李建兵白酒中酸的測定

1、白酒中酸的測定對白酒而言，它的酸類物質(zhì)主要由有機(jī)酸組成，主要來源于酒醅 發(fā)酵過程中的乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、己酸和高級脂肪酸等。酸類 影響白酒的口感和后味，是影響口味的主要因素，酸不足是造成后味 寡淡的主要原因。 其大部分以游離狀態(tài)存在，小部分以鹽類形式存 在。計算白酒總酸時，以有機(jī)酸為主，折算為乙酸的含量。根據(jù)有機(jī)酸的物理化學(xué)性質(zhì)可將有機(jī)酸分成三類：易揮發(fā)性酸、 不揮發(fā)性酸、熱不穩(wěn)定性酸。易揮發(fā)性酸主要有 C1 一 C6的小分子酸, 它們飽和蒸汽壓低，易揮發(fā)；不揮發(fā)性酸包括 C7C12的飽和脂肪 酸和不飽和脂肪酸、苯環(huán)酸等；熱不穩(wěn)定性酸包括琥珀酸、草酸、檸 檬酸、蘋果酸等多元酸。有機(jī)酸分析過

2、去多采用氣相色譜法，由于有 機(jī)酸的強(qiáng)極性及部分有機(jī)酸對熱的不穩(wěn)定性和吸附性，多種檢測方法如液相色譜法、酶法、電泳法及復(fù)合各種前處理技術(shù)廣泛應(yīng)用到有機(jī) 酸的測定中。酸度是指利用酸堿中和原理測定，其定義為100克酒醅滴定消耗 氫氧化鈉的毫克分子數(shù)，以度表示。酒中有機(jī)酸，以酚酞為指示劑， 用氫氧化鈉溶液中和滴定，以乙酸計總酸量，單位為每升克數(shù)。1易揮發(fā)性酸的測定易揮發(fā)性酸主要指短鏈脂肪酸，包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、 異丁酸、戊酸、異戊酸、己酸、異己酸。易揮發(fā)性酸的測定以氣相色 譜居多。由于它們揮發(fā)性較強(qiáng)，為保證定量的準(zhǔn)確性，一般不進(jìn)行前 處理。其測定方法如下.1.1直接進(jìn)樣法直接進(jìn)樣法操作簡單，在

3、測定易揮發(fā)性酸快速準(zhǔn)確，重復(fù)性好。由于 直接進(jìn)樣法不涉及前處理，在測定有機(jī)酸特別是揮發(fā)性較強(qiáng)的酸時定 量更為準(zhǔn)確，但直接進(jìn)樣 法沒有濃縮過程，低于檢出限痕量的有機(jī) 酸不能直接測定。氣相色譜法直接進(jìn)樣能否檢測出物質(zhì)的某一組分主要取決于兩 個條件，一是被測物質(zhì)的這一組分能否被洗出色譜柱，這取決于其組分和色譜柱固定液之間的特性，遵循相似相溶的原理；二是被測物質(zhì) 組分從色譜柱中洗出后，檢測器是否對它有響應(yīng)，這主要取決于檢測 器的類型、性能，像氫火焰離子化檢測器只對大部分有機(jī)物有靈敏的 信號，對在氫火焰中不能電離或電離很少的物質(zhì)1 .2酯化處理間接進(jìn)樣法能酯化處理后測定乳酸等有機(jī)酸的色譜柱其固定液多為

4、1, 4- 丁 二醇丁二酸酯（BDS，乙二醇己二酸聚酯（PEGA等。以內(nèi)徑3mm, 長1.5mm勺BDS玻璃柱為例。試樣的制備：取10ml酒樣于小燒杯中，加水稀釋至約20ml,準(zhǔn)確加 入內(nèi)標(biāo)物2-乙基正丁酸0.35ml，在ph計上（電磁攪拌下），用0.03M 的四丁基氫氧化銨小心中和至PH=9定量移入75ml于蒸發(fā)皿中，于水 浴上蒸干，冷至室溫，加入5ml丙酮，充分溶解，吸取清液2ml于10ml 帶塞試管中，用計量用微量注射器加入芐基溴，室溫下放置 2h,使酸 成為芐酯，即為色譜樣品。芐基溴加入量式中： 芐基溴加入量=171 .04 CV 1.31.4385C四丁基氫氧化銨的摩爾濃度；V中和時

5、四丁基氫氧化銨所用毫升數(shù)；1.3 為保證芐酯化完全，芐基溴用量比理論量增加 30%2/5 試樣分取比例1.438 芐基溴的相對密度主要色譜條件氣相色譜儀：天美7890ll,N2000工作站，配FID檢測器；色譜柱；BDS 玻璃填充柱，內(nèi)徑3mm長1.5m。柱溫150 C，汽化室與檢測室溫度 170 C,氣體流速：氮氣 55ml/min,氫氣50ml/min，空氣 1000ml/min 操作：按常規(guī)色譜操作，進(jìn)樣量2ml計算：用面積內(nèi)標(biāo)法，工作站自動積分計算，即可求出乳酸的含量。1. 3頂空一固相微萃?。℉S SPME法頂空一固相微萃取將萃取、濃縮、進(jìn)樣集于一體，使實驗過程大 大簡化；使用很少或

6、不使用有機(jī)溶劑，避免了對環(huán)境和人體的危害； 測定揮發(fā)酸時精確度高，準(zhǔn)確性好。，頂空一固相微萃取法與萃取頭 材料的極性有較大關(guān)系，隨著碳鏈的延長，有機(jī)酸的極性逐漸減弱， 一種萃取頭不能滿足不同極性酸的測定； 基質(zhì)也會對萃取頭的靈敏度 造成影響，降低檢出限或使結(jié)果不穩(wěn)定；萃取頭要定期更換保證定量 結(jié)果的準(zhǔn)確。2不揮發(fā)性酸的測定不揮發(fā)性酸主要包括庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二酸等長鏈有 機(jī)酸。它們比較柔和，能與多種成分親和，對酒的后味起著緩沖、平 衡作用，使酒質(zhì)調(diào)和。由于它們沸點較高不易揮發(fā)，可以通過前處理 濃縮富集測定。2. 1旋蒸濃縮一直接進(jìn)樣法取50 mL酒樣，加人1. 0 mL的2乙基丁酸、一

7、酸、十七酸內(nèi) 標(biāo)溶液，用氫氧化鈉溶液在電磁攪拌下中和至 pH8. 0,然后將溶液轉(zhuǎn) 移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，以低于40 C的水浴將酒液減壓濃縮至干，殘渣以 1. 8 mL 10 %甲酸溶解后轉(zhuǎn)移至刻度試管中，再用 4 mL 95 %乙醇 分?jǐn)?shù)次洗滌燒瓶，將洗液與甲酸液合并，進(jìn)樣2 L GC測定。2 . 2固相萃取（SPE）法固相萃取就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目 的先用2 mL甲醇，再用2 mL pH在4. 55. 5之間的40%（v /v）乙醇 活化萃取柱，將50 mL酒樣（加入1 mL 1

8、00 mg/L的壬酸做內(nèi)標(biāo)）以5 mIZmi n的速率過柱，過柱后用1 mL二氯甲烷洗脫，取1mL進(jìn)GC分析。2. 3衍生法由于不揮發(fā)酸的沸點高，難氣化，因此高效液相色譜法在測定時較簡 便。但羧酸化合物在紫外光區(qū)無明顯吸收， 引人在紫外光區(qū)有強(qiáng)吸收 的基團(tuán)，就可進(jìn)行紫外檢測。羰基化合物可適用于成肟或成腙的衍生 試劑處理后作色譜分析，常用的衍生試劑有 O一正丁基羥胺、2, 4一 二硝基苯肼、2一 bromo 2 acet on aphth one 等3熱不穩(wěn)定酸的測定3. 1酶法酶法最初主要用于葡萄汁和葡萄酒中蘋果酸、乳酸、檸檬酸的定量測定。然而像酒石酸、乙酸、L一維生素C脫氫抗壞血酸、蟻酸、

9、DL葡萄糖酸、D一異檸檬酸、草酸、琥珀酸等有機(jī)酸也可以用酶法測 定。AOA將酶法作為測定檸檬酸的仲裁法方法的原理是通過測定輔酶NAD或者NADP量的增減，NAD和NADP的吸收波長在340 am處。3. 2高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜是色譜法的一個重要分支， 以液體為流動相，采用 高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、 緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后， 進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析根據(jù)樣品前處理可分為兩類：一是將樣品稀釋過濾后直接進(jìn)樣分 析；另一類涉及復(fù)雜的前處理。前處理的主要是為了避免糖類、色素 等能與有機(jī)酸一同洗脫的物

10、質(zhì)的干擾。主要的方法有離子交換樹脂吸 附萃取、SPE衍生等3. 3毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳： 是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電 場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn) 分離的電泳分離分析方法。毛細(xì)管電泳的飛速發(fā)展得益于其優(yōu)勢：高分辨力，簡便，自動化， 分析時間短，試劑與樣品的消耗少，簡便的樣品前處理。通過研究緩沖液的選擇、濃度、pH等對分離效果的影響，在確定 最優(yōu)條件：5 mol / L偏苯三甲酸酯和1 mol/L溴化十四烷基三甲銨為 緩沖液，pH9. 0, 10 min內(nèi)完成全部色譜分析。保留時間與色譜峰的 保留面積RS小于1%和4%，大多數(shù)物質(zhì)的檢出限在10

11、6M之間。毛細(xì)管電泳法相對于HPLC G（法、酶法，雖然重現(xiàn)性較差，但其 分析時間短、試劑樣品消耗少、靈敏度高的優(yōu)點測定乳酸：乳酸是白酒中一種重要的有機(jī)酸， 在濃香型白酒中，它的含量僅 次于己酸，其含量的多少不但對白酒的口味和后味有較大影響， 而且 也直接反映了酒醅在發(fā)展過程中是否正常1、色譜直接進(jìn)樣法測定白酒中的乳酸在理論上是一種最快、最 準(zhǔn)確的方法，但到目前為止，還沒有真正找到一根既經(jīng)濟(jì)、分離效果 又好、經(jīng)久耐用，且較易制備的色譜柱。因此，它只能作為白酒色譜 的一個發(fā)展方向酯化處理間接進(jìn)樣法測定白酒中乳酸， 也是一種較準(zhǔn)確的定量辦 法，它同直接進(jìn)樣法相比，有一定的可操作性。目前，凡是采用1

12、,4- 丁二醇丁二酸酯或聚二甘醇己二酸酯作固定液的色譜柱大多可以 測定酯化后的有機(jī)酸，但是此法操作繁瑣，時間長，不易掌握，且此 類色譜柱也沒有被廣泛使用2、比色法：比色法是常規(guī)化學(xué)分析中一種經(jīng)常使用的分析方法, 它可以對白酒中的乳酸進(jìn)行有效的定性定量分析， 酒樣中乳酸的含量 可在顯色后與乳酸標(biāo)準(zhǔn)系列管的比色中得分為目視比色法和光電比色法，兩種方法都是以朗伯 -比爾定| (A= e be)為基礎(chǔ)。目視比色法 常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法，該法采用一組由質(zhì)料 完全相同的玻璃制成的直徑相等、 體積相同的比色管，按順序加入不 同量的待測組分標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別加入等量的顯色劑及其他輔助試劑， 然后稀釋至一

13、定體積，使之成為顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。 再取一定 量的待測組分溶液于一支比色管中，用同樣方法顯色，再稀釋至相同 體積，將此樣品顯色溶液與標(biāo)準(zhǔn)色階的各比色管進(jìn)行比較，找出顏色深度最接近于樣品顯色溶液的那支標(biāo)準(zhǔn)比色管， 如果樣品溶液的顏色 介于兩支相鄰標(biāo)準(zhǔn)比色管顏色之間，則樣品溶液濃度應(yīng)為兩標(biāo)準(zhǔn)比色 管溶液濃度的平均值。標(biāo)準(zhǔn)系列法的主要優(yōu)點是設(shè)備簡單和操作簡便， 但眼睛觀察存在主觀誤差，準(zhǔn)確度較低。光電比色法是在光電比色計上測量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度一 將吸光 度對濃度作圖，繪制工作曲線，然后根據(jù)待測組分溶液的吸光度在工 作曲線上查得其濃度或含量。與目視比色法相比，光電比色法消除了 主觀誤差，提

14、高了測量準(zhǔn)確度，而且可以通過選擇濾光片來消除干擾， 從而提高了選擇性。但光電比色計采用鎢燈光源和濾光片， 只適用于 可見光譜區(qū)和只能 得到一定波長范圍的復(fù)合光，而不是單色光束3、綜合法是指利用理化分析和色譜分析數(shù)據(jù)，求取乳酸的含量。己酸、乙酸、乳酸、丁酸B種酸占有機(jī)酸總量的90%以上，以總酸含量 減去色譜柱流出各單一酸種的含量即得乳酸的含量。離子色譜法測酸優(yōu)點：離子色譜法同時測定蒸餾白酒中七種有機(jī)酸，具有簡便 快捷、靈敏度高、干擾少等優(yōu)點。目前氣相色譜法通過運用白酒專用 大口徑毛細(xì)管柱能定量測定的白酒中的主要酸有乙酸，已酸和丁酸， 而含量較多的乳酸卻測不出來。在陰離子交換為主要分離機(jī)理的色譜

15、柱AS11-H（上醇類可以與有機(jī)酸較好實現(xiàn)分離機(jī)理：白酒樣品經(jīng)超純水稀釋后可直接進(jìn)樣檢測，待測的甲酸、 乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸和乳酸在陰離子交換機(jī)理為主的分 柱上分離，再經(jīng)抑制型電導(dǎo)檢測器直接檢測。主要儀器：ICS3000型高效離子色譜儀（美國Dionex公司），配有: AS11-HC+AG11-Hmm 陰離子分析柱和保護(hù)柱、CD3000-ASRS4mm 陰離子抑制器、電導(dǎo)檢測器；MILLIPOR超純水系統(tǒng)，Chromeleo n6.8 色譜工作站試劑和樣品：標(biāo)準(zhǔn)試劑：色譜純的己酸、乙酸、丁酸、乳酸試劑?溶劑：優(yōu)級純的無水乙醇測定條件：分析柱：AS11-HC+AG11-HC4mm陰離子分

16、析柱和保 護(hù)柱進(jìn)樣體積：10ul淋洗液流速：1.5ml/min檢測器溫度：30C壓力：2200psi （15.15Mpa）洗淋液E1去離子水E25mM NaOHE310mM NaOHE4100%甲醇淋洗液配制：稱50g優(yōu)級醇NaOl加50ml去離子水定溶100ml;吸取0.26ml飽和NaO定溶至1000m,配制成5mMNaOH吸取5.23 ml飽和NaO定溶至1000ml,配制成100mMNaQH操作步驟：1、樣品預(yù)處理白酒溶液清潔后用0.22um水相過濾頭過濾，直接進(jìn)樣2、標(biāo)準(zhǔn)樣的制備將無水乙醇用去離子水稀釋至50%vo待用按一定濃度配置酸的混合酸標(biāo)樣用50%vo I的乙醇溶液定溶到100

17、ml容量瓶中3、標(biāo)準(zhǔn)曲線各有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：樣品編號單位12345乳酸mg/100ml1520253035乙酸mg/100ml2530354045丁酸mg/100ml510152025己酸mg/100ml3035404550分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析。以峰面積為橫坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)分別繪制個有機(jī)酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，所測得有機(jī)酸回歸方程項目名稱濃度范圍Mg/100ml回歸方程RSD/%r乳酸1535Y=0.019x+0.0271.3799.9755乙酸2545Y=0.023x+0.1072.5499.9257丁酸525Y=0.013x+0.0740.5399.9211己酸3050Y=0.01

18、0x+0.0203.6399.97344樣品測定有機(jī)酸定性根據(jù)保留時間對照標(biāo)準(zhǔn) 樣品確定 有機(jī)酸的出峰順序為乳酸、乙酸、丁酸、己酸。定量采用 標(biāo)準(zhǔn)曲線法，根據(jù)樣品的峰面積，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得出各種有機(jī)酸的濃 度。出師表兩漢：諸葛亮先帝創(chuàng)業(yè)未半而中道崩殂， 今天下三分，益州疲弊，此誠危急存亡之秋也。然侍衛(wèi)之臣 不懈于內(nèi)，忠志之士忘身于外者，蓋追先帝之殊遇，欲報之于陛下也。誠宜開張圣聽，以光 先帝遺德，恢弘志士之氣，不宜妄自菲薄，引喻失義，以塞忠諫之路也。宮中府中，俱為一體；陟罰臧否，不宜異同。若有作奸犯科及為忠善者，宜付有司論其 刑賞，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使內(nèi)外異法也。侍中、侍郎郭攸之、費祎、董允等，此皆良實，志慮忠純，是以先帝簡拔以遺陛下：愚 以為宮中之事，事無大小，悉以咨之，然后施行，必能裨補(bǔ)闕漏，有所廣益。將軍向?qū)櫍孕惺缇?，曉暢軍事，試用于昔日，先帝稱之曰能”，是以眾議舉寵為督:愚以為營中之事，悉以咨之，必能使行陣和睦，優(yōu)劣得所。親賢臣，遠(yuǎn)小人，此先漢所以興隆也； 親小人，遠(yuǎn)賢臣，此后漢所以傾頹也。 先帝在時, 每與臣論此事，未嘗不嘆息痛恨于桓、 靈也。侍中、尚書、長史、參軍，此悉貞良死節(jié)之臣， 愿陛下親之、信之，則漢室之隆，可計日而待也 k!T臣本布衣，躬耕于南陽，茍全性命于亂世，不求聞達(dá)于諸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉 屈，三