥制劑含量測 定首選的方法。 1色譜條件的選擇： 多使用反相高效液相色譜法（RP-HPLC），即使用非極