不同親本數(shù)目的中間球海膽群體遺傳結(jié)構(gòu)分析畢業(yè)論文

1、畢業(yè)論文不同親本數(shù)目的中間球海膽群體遺傳結(jié)構(gòu)分析學(xué) 生 姓 名： 指導(dǎo)教師： 專業(yè)名稱： 所在學(xué)院： 2010年6月目 錄摘 要. iabstract. ii第一章 前 言. 1第二章 材料與方法. 32.1 實(shí)驗(yàn)材料. 32.2 實(shí)驗(yàn)方法. 32.2.1 dna提取. 32.2.2 pcr擴(kuò)增. 32.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析.5第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果. 63.1 微衛(wèi)星擴(kuò)增位點(diǎn)分析.63.2 各位點(diǎn)等位基因情況.73.3 遺傳多樣性分析.9第四章 討 論. 104.1 海膽幼蟲dna提取方法的優(yōu)勢.104.2 海膽遺傳學(xué)研究現(xiàn)狀. 10致 謝.12參考文獻(xiàn). 13摘 要本實(shí)驗(yàn)利用10對(duì)微衛(wèi)星引物，對(duì)由

2、不同親本數(shù)目所產(chǎn)生的中間球海膽（strongylocentrotus intermedius）群體進(jìn)行了遺傳結(jié)構(gòu)分析。實(shí)驗(yàn)所用的兩個(gè)海膽群體分別來源于7個(gè)（命名為p7）和3個(gè)親本(命名為p3)，p7群體取100只個(gè)體，p3群體取樣50只。所有海膽稚膽期采用直接裂解法提取基因組dna，裂解液直接進(jìn)行微衛(wèi)星擴(kuò)增。結(jié)果表明：p3群體擴(kuò)增出24個(gè)等位基因，平均有效等位基因數(shù)為1.99750.4209，平均香濃氏指數(shù)為0.74210.1984，平均奈氏雜合度為0.47960.1070，p7群體擴(kuò)增出24個(gè)等位基因，平均有效等位基因數(shù)為1.97680.5733，平均香濃氏指數(shù)為0.72280.2669，平

3、均奈氏雜合度為0.45430.1565；所有遺傳學(xué)指標(biāo)在兩個(gè)群體間沒有顯著差異。該研究首次建立了中間球海膽稚膽的固定、dna提取方法并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了pcr擴(kuò)增驗(yàn)證，研究結(jié)果豐富了中間球海膽分子遺傳學(xué)內(nèi)容。關(guān)鍵詞：中間球海膽，親本數(shù)目，遺傳學(xué)，微衛(wèi)星abstract10 pairs of microsatellite primers were used to analyze the genetic structure of the two strongylocentrotus intermedius populations which were produced by different pare

4、ntal numbers. 100 individuals derived from 7 parents (named p7) and 50 from 3 parents (named p3) were subjected to microsatellite analysis. dna of juvenile urchins was isolated from direct lysis and the lysis buffer were directly amplified. results showed that: 24 alleles in total were detected in p

5、3 population, the means of effective number of alleles, shannons index and neis expected heterozygosis were 1.99750.4209, 0.74210.1984 and 0.47960.1070. 24 alleles were detected in p7 population, the means of effective number of alleles, shannons index and neis expected heterozygosis were 1.97680.57

6、33, 0.72280.2669 and 0.45430.1565. all of the genetic indexes between the two groups were not significantly different. this research was the first try of tissue fixation, dna isolation and pcr amplification of juvenile sea urchin, and the results enriched the content of molecular genetics of sea urc

7、hin.key words: strongylocentrotus intermedius, parental stock size, genetics, microsatellites第一章 前 言微衛(wèi)星標(biāo)記（microsatellite），又稱為短串聯(lián)重復(fù)序列(simple tandem repeats,strs)或簡單重復(fù)序列（simple sequence repeats），是均勻分布于真核生物基因組中的簡單重復(fù)序列，由1-6個(gè)核苷酸的串聯(lián)重復(fù)片段構(gòu)成，其長度大多在100bp 以內(nèi)。微衛(wèi)星標(biāo)記是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種能有效區(qū)別不同物種、不同群體及不同基因型個(gè)體的分子標(biāo)記技術(shù)。具

8、有數(shù)量多、在基因組中分布廣泛、多態(tài)性豐富、突變率高、呈孟德爾式共顯性遺傳、可以特異性的 pcr擴(kuò)增、穩(wěn)定性重復(fù)性好、引物通用性好、檢測快速方便、能較好地反映物種的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性變化等優(yōu)點(diǎn)，在研究物種遺傳多樣性分析、種群遺傳結(jié)構(gòu)分析、種質(zhì)資源鑒定、基因組作圖和輔助育種等方面表現(xiàn)的優(yōu)越,為水生動(dòng)物的理論基礎(chǔ)研究提供了新的手段。微衛(wèi)星作為多態(tài) dna 標(biāo)記在海洋動(dòng)物的遺傳圖譜構(gòu)建、遺傳連鎖分析、物種遺傳多樣性的鑒定、種質(zhì)鑒定等方面已得到廣泛應(yīng)用。斑馬魚作為脊椎動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)的模式動(dòng)物,已經(jīng)構(gòu)建了以微衛(wèi)星為主的遺傳連鎖圖譜;李琪等1采用磁珠雜交選擇和 pcr篩選法,從長牡蠣dna選擇片段文庫中

9、,快速分離含有微衛(wèi)星序列的陽性克隆。在篩選的200個(gè)白色菌落中,56個(gè)克隆含有重復(fù)次數(shù)5以上的微衛(wèi)星序列 ,還獲得兩個(gè)小衛(wèi)星克隆;徐鵬等2還以菌液為模板篩選到中國對(duì)蝦31個(gè)微衛(wèi)星dna。naish等3在鯉科魚類中分離出5個(gè)4堿基微衛(wèi)星位點(diǎn),且對(duì)野生型和家養(yǎng)型擴(kuò)增出了多態(tài)性。尹紹武等4對(duì)海南近海點(diǎn)帶石斑魚野生和養(yǎng)殖群體微衛(wèi)星多態(tài)分析,總體上來看,點(diǎn)帶石斑魚野生群體的等位基因數(shù)、平均有效等位基因數(shù)、多態(tài)位點(diǎn)比例等于養(yǎng)殖群體,而雜合度兩個(gè)群體相當(dāng),說明海南近海點(diǎn)帶石斑魚野生與養(yǎng)殖群體的種質(zhì)資源都較好,為保護(hù)海南近海點(diǎn)帶石斑魚的種質(zhì)資源提供了分子水平的依據(jù)。譚杰等5運(yùn)用微衛(wèi)星dna技術(shù)對(duì)仿刺參煙臺(tái)群體

10、、威海群體大連群體的3個(gè)野生群各20個(gè)個(gè)體進(jìn)行了遺傳分析,結(jié)果表明威海群體和大連群體之間親緣關(guān)系較近,煙臺(tái)群體與前兩群體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。杜博等6對(duì)皺紋盤鮑和盤鮑南方養(yǎng)殖群體遺傳變異的微衛(wèi)星分析,發(fā)現(xiàn)皺紋盤鮑和盤鮑南方養(yǎng)殖群體遺傳多樣性較高,有利于遺傳選育,但與野生群體相比等位基因有所喪失。海膽是一類比較常見的海洋無脊椎動(dòng)物，其性腺營養(yǎng)豐富，并含有較多的不飽和脂肪酸，具有很高的醫(yī)療保健作用，世界上許多地方都有食用海膽的傳統(tǒng)。海膽市場價(jià)格很高 ,消費(fèi)量卻非常大。為滿足人們對(duì)海膽的需求 ,世界許多國家如日本、法國、愛爾蘭、智利 ,及美國東北部、加拿大的沿海各省以及從北美西海岸的加利福尼亞州到英國的哥倫

11、比亞都進(jìn)行了過量捕撈7-8,從而 ,人們對(duì)海膽?zhàn)B殖的興趣不斷增加 ,海膽的人工養(yǎng)殖和苗種生產(chǎn)的研究逐漸開展起來7,9-11。在海膽?zhàn)B殖及雜交育種等方面，王麗梅等12-13進(jìn)行了中間球海膽與光棘球海膽的雜交的研究。常亞青等14用中國北部沿海馬糞海膽、海刺猬、光棘球海膽三種主要海膽與引自日本的中間球海膽四種海膽之間的不同組合的雜交試驗(yàn)及其子代浮游幼體及幼海膽的早期生長發(fā)育。結(jié)果表明，采用生殖調(diào)控可使不同海膽達(dá)到同步繁殖，在8-24下各種海膽雜交組合的受精率與親本親緣關(guān)系有關(guān)，同時(shí)受到雙親繁殖適宜溫度的影響,受精率介于0-69.6%之間。王吉橋等15于2005年5 - 10月曾進(jìn)行了不同密度蝦夷馬糞

12、海膽與仿刺參投餌混養(yǎng)的試驗(yàn) ,發(fā)現(xiàn)在靜水精養(yǎng)下混養(yǎng)時(shí)海膽的特定生長率(sgr) 和成活率比單養(yǎng)高 ,水質(zhì)穩(wěn)定 ,適宜密度為每立方米 44614 g。目前國內(nèi)、外對(duì)海膽形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)以及遺傳學(xué)的研究都有報(bào)道16-18，但有關(guān)分子標(biāo)記技術(shù)在海膽研究上的應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道相比較少。addison 等19 利用4個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記分析了從大西洋北部至太平洋東北部11個(gè)取樣地點(diǎn)的綠海膽的遺傳結(jié)構(gòu)。 常亞青等20曾利用 rapd 技術(shù)對(duì)5種經(jīng)濟(jì)海膽基因組多態(tài)性進(jìn)行了分析。丁君等21采用磁珠富集法獲得了蝦夷馬糞海膽的微衛(wèi)星dna 序列 ,利用 premier 5. 0軟件設(shè)計(jì)引物,經(jīng)篩選,應(yīng)用其中的12 對(duì)微衛(wèi)星引

13、物獲得了 3 個(gè)蝦夷馬糞海膽?zhàn)B殖群體的等位基因頻率、等位基因數(shù)、雜合度及遺傳距離和遺傳相似性等遺傳參數(shù) , 研究3個(gè)蝦夷馬糞海膽群群體間的差異,發(fā)現(xiàn)山東榮成群體與大連 2 個(gè)群體間差異較大,群體間存在一定程度的分化 ,將有可能逐漸形成新的地理種群。耿慧君等22進(jìn)行了 中間球海膽野生和養(yǎng)殖群體遺傳結(jié)構(gòu)的微衛(wèi)星分析，利用 28對(duì)微衛(wèi)星 dna分子標(biāo)記對(duì)中間球海膽的 1個(gè)野生和 1個(gè)養(yǎng)殖群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析。鄒林林等23利用cdna-aflp技術(shù)，對(duì)以光棘球海膽()中間球海膽()的f1代為材料，對(duì)與海膽殼徑、體質(zhì)量和生殖腺質(zhì)量等主要經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記進(jìn)行篩選，并對(duì)這些數(shù)量性狀與分子標(biāo)記的相關(guān)

14、性進(jìn)行分析。結(jié)果表明, 10對(duì)引物共篩選出與殼徑、體質(zhì)量、生殖腺質(zhì)量顯著相關(guān)cdna-aflp標(biāo)記數(shù)分別為43、48和42個(gè)；極顯著相關(guān)cdna-aflp標(biāo)記數(shù)分別為38、38和23個(gè)。本研究采用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)，分析了由不同數(shù)目親本所產(chǎn)生的兩個(gè)中間球海膽群體的遺傳結(jié)構(gòu)，建立了稚膽材料的固定、dna裂解及pcr技術(shù)，豐富了中間球海膽分子遺傳學(xué)研究內(nèi)容。第二章 材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)材料于2008年11月，分別由7只海膽（5雌2雄）和3只海膽（2雌1雄）建立中間球海膽混交家系，分別命名為p7和p3。受精后6個(gè)月，在中間球海膽的稚海膽時(shí)期，p7和p3家系分別取樣50只和100只，用75%酒精固定，24

15、小時(shí)后換一次固定液即可，4冰箱中保存，準(zhǔn)備進(jìn)行分子標(biāo)記分析。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 dna提取1. 將每只海膽分離開來，蒸餾水反復(fù)沖洗，分別放入1.5ml離心管中。2. 滅菌后的小剪刀在海膽的殼上剪一個(gè)小口，然后加入dna裂解液(10mmoll tris-cl，50m moll kc1，0.5 tween-20，ph8.0）。3. 加入1l蛋白酶k（0.3mg/ml）4. 55恒溫裂解3h后，升溫到85保持15min以滅活蛋白酶k。5. 裂解液放入-20冰箱中保存。2.2.2 pcr擴(kuò)增1.以稚膽的裂解液為dna模板，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr反應(yīng)體系見表1。表1 中間球海膽微衛(wèi)星擴(kuò)增反應(yīng)體系t

16、ab.1 the stock for mocrosatellite in sea urchin反應(yīng)體系需加體積海膽幼蟲裂解液 1ul10buffer 2.5ul引物（10um）1.0ul/eachdntp (10 mm)2.2ulmg2+(25mm)1.5ultaq (5u/ul)0.35ulddh2o15.45ultotal25ul2. pcr反應(yīng)條件預(yù)變性：94，5分鐘；變 性：94，40秒；退 火：退火溫度 40秒；延 伸：72，1分鐘；循 環(huán)：從2到4共34個(gè)循環(huán)； 72下最后延伸5分鐘； 4保存。3. 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳分離制膠： 30%丙烯酰胺貯備液：丙烯酰胺（acrylamide）固

17、體 145gn,n-甲叉雙丙烯酰胺（methylene bisacrylamide） 5g加入500ml超純水，32水浴攪拌溶解備用。 5tbe buffer（2l）tris 109gedta 9.2ghbo3 55.6g超純水定容至2l 10%過硫酸銨10g過硫酸銨固體溶解于100ml超純水中，4避光保存。 temed(n,n,n,n-四甲基乙二胺)，4避光保存。 8%page膠制備30%丙烯酰胺 13.3ml5tbe buffer 10.0ml超純水 26.5ml10%過硫酸銨 0.5mltemed 50.0l灌膠：8%page膠配置好后，后立即灌膠，室溫凝膠1小時(shí)以上，膠厚約為1mm。電

18、泳：組裝電泳槽，放入緩沖液（1tbe），于200v預(yù)電泳20分鐘，將pcr產(chǎn)物與3ul上樣緩沖液混合，每個(gè)點(diǎn)樣孔點(diǎn)樣3ul，200v電泳2小時(shí)。染色和顯色： 電泳結(jié)束后，將膠取下，用純水沖洗一次，染液（0.4gagno3溶于500ml超純水）中染色10分鐘。 再將膠用純水沖洗一次。 配置顯色液（10gnaoh、0.2g無水na2co3溶于500ml超純水中，加入2-3ml甲醛），將膠在顯色液中顯色到適合程度為止。 用純水沖洗，停止染色。2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析微衛(wèi)星產(chǎn)物電泳結(jié)果經(jīng)肉眼觀察，將每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因依據(jù)片斷大小分別命名為a、b、c、按照共顯性標(biāo)記進(jìn)行基因型統(tǒng)計(jì)，帶型不清晰或多次擴(kuò)增

19、未見產(chǎn)物的個(gè)體用“.”表示。結(jié)果輸入popgene32軟件，進(jìn)行分析。根據(jù)nei法分別求算大小兩個(gè)海膽群體的基因多樣性（nei指數(shù)）：h = (nei，1974；nei，1978)。其中qi為第i個(gè)位點(diǎn)上的等位基因數(shù)，n為檢測到的位點(diǎn)數(shù)。ht為種群內(nèi)總的基因多樣性，計(jì)算公式為：n為位點(diǎn)總數(shù)，和分別為總的種群中i位點(diǎn)上的顯性頻率和隱性頻率。hs為種群內(nèi)的基因多樣性。shannon指數(shù)(i)的計(jì)算公式為：，其中為產(chǎn)物條帶的表型。第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1微衛(wèi)星擴(kuò)增位點(diǎn)分析本實(shí)驗(yàn)在zhou等20開發(fā)的中間球海膽微衛(wèi)星引物中，挑選多態(tài)性較好、擴(kuò)增帶型清晰的10對(duì)引物，用于中間球海膽稚膽的微衛(wèi)星擴(kuò)增及群體遺

20、傳多樣性分析。引物序列及相應(yīng)參數(shù)見表2。所有引物在p7和p3海膽群體中均擴(kuò)增出24個(gè)等位基因，平均每對(duì)引物擴(kuò)增出2-3個(gè)等位基因，片段大小在100-400bp之間。其中引物ints20在部分海膽個(gè)體的擴(kuò)增電泳結(jié)果見圖1。表2. 實(shí)驗(yàn)所用微衛(wèi)星引物序列及相應(yīng)參數(shù)tab.2 details of microsatellite primers of sea urchin引物名稱引物序列（5-3）退火溫度（）等位基因數(shù)（個(gè)）st52st21ints01f:tttgggtggatcctgtcgtg5922r:tcacaattccgtcagggctcints02f:tgtatggtctgtcggaaagc

21、5522r:gatgcaacaattgacggagcints04f:gcgatttgtaaacctgggga5923r:aggtaggagtcatgtcgtcgints10f:tgatggtttggggcatga5733r:tggtatgtcgggagtgtgaints12f:ctagcgtgtgtcaagcacg5722r:cggagttgaagccgttgtcints14f:gggaagttttccccactgac5733r:tgtccataacgccacattcgints19f:tccatagcaaccatgcagc5722r:ccctcgataacagcatcagcints20f:gg

22、tctacagacatccagtgc5922r:gcaaatgttcaggcttctggst16f:cgtaagaaacttttgggg6132r:ccatacaccattcaggctst24f:tcagctattagtgccctttt5733r:tgcgagtgtttgttttgctotal24243.2各位點(diǎn)等位基因情況兩個(gè)群體各位點(diǎn)等位基因頻率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3，基因型頻率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。由表可以看出， 等位基因inst02-c，st16-c在p7群體中出現(xiàn)（f=0.3974和0.4302），而在p3群體中缺失，而inst04-c在p3群體中出現(xiàn)（f=0.0988），而在p7群體中未被檢測到

23、。等位基因inst01-a,inst02-b,inst04-c,inst10-a,st16-b在p3群體中的頻率顯著高于p7群體中的頻率（p0.05），而等位基因inst01-b,inst02-c,inst10-c, inst14-c,inst16-c在p7群體中的頻率顯著高于p3群體中的頻率（p0.05）。表5. p7和p3海膽群體遺傳學(xué)指標(biāo)比較分析tab.5 statistics of genetic index of eight-armed st52 puerile sea urchin population群體類型naneiobs_hetexp_hetneip72.4000.51641

24、.97680.57330.72280.26690.51670.17450.45990.15830.45430.1565p32.4000.51641.99750.42090.74210.19840.62350.14750.48240.10770.47960.1070na：平均觀測等位基因數(shù)； ne：平均有效等位基因數(shù)i：平均香濃氏指數(shù)； obs_het：實(shí)際雜合度exp_het：期望雜合度； nei：奈氏雜合度第四章 討 論4.1 海膽稚膽dna提取及pcr擴(kuò)增一般來說，海洋生物dna提取方法多為肌肉組織“酚-氯仿抽提法”，這種方法需要反復(fù)抽提以去除蛋白質(zhì)，保證dna的純度和質(zhì)量。該過程較繁瑣，

25、且經(jīng)反復(fù)抽提，dna損失量很大。對(duì)于成體來說，往往組織量較大，因此可以在一定程度上彌補(bǔ)dna在抽提過程中的丟失。而對(duì)于海洋生物發(fā)育早期來說，大多個(gè)體組織較小，需要顯微觀察才能分辨其形態(tài)結(jié)構(gòu)，如果采用傳統(tǒng)的“酚-氯仿抽提法”，由于dna大量的損失很難獲得足夠量的dna用于后續(xù)分子生物學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)參照前人在扇貝擔(dān)輪幼蟲中的研究報(bào)道24，摸索出了適用于海膽稚膽階段dna的裂解方法，并將裂解液直接用于pcr擴(kuò)增模板，進(jìn)行了微衛(wèi)星標(biāo)記的擴(kuò)增分析，得到了清晰的微衛(wèi)星擴(kuò)增帶譜。微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果說明該方法可以得到較好的幼蟲模板dna，可以用于后續(xù)的分子標(biāo)記分析。該方法不需抽提可直接用于pcr擴(kuò)增，不但防止了抽

26、提步驟引起的dna損失，而且簡化了實(shí)驗(yàn)過程。另外，該方法不但可以將微小的幼蟲階段納入到分子標(biāo)記的研究中來, 便于更全面的掌握海膽整個(gè)生命周期內(nèi)的遺傳結(jié)構(gòu)變化動(dòng)態(tài),擴(kuò)大了海膽遺傳育種學(xué)的研究范圍和研究內(nèi)容，也為海膽標(biāo)記輔助育種等遺傳學(xué)研究工作提供了早期取樣研究的實(shí)例，大大簡化該方向的研究步驟，且節(jié)約了人力、物力及寶貴的時(shí)間。4.2親本數(shù)目對(duì)海洋生物遺傳結(jié)構(gòu)的影響雜合度作為反映群體遺傳變異的重要參數(shù)，其大小可反映群體遺傳變異程度的高低。通常，雜合度高的生物群體更容易適應(yīng)環(huán)境變化，忍受自然選擇壓力并可能具有更多的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀。一般認(rèn)為，用于檢測遺傳變化的標(biāo)記在群體中的平均雜合度的范圍應(yīng)該在0.3-0

27、.8之間才有實(shí)際意義。戰(zhàn)愛斌等檢測了仿刺參6個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的平均觀測雜合度(0.36l1)和平均期望雜合度(0.6412) 25。丁君等研究結(jié)果顯示，3個(gè)蝦夷馬糞海膽?zhàn)B殖群體的平均觀測雜合度為0.4340-0.4618，期望雜合度為0.4494-0.5079，雜合度的平均觀察值都低于雜合度的平均期望值，結(jié)果顯示3個(gè)蝦夷馬糞海膽?zhàn)B殖群體的遺傳多樣性較低，這可能與海膽?zhàn)B殖群體育苗時(shí)所取父母本海膽較少，且進(jìn)行累代繁殖有關(guān)，海膽育苗、養(yǎng)殖過程中的這些問題將導(dǎo)致海膽子代群體中親緣關(guān)系較近，一些雜和位點(diǎn)丟失，建議海膽育苗、養(yǎng)殖單位在較大范圍內(nèi)，選擇數(shù)量較多的親本海膽繁育后代，以保證養(yǎng)殖群體的雜和度保持在一個(gè)

28、較高水平。本實(shí)驗(yàn)所用海膽稚膽群體雜合度水平處于中等，但是用于產(chǎn)生這些個(gè)體的親本數(shù)均較少，推測將會(huì)存在不同程度的等位基因丟失、雜合度下降等的情況。 萬俊芬等26利用aflp標(biāo)記技術(shù)探討了不同的交配親本數(shù)對(duì)鮑養(yǎng)殖群體遺傳結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果表明，親本數(shù)少的ss群體的總位點(diǎn)數(shù)少于親本數(shù)多的ls群體,后者的一些低頻位點(diǎn)在前者中丟失，同時(shí)群體的位點(diǎn)頻率發(fā)生漂移，ss的低頻位點(diǎn)數(shù)目減少而高頻位點(diǎn)略有增加。另外統(tǒng)計(jì)了各群體的相似指數(shù)和雜合度，發(fā)現(xiàn)ss群體的相似指數(shù)低于ls,而雜合度高于ls群體?？傊后w的親本數(shù)減少會(huì)引起一些低頻位點(diǎn)丟失及位點(diǎn)頻率發(fā)生漂移，同時(shí)親本數(shù)過少會(huì)導(dǎo)致群體的雜合度暫時(shí)升高。qin等27

29、研究報(bào)道了海灣扇貝不同數(shù)目親本所產(chǎn)生的后代的遺傳結(jié)構(gòu)變化，發(fā)現(xiàn)隨著親本數(shù)目的減少，出現(xiàn)了越來越嚴(yán)重的低頻位點(diǎn)丟失和雜合度下降的現(xiàn)象。本研究也發(fā)現(xiàn)親本數(shù)目較少的p3群體雖然等位基因數(shù)量與p7群體相同，但基因型數(shù)量少于p7群體。兩組之間雜合度尚未出現(xiàn)顯著差異，但p3群體雜合度略高于p7群體，推測也出現(xiàn)了雜合度暫時(shí)升高的情況，這些研究結(jié)果與以上報(bào)道相似。隨著海膽人工育苗廣泛開展，累代養(yǎng)殖和親本數(shù)目較少的情況時(shí)常出現(xiàn)，該研究對(duì)中間球海膽不同親本數(shù)目所產(chǎn)生的群體進(jìn)行了dna直接裂解和微衛(wèi)星擴(kuò)增分析，比較了兩個(gè)群體的基因頻率和各遺傳學(xué)指標(biāo)，為評(píng)價(jià)中間球海膽?zhàn)B殖現(xiàn)狀以及遺傳育種工作提供了基礎(chǔ)資料。致 謝本論

30、文從選題的確定，論文的寫作、修改到最后定稿都是在指導(dǎo)老師悉心指導(dǎo)下完成的。秦老師多次詢問實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，幫我分析、解決我在實(shí)驗(yàn)中遇到各種難題，不厭其煩，精心點(diǎn)撥，熱忱鼓勵(lì)。秦老師淵博的專業(yè)知識(shí)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)以律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實(shí)無華、平易近人的人格魅力對(duì)我影響深遠(yuǎn)。不僅使我掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。在此，謹(jǐn)向?qū)煴硎境绺叩木匆夂椭孕牡母兄x！感謝兩位師兄，感謝你們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中對(duì)我的幫助，正是由于你們的幫助和支持，我才能克服一個(gè)一個(gè)的困難和疑惑，直至本文的順利完成！ 最后，衷心感謝在校學(xué)習(xí)期間所有老師對(duì)我的栽培

31、、支持和鼓勵(lì)，感謝我深愛的父母和一直支持、幫助我的親戚朋友們！衷心地感謝在百忙之中參加此結(jié)題報(bào)告答辯的各位專家、教授！ 參考文獻(xiàn)1 李琪,木島明博.長牡蠣(crassostrea gigas)微衛(wèi)星克隆快速分離及特性分析j.海洋湖沼,2004 ,4(35) :364 - 36912 徐鵬,周嶺華,田麗萍,等. 從中國對(duì)蝦 ests 中篩選微衛(wèi)星標(biāo)記的研究j.水產(chǎn)學(xué)報(bào),2003 ,27 (3) :213 21813 naish ka ,skibinski s o. tetranucleotide microsatellite loci for indian major carpj . journ

32、al of fish biology , 1998 , 53 :886 - 88914 尹紹武,廖經(jīng)球,黃海,等.海南近海點(diǎn)帶石斑魚野生和養(yǎng)殖群體微衛(wèi)星多態(tài)分析j .應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2008 ,14(2) :215 - 219.5 譚杰,孫慧玲,劉萍,等. 3個(gè)仿刺參地理種群遺傳變異的微衛(wèi)星dna分析j .水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2007, 31(4) :437 - 442.6 杜博,龔世園,童馨,等.皺紋盤鮑和盤鮑南方養(yǎng)殖群體遺傳變異的微衛(wèi)星分析j .南方水產(chǎn),2007 ,3(6) :22 - 29.7 高緒生,常亞青.中國經(jīng)濟(jì)海膽及其增養(yǎng)殖m.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1999.8 常亞青,王子臣,孫

33、培海,等.蝦夷馬糞海膽的海區(qū)渡夏、室內(nèi)中間培育及工廠化養(yǎng)成j.中國水產(chǎn)科學(xué),1999,6 (2) :66-69.9 常亞青,王子臣,宋堅(jiān),等.四種海膽雜交的可行性及幼體早期發(fā)育的研究j.水產(chǎn)學(xué)報(bào),2000,24 (3) :211-216.10 王子臣,常亞青.蝦夷馬糞海膽人工育苗的研究j.中國水產(chǎn)科學(xué),1997, (4) :60-66.11 王子臣,常亞青.經(jīng)濟(jì)類海膽增養(yǎng)殖研究進(jìn)展及前景j.海洋科學(xué),1997, (6) :20-22.12 王麗梅,韓家波,許偉定,等.中間球海膽與光棘球海膽雜交及子一代人工育苗技術(shù)j.水產(chǎn)科學(xué),2003,22(2):10-111.13 王麗梅,韓家波,董穎,等.中間球海膽與光棘球海膽雜交子一代的生長比較研究j. 水產(chǎn)科學(xué),2004,23(2):1-31.14 常亞青,王子臣,宋堅(jiān),等.四種海膽雜交的可行性及子代的早期發(fā)育j.水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2000, 24(3): 211-216.15 王吉橋,程 鑫 ,楊義等.不同密度的蝦夷馬糞海膽與仿刺參混養(yǎng)的研究j .大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào) ,2007 ,22 (2) :102 - 108.16 durham j m , melville r v . a classification of echinoidsj.j paleontol,1957,31:242-2