梅毒檢測.ppt

1、梅毒實驗室診斷技術及梅毒實驗室診斷技術及 梅毒實驗室檢測技術規(guī)范簡介梅毒實驗室檢測技術規(guī)范簡介 中國疾病預防控制中心性病控制中心中國疾病預防控制中心性病控制中心 中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所 尹躍平尹躍平 20112011年年9 9月月1919日日 合肥合肥 n背景介紹背景介紹 n梅毒實驗室檢測技術梅毒實驗室檢測技術 n梅毒血清學試驗檢測技術進展梅毒血清學試驗檢測技術進展 n梅毒實驗室檢測策略探討梅毒實驗室檢測策略探討 n梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿）簡介梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿）簡介 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 背景介紹背景介紹 （一期和二期梅毒更加真實反映梅毒疫情趨勢）（一期和二

2、期梅毒更加真實反映梅毒疫情趨勢） 全國梅毒流行狀況全國梅毒流行狀況 研究點 首次調(diào) 查人數(shù) 梅毒感染梅毒感染者中hivhiv感染 人數(shù)率%人數(shù)率%人數(shù)率% 常州4136215.01016.11013.3 揚州49516533.32817.07314.7 深圳53315228.51912.5417.7 廣州310206.555/20134.2 合計175139922.86215.51377.8 5 msmmsm人群梅毒和人群梅毒和hivhiv感染率感染率 n衛(wèi)生部于衛(wèi)生部于20102010年年6 6月月3 3日下發(fā)了日下發(fā)了 關于關于中國預防與控制梅毒規(guī)中國預防與控制梅毒規(guī) 劃（劃（2010-2

3、0202010-2020年）年） n衛(wèi)生部衛(wèi)生部20112011年年2 2月月1212日下發(fā)日下發(fā)預預 防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳 播工作實施方案播工作實施方案 n整合到國務院即將下發(fā)的整合到國務院即將下發(fā)的中中 國預防控制艾滋病五年行動計國預防控制艾滋病五年行動計 劃（劃（21011-201521011-2015年）年） 6 衛(wèi)生部下發(fā)相關政策衛(wèi)生部下發(fā)相關政策/ /規(guī)劃文件規(guī)劃文件 主要措施：主要措施： n廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識 n開展綜合防治，阻斷梅毒傳播開展綜合防治，阻斷梅毒傳播 n提高監(jiān)測檢測質(zhì)量，開展主動檢測，

4、促進梅毒早期發(fā)現(xiàn)提高監(jiān)測檢測質(zhì)量，開展主動檢測，促進梅毒早期發(fā)現(xiàn) n提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務 n預防和控制先天梅毒預防和控制先天梅毒 n加強國際合作和應用性研究加強國際合作和應用性研究 圍繞圍繞規(guī)劃規(guī)劃防控策略，提出相應的工作設想防控策略，提出相應的工作設想 7 中國預防與控制梅毒規(guī)劃中國預防與控制梅毒規(guī)劃（2010-20202010-2020年）年） 梅毒實驗室檢測技術梅毒實驗室檢測技術 梅毒實驗室檢測的意義梅毒實驗室檢測的意義 n臨床服務臨床服務 篩查、確定現(xiàn)癥梅毒患者；判斷療效。篩查、確定現(xiàn)癥梅毒患者；判斷療效。 n梅毒篩查梅毒篩查 篩查梅毒感染者，盡早發(fā)現(xiàn)梅毒患者（

5、篩查梅毒感染者，盡早發(fā)現(xiàn)梅毒患者（保證安全用血保證安全用血 預防經(jīng)血傳播病原體和抗體）預防經(jīng)血傳播病原體和抗體） n流行病學監(jiān)測流行病學監(jiān)測 掌握梅毒流行趨勢；了解不同高危人群的梅毒感染率掌握梅毒流行趨勢；了解不同高危人群的梅毒感染率 、發(fā)病率。、發(fā)病率。（msmmsm、fswfsw） 概述概述- -梅毒病原體梅毒病原體 小而纖細的螺旋狀微生物小而纖細的螺旋狀微生物 長長5 520m20m，粗細，粗細0.2m22年），年）， 但妊娠時仍可傳染給胎兒但妊娠時仍可傳染給胎兒, ,病期越長，傳染性病期越長，傳染性 越小越小; ; 概述概述- -梅毒的診斷梅毒的診斷 梅毒的診斷必須依靠病史、癥狀及實驗

6、檢查進行綜梅毒的診斷必須依靠病史、癥狀及實驗檢查進行綜 合分析。合分析。 梅毒的實驗室檢查結果對診斷有決定性意義。梅毒的實驗室檢查結果對診斷有決定性意義。 常用梅毒實驗室檢測方法常用梅毒實驗室檢測方法 n病原學檢測病原學檢測 n血清學檢測血清學檢測 病原學檢查病原學檢查 n原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、 扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液 或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗 視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣 斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮 光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方 式進行檢測。 n方法：病原學檢查的主要方法有暗視 顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光 法 病原學檢查的臨床意義病原學檢查的

7、臨床意義 n病原學方法直接鏡檢到梅毒螺旋體， 在臨床可確診梅毒，且具有快速、 方便、易操作的特點。 n螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的 最佳方法，對于患者的早期診斷、 及時治療、預后和盡早切斷傳染源 都有十分重要的意義。 n如未見到梅毒螺旋體，并不能排除 患梅毒的可能性， 16 梅毒血清學檢測方法梅毒血清學檢測方法 梅毒血清學檢測分類梅毒血清學檢測分類 (1) (1) （非特異性梅（非特異性梅 毒抗體）毒抗體） (2) (2) （特異性梅毒抗（特異性梅毒抗 體）兩類方法。體）兩類方法。 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理 n梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對螺旋體表面的

8、 脂質(zhì)作出免應答，在3周-4周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體 （反應素）?？贵w主要是igm和igg混合抗體。 n未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應素可長期存在。經(jīng) 正規(guī)治療后，反應素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。 問題問題2 2：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學試驗為什么有：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學試驗為什么有 定性和定量兩種檢測方法定性和定量兩種檢測方法 非梅毒螺旋體抗原血清學原理非梅毒螺旋體抗原血清學原理 n所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是 一樣 n方法包括： （1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (rpr) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（trust） （3）性病研究實驗室試驗 (vdrl)等。 n

9、基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇 n抗原抗體結合形成復合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉 眼所見 n上述方法的敏感性和特異性都基本相似 非梅毒螺旋體抗原血清學原理非梅毒螺旋體抗原血清學原理 vdrlvdrl試驗試驗usrrpr/trust vdrl試驗 n抗原組成：0.03%心磷脂 n 0.21%卵磷脂 n 0.90%膽固醇 n抗原需新鮮配制 不能保存 n待檢血清需滅活 n目前主要用于腦脊液檢查 n顯微鏡觀測結果 usr試驗 n是vdrl試驗的改良 n抗原組成：同vdrl，另含 （1）乙二胺四醋酸 (edta) 使抗原可長期保存，能 維持一年； （2）含有氯化膽堿 對 血清能起到化學滅活的作用 不

10、必加熱滅活 （3）制成試劑盒 使用 方便 rprrpr試驗試驗 n在usr試劑成分的基礎上 加入黑色碳 顆粒 作為沉淀的指示物 n用白色的硬紙片替代玻片 n血清不需要滅活 n不需要顯微鏡觀測結果 n可作定量試驗 n有現(xiàn)成的試劑盒 攜帶方便 n操作簡單 n價格便宜 非梅毒螺旋體抗原血清學原理非梅毒螺旋體抗原血清學原理 trust n其原理和成分與rpr 試驗相同 n用紅色的甲苯胺紅 替代了碳顆粒 n其余的特點均與rpr 相同 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理示意圖非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理示意圖 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點 1 1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。儀

11、器：水平旋轉(zhuǎn)儀。 2、定性試驗 n加樣：吸取0.05ml血清(漿)放在卡片圈中，并均 勻地涂布在整個圈內(nèi) n加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原 n反應：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在 亮光下觀察結果 3、定量試驗 n稀釋夜準備：在圈內(nèi)加入50ul生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將 鹽水涂開。 n加樣：吸取50ul血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 n 下同定性試驗。 rpr trust vdrl 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果判斷非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果判斷 滴度：出現(xiàn)凝集 反應的血清最高 稀釋倍數(shù)。 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血

12、清學試驗臨床意義 n早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療 后3個月，vdrl試驗抗體滴度下降2個稀釋度， 6個月下降4個稀釋度。 n 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 n 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 n 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約 50%病人血清反應仍為陽性。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義 n非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、 敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。 n早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。 n經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療 效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗

13、原血清學試驗特點 n非梅毒患者的梅毒血清反應呈陽性，此現(xiàn)象稱為梅 毒血清反應假陽性。 n 技術性假陽性反應 由于標本的保存不當（如細 胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也?作錯誤所造成。 n 生物學假陽性反應 是由于患者有其他疾病或生 理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點 n梅毒假陽性反應的處理 n技術性假陽性反應一般是由于操作錯誤引起的 假陽性反應，經(jīng)過重復試驗即可除外。 n對急性生物學假陽性反應，應做tpha（tppa） 等試驗進行排除。 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點 n前帶現(xiàn)象 指非梅

14、毒螺旋體抗原血清試驗中，有 時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、 不典型或陰性反應的結果，而臨床上又象二 期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出 現(xiàn)了陽性的結果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點 耐血清性（血清固定） 指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗 在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療 量不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經(jīng)系 統(tǒng)梅毒等因素有關。 梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理 n梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗 梅毒螺旋體抗原的抗體。 n感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗

15、呈陽性， 則患者終身陽性。 問題問題3 3：的定量試驗在的定量試驗在 梅毒診療中有意義嗎？梅毒診療中有意義嗎？ 梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法 n 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (tppa) n 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (tpha) n 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa） n 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (rt) n 熒光螺旋體抗體吸收試驗（fta-abs） n 化學發(fā)光免疫分析法（clia） n 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（wb） tppa/tphatppa/tpha tppa試驗原理與tpha試驗基本相同。tppa 試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代tpha試驗中 致敏羊紅

16、細胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺 旋體抗體結合，產(chǎn)生可見的凝集反應，具有較高的 敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為 方便，出結果較快。 + sheep red cellt.pallidum + sensitised cell sensitised cellspecific antibody hemagglutination tppa(tpha)tppa(tpha)試驗原理示意圖試驗原理示意圖 tppatppa試驗檢測試驗檢測流程流程 試驗前期準備 n微量振蕩儀 n試劑檢查 n25l移液器、吸頭 n記號筆、廢物缸 n有蓋濕盒 n工作服 n一次性手套、口罩、帽子 n生物安全柜 tpp

17、atppa試驗檢測流程試驗檢測流程 n使用前將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘。 n在96孔u型板上編上相應的待檢樣本的編號。 n按標簽標明量（0.6ml)向每瓶凍干致敏粒子（c液 ）和未致敏粒子（d液）各加入溶解用液（a液） 復溶，置室溫不得少于30分鐘。 tppatppa試驗檢測流程試驗檢測流程 n每份標本做4孔，加標本稀釋液（b液）至u型反應板，第1 孔100l，第24孔各25 l。 n用移液器取血清25 l至第1孔，反復混勻后取25 l至第2 孔，連續(xù)倍比稀釋至第4孔，最后1孔混勻后棄去25l。 n第3孔加未致敏粒子d液25 l，第4孔加致敏粒子c液25 l n將微量反應板置震蕩器

18、震蕩30秒。 n置微量反應板于有蓋濕盒內(nèi)，37孵箱或室溫（15- 30）靜置2小時后，觀察結果。 tppatppa試驗檢測流程試驗檢測流程 結果報告: n觀察加d液的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗 。 n陽性：第3孔不出現(xiàn)凝集，第4孔出現(xiàn)1+4+凝 集反應。 n陰性：第3、4孔均不產(chǎn)生凝集反應。 fta-absfta-abs試驗試驗 fta-abs試驗是檢測梅毒的“金標準”試驗。 其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上 經(jīng)吸收劑（用reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒 患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（ ftic）標記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗 體結合，形成熒光的抗原

19、抗體復合物。在熒光顯微鏡 下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應。 fta-absfta-abs試驗示意圖及結果試驗示意圖及結果 tpelisatpelisa試驗原理試驗原理 tpelisa試驗是用重組梅毒螺旋體抗 原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆 抗體酶標記物，形成抗原抗體復合物與酶 標記物結合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗陽性 反應。本法可用于大規(guī)模血清檢測。 梅毒免疫層析快速檢測方法梅毒免疫層析快速檢測方法 梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義 n 梅毒螺旋體試驗的作用是作為證實試驗， 它們可以幫助確定非梅毒螺旋體試驗陽性 反應是真陽性還是假陽性。 n 一旦這

20、些試驗呈陽性，則患者終身陽性。 梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義 n試驗特異性強，很少出現(xiàn)假陽性。據(jù)統(tǒng)計，在普通人群 中，有1%的生物學假陽性發(fā)生。 n如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清可使ftaabs試驗呈假陽 性反應，但大多數(shù)病例中螺旋體呈串株狀熒光。 n傳染性單核細胞增多癥，可能由于嗜異性抗體所致，可 使tpha呈假陽性。 n 麻風患者也可使特異試驗呈陽性。 梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義 n作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如rpr等)初篩 陽性標本的確證試驗。 n梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，tppa等梅毒螺旋體 抗體試驗試驗仍可陽性，故tp

21、pa等試驗陽性不 能作為療效觀察的指標。 ntppa等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應 結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖 早期晚期 一期 二期 早期潛伏 晚期潛伏 三期 治療前治療前 治療后治療后 陽性 陰性 梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖 早期 一期 二期 早期潛伏 晚期 晚期潛伏 三期 治療前治療前 治療后治療后 陽性陰性 梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯 rpr tppa trust tp-elisa 臨床意義 vdrl tp

22、-rt _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 + + + + 現(xiàn)癥梅毒現(xiàn)癥梅毒 + + - - 生物學假陽性生物學假陽性 - +- + 早期梅毒經(jīng)治療后早期梅毒經(jīng)治療后 先天梅毒的實驗室診斷方法先天梅毒的實驗室診斷方法 依據(jù)實驗指標診斷 n查到螺旋體 n其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升 n其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍 n檢測抗梅毒的igm特異性抗體陽性 n隨訪18個月觀察抗體的變化 梅毒血清學試驗檢測技術進展梅毒血清學試驗檢測技術進展 血清學試驗檢測方法分類名稱血清學試驗檢測方法分類名稱 n梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 梅毒螺旋體試驗梅毒螺旋體試驗 梅毒螺旋體抗體試驗梅毒螺旋體抗

23、體試驗 特異性梅毒螺旋體抗體血清學試驗特異性梅毒螺旋體抗體血清學試驗 n非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 非梅毒螺旋體試驗非梅毒螺旋體試驗 非梅毒螺旋體抗體試驗非梅毒螺旋體抗體試驗 非特異性梅毒螺旋體抗體血清學試驗非特異性梅毒螺旋體抗體血清學試驗 梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法進展梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法進展 n熒光螺旋體抗體吸收試驗熒光螺旋體抗體吸收試驗 fta-absfta-abs n梅毒螺旋體血球凝集試驗梅毒螺旋體血球凝集試驗 (tpha)(tpha) n梅毒螺旋體顆粒凝集試驗梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (tppa)(tppa) n酶聯(lián)免疫吸附試驗（酶聯(lián)免疫吸附試驗（t

24、elisatelisa） n化學發(fā)光試驗（化學發(fā)光試驗（cliaclia） n快速免疫層析法快速免疫層析法 (rt) (rt) n梅毒梅毒igmigm抗體檢測（抗體檢測（tp-tp-igmigm） n蛋白印跡試驗（蛋白印跡試驗（wbwb）等）等 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法進展非梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法進展 n性病研究實驗室試驗性病研究實驗室試驗 (vdrl)(vdrl) n不加熱血清反應素試驗（不加熱血清反應素試驗（usrusr） n快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (rpr)(rpr) n甲苯胺紅不加熱血清試驗（甲苯胺紅不加熱血清試驗（trusttrust） 20

25、102010年梅毒螺旋體抗原血清學檢測試劑評估結果年梅毒螺旋體抗原血清學檢測試劑評估結果 方法方法試劑簡稱試劑簡稱 特異性特異性(%) (%) 敏感性（敏感性（%） elisa 廈門英科 100.0 98.2 珠海麗珠 100.0 96.5 北京萬泰 100.0 96.5 濰坊三維 100.0 96.5 北京科衛(wèi) 100.0 95.6 北京華大 99.5 99.1 上海科華 99.5 98.5 北京金豪 99.1 97.4 化學發(fā)光北京科美 100.0 97.3 快速試劑 廈門英科 99.4 93.9 杭州艾康 94.7 96.5 北京萬泰 94.7 93.9 北京藍十字 93.4 81.6

26、20102010年非梅毒梅毒螺旋體抗原血清學檢測試劑評估結果年非梅毒梅毒螺旋體抗原血清學檢測試劑評估結果 試劑簡稱試劑簡稱 敏感性敏感性 (% ) (% ) 特異性特異性(% )(% ) 北京萬泰trust 97.8 88.0 上海榮盛trust 96.7 97.7 上?？迫Arpr 96.7 90.3 鄭州安圖trust 92.4 97.2 北京金豪trust 92.4 92.6 英科新創(chuàng)trust 91.3 98.6 北京科衛(wèi)rpr 89.1 87.0 表表3 3 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗用試劑評估結果非梅毒螺旋體抗原血清學試驗用試劑評估結果 梅毒實驗室檢測策略探討梅毒實驗室檢測策略探討

27、梅毒實驗室檢測策略思考（1 1） 非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖 早期晚期 一期 二期 早期潛伏 晚期潛伏 三期 治療前治療前 治療后治療后 陽性 陰性 梅毒實驗室檢測策略思考（2 2） 梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖梅毒螺旋體抗原血清試驗結果解釋示意圖 早期 一期 二期 早期潛伏 晚期 晚期潛伏 三期 治療前治療前 治療后治療后 陽性陰性 梅毒實驗室檢測策略思考（3 3） rpr tppa trust tp-elisa 臨床意義 vdrl tp-rt _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 + + + + 現(xiàn)癥梅毒現(xiàn)癥梅毒 + + - - 生物學

28、假陽性生物學假陽性 - +- + 早期梅毒經(jīng)治療后早期梅毒經(jīng)治療后 梅毒實驗室檢測策略思考（4 4） 64 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 n排除試驗假陽性排除試驗假陽性 n確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染 n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者 n確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染 ？rpr：初篩試驗：初篩試驗 tppa：確證試驗：確證試驗 梅毒篩查梅毒篩查-復檢流程的意義？復檢流程的意義？ 梅毒實驗室檢測策略思考（5 5） 方法選擇依據(jù) n敏感性、特異性（試劑評估） n操作流程（可及性） n試

29、劑的價格、結果時間（可接收性） 65 ？初篩目的和方法選擇初篩目的和方法選擇 近年來我國嚴峻的梅毒流行形勢近年來我國嚴峻的梅毒流行形勢 衛(wèi)生部出臺梅毒衛(wèi)生部出臺梅毒1010年控制規(guī)劃年控制規(guī)劃 全國梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿）全國梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿） n梅毒實驗室檢測梅毒實驗室檢測 不規(guī)范現(xiàn)狀不規(guī)范現(xiàn)狀 n梅毒血清學檢測梅毒血清學檢測 新方法、新技術的新方法、新技術的 應用性評估應用性評估 梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿）簡介梅毒檢測技術規(guī)范（上報稿）簡介 全國梅毒檢測技術規(guī)范 68 第一章 梅毒檢測樣品的采集和處理 第二章 梅毒血清學檢測 第三章 梅毒病原體顯微鏡檢測 第四章 梅毒病原體核酸檢

30、測 第五章 實驗室生物安全 第六章 梅毒檢測實驗室質(zhì)量管理 第一章 樣品的采集和處理 n血清、血漿、全血及腦脊液血清、血漿、全血及腦脊液: : 梅毒血清學檢測或核酸檢測梅毒血清學檢測或核酸檢測 n皮損部位組織液、淋巴穿刺液皮損部位組織液、淋巴穿刺液: : 梅毒病原體檢測或核酸檢測。梅毒病原體檢測或核酸檢測。 第二章 梅毒血清學檢測 檢測目的檢測目的: : 臨床診斷、血液篩查、流行病學監(jiān)測臨床診斷、血液篩查、流行病學監(jiān)測 n以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。 n以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以血液篩查為目的的檢測是為

31、了防止梅毒的經(jīng)血傳播。 n以流行病學監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學感以流行病學監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學感 染率和發(fā)病率。染率和發(fā)病率。 梅毒實驗室檢測策略選擇 n根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 n可采用任何一類梅毒血清學檢測方法作 為篩查試驗。 72 非梅毒螺旋體抗原血清試驗非梅毒螺旋體抗原血清試驗 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (rpr) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（trust） 性病研究實驗室試驗 (vdrl) 梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (tppa) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (tpha) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa） 梅毒免疫

32、層析法-梅毒快速檢測 (rt) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（fta-abs） 化學發(fā)光免疫分析法（clia） 梅毒igm抗體檢測（igm） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（wb） 梅毒血清學檢測方法 策略一 采用任何一種非梅毒螺旋體抗 原血清試驗對樣品進行初篩 策略二 采用任何一種梅毒螺旋體抗 原血清試驗對樣品進行初篩 以臨床診斷為目的的檢測策略一 非非梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （以rpr為例） 陰性陰性 報告報告rprrpr陰性陰性 陽性陽性 梅毒螺旋體梅毒螺旋體 抗原血清學抗原血清學 試驗試驗 （以tppa為例） 陰性陰性 報告報告rprrpr陽性陽性 tppatppa陰性陰性

33、 陽性陽性 報告報告rprrpr陽性陽性 tppatppa陽性陽性 rpr 定量定量 試驗試驗 報告報告 rprrpr 滴度滴度 以臨床診斷為目的的檢測策略二 梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （以elisa為例） 陰性陰性 報告報告elisa陰性陰性 陽性陽性 報告報告elisa 陽性陽性 非非梅毒螺旋體梅毒螺旋體 抗原血清定性抗原血清定性/ / 定量試驗定量試驗 （以rpr為例） 陰性陰性 報告報告elisa陽性陽性 rpr陰性陰性 陽性陽性 報告報告elisa陽性陽性 rpr滴度滴度 策略一和策略二比較 75 策略一：策略一：非非梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試

34、驗 策略二：策略二：梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗 n簡便、經(jīng)濟簡便、經(jīng)濟 n簡便、快速、大樣本、經(jīng)濟簡便、快速、大樣本、經(jīng)濟 n早期發(fā)現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn) 第三章 梅毒體病原學檢測 檢測方法檢測方法 n暗視野顯微鏡檢查暗視野顯微鏡檢查 n鍍銀染色檢查鍍銀染色檢查 第四章 梅毒核酸檢測 n可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液 及腦脊液等標本的梅毒螺旋體核酸檢測及腦脊液等標本的梅毒螺旋體核酸檢測 n在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及 螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定螺旋體現(xiàn)癥感染和既往

35、感染鑒別診斷中具有一定 的價值的價值 n可應用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病可應用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病 學分型。學分型。 第五章 實驗室生物安全 n梅毒的生物危害梅毒的生物危害 梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動物 或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很 少引起嚴重疾病，是有有效治療和預防方法的致病微生物 n梅毒相關檢測的生物安全級別梅毒相關檢測的生物安全級別 為了保證安全，對臨床和現(xiàn)場未知樣本的梅毒血清學檢測應 在符合級生物安全實驗室（bsl-2）要求的實驗室中進行。 如有艾滋病檢測實驗室，可以在艾滋病抗體檢測實驗室中進 行。 第六章 實驗室質(zhì)量管理 n質(zhì)量保證質(zhì)量保證 n質(zhì)量評估質(zhì)量評估 n試劑評價試劑評價 質(zhì)量保證 檢測方法和試劑的選擇檢測方法和試劑的選擇 用于臨床診斷的檢測方法應使用經(jīng)國家食品藥用于臨床診斷的檢測方法應使用經(jīng)國家食品藥 品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑，應選擇敏感性高、品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑，應選擇敏感性高、 特異性好的試劑。性病參比實驗室和省級性病中心特異性好的試劑。性病參比實驗室和省級性病中心 實驗室應定期組織開展梅毒診斷