分析方法驗(yàn)證

1、2009-1-51 分析方法驗(yàn)證 2009-1-5 2009-1-52 目錄 1.概述 2.分析方法驗(yàn)證 1.需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目 2.驗(yàn)證的內(nèi)容 3.再驗(yàn)證 3.生物制品分析方法驗(yàn)證 2009-1-53 方法驗(yàn)證目的 n識(shí)別方法可能的誤差的來(lái)源及其定量 n確定方法針對(duì)預(yù)期的用途是否可接受 n為方法可被用于作結(jié)果判定提供證明依 據(jù) 2009-1-54 方法驗(yàn)證的重要性 n分析測(cè)量的目的是得到一致、準(zhǔn)確、可靠的數(shù)據(jù) n錯(cuò)誤的分析結(jié)果會(huì)導(dǎo)致巨大的浪費(fèi) n藥品的生產(chǎn)過(guò)程中，原料、中間體、成品均需進(jìn) 行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果既是過(guò)程受控的依據(jù)，也是評(píng) 價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的重要依據(jù)，檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)具有準(zhǔn)確可 靠。 n為確保檢

2、驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，檢驗(yàn)方法必 須進(jìn)行驗(yàn)證。 n提供證據(jù)保證該方法是準(zhǔn)確、可靠和可行的。 2009-1-55 方法驗(yàn)證的意義 n藥品標(biāo)準(zhǔn)的建立和執(zhí)行需要經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法 n新藥申報(bào)要求新藥申報(bào)要求 n藥典要求（藥品標(biāo)準(zhǔn)組成：藥典要求（藥品標(biāo)準(zhǔn)組成：1、項(xiàng)目的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)或、項(xiàng)目的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)或 限度；限度；2、相應(yīng)的檢驗(yàn)方法和操作步驟）、相應(yīng)的檢驗(yàn)方法和操作步驟） n工藝過(guò)程的監(jiān)控需要經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法 n藥品生產(chǎn)驗(yàn)證需要經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法 n變更的再驗(yàn)證：工藝變更，藥品組份變更，分析規(guī)變更的再驗(yàn)證：工藝變更，藥品組份變更，分析規(guī) 程變更程變更 n藥品的商業(yè)交換需要經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法 ngmp的要求的要

3、求 2009-1-56 美歐gmp現(xiàn)場(chǎng)檢查要點(diǎn) n進(jìn)入美歐市場(chǎng)需要滿足的gmp六大系統(tǒng) 1.質(zhì)量 2.設(shè)施和設(shè)備 3.物料 4.生產(chǎn) 5.包裝/標(biāo)簽 6.實(shí)驗(yàn)室 2009-1-57 fda檢查4大缺陷領(lǐng)域 n驗(yàn)證 n工藝控制 n記錄 n實(shí)驗(yàn)室控制（缺陷率最高） n實(shí)驗(yàn)室儀器使用管理與保養(yǎng) n儀器校驗(yàn) n取樣程序與執(zhí)行 n標(biāo)準(zhǔn)品的使用 n留樣及其穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)方面 n分析方法驗(yàn)證 2009-1-58 分析方法驗(yàn)證的前提條件分析方法驗(yàn)證的前提條件 n人員已經(jīng)培訓(xùn)、資格確認(rèn) n儀器已經(jīng)確認(rèn)、校正并在有效期內(nèi) n可靠的對(duì)照品 n可靠的實(shí)驗(yàn)試劑 n確認(rèn)受試溶液的穩(wěn)定性，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)無(wú)降解 n文件：經(jīng)批準(zhǔn)的驗(yàn)

4、證方案（操作過(guò)程、可接受 標(biāo)準(zhǔn)、記錄等） 2009-1-59 檢驗(yàn)儀器驗(yàn)證內(nèi)容檢驗(yàn)儀器驗(yàn)證內(nèi)容 檢驗(yàn)儀器分為： 1.測(cè)量?jī)x器只進(jìn)行測(cè)量不涉及分析過(guò)程。如計(jì)時(shí)器、溫 度計(jì)、天平、ph計(jì) 2.計(jì)量?jī)x器如空量瓶、移液管、滴定管 3.分析儀器大型分析儀器或參于分析過(guò)程，系統(tǒng)需要進(jìn) 行分離，然后才進(jìn)行檢測(cè)儀器。如hplc、gc、紫外分光 光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)等。 4.分析設(shè)備不用于分析工作重要設(shè)備。如人工氣候箱 2009-1-510 檢驗(yàn)儀器驗(yàn)證的內(nèi)容 n測(cè)量?jī)x器只進(jìn)行安裝確認(rèn)與校正。 n計(jì)量?jī)x器只進(jìn)行校正。 n分析儀器進(jìn)行iq、oq、pq。 n分析設(shè)備進(jìn)行iq、oq、pq。 2009-1-511 方

5、法驗(yàn)證的一般原則 n原則上每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目采用的分析方法，均需要 進(jìn)行方法驗(yàn)證。 n方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，結(jié)合 所采用分析方法的特點(diǎn)確定。 n同一分析方法用于不同的檢測(cè)項(xiàng)目會(huì)有不同的 驗(yàn)證要求。例如，采用高效液相色譜法用于制 劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不同要求的方 法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性，而后者重 點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。 2009-1-512 需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目 n檢測(cè)項(xiàng)目是為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效而 設(shè)定的測(cè)試項(xiàng)目。 n根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的設(shè)定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要 求，將需驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目分為四類： n鑒別 n雜質(zhì)檢查（限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)） n定量測(cè)定（含量測(cè)定

6、） n其他特定檢測(cè)項(xiàng)目（溶出度、釋放度等） 2009-1-513 驗(yàn)證內(nèi)容 n方法的驗(yàn)證是其性能特征的系統(tǒng)性評(píng)價(jià)的認(rèn)證。 性能特征通過(guò)如下的參數(shù)來(lái)表示： 1.專屬性 2.線性 3.范圍 4.準(zhǔn)確度 5.精密度 6.檢測(cè)限 7.定量限 8.耐用性 9.系統(tǒng)適用性。 n驗(yàn)證內(nèi)容就是方法的以上參數(shù)。 2009-1-514 各種檢測(cè)方法通常需測(cè)定的參數(shù) 分析方法 參數(shù) 鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查 含量分析 特殊分析 定量 限度 準(zhǔn)確性* 精密度 重復(fù)性 * 精密度 中間精密度 * * * * 耐用性* 線性 范圍 專屬性* 檢測(cè)限度 定量限度 注： 表示通常不需測(cè)定的參數(shù) *在一些情況下可能不需要 表示通常需

7、測(cè)定的參數(shù) * *如果做了重復(fù)性，可能不需要做 2009-1-515 1 專屬性(一) n專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔 料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確 鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。 n通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法中均應(yīng) 考察其專屬性。如采用的方法不夠?qū)?，?yīng)采 用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。 2009-1-516 1 專屬性(二) 1、鑒別反應(yīng) 鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。 專屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或 結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的 供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的陰性對(duì) 照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合 物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。 2009-1-517

8、 1 專屬性(三) 2、雜質(zhì)檢查 n作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確保可檢出被分析物中雜質(zhì)的含量， 如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定 的專屬性。 n在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與 共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。 n在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過(guò)與另一種已證明合 理但分離或檢測(cè)原理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果比較來(lái)確 定?；?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn) 行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。 必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行

9、色譜峰純度檢查。 2009-1-518 1 專屬性(四) n破壞性試驗(yàn)/強(qiáng)為降解試驗(yàn) n強(qiáng)光照射:4500lx500lx n高溫：60/ 40/110 n高濕：25、rh905 kno3飽和溶液 rh755 nacl飽和溶液 n酸水解：0.1n hcl n堿水解：0.1n naoh n氧化：3-30%h2o2 n可接受的降解水平比例為與供試品相比10-30%降解。 2009-1-519 1 專屬性(五) 3、含量測(cè)定 n含量測(cè)定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。 n在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中加入雜質(zhì) 或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的

10、供試品比 較測(cè)定結(jié)果。 n在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥 典方法進(jìn)行比較，對(duì)比兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn) （強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降 解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。必要時(shí)進(jìn) 行色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。 2009-1-520 2 線性(一) n線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與供 試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性（比 例）關(guān)系的程度。 n線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目， 如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測(cè)定均需要驗(yàn)證線性。 2009-1-521 2 線性(二)

11、 n應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。 至少制備5個(gè)濃度（濃度范圍至少等于準(zhǔn)確度測(cè)量的范 圍） 。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖， 觀察是否呈線性。 制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度的方法 直接精密稱量（對(duì)于低濃度樣品不適合，易引入稱量誤差） 由貯備液進(jìn)行系列精密稀釋（適合低濃度樣品，可清除稱量誤差） 可接受標(biāo)準(zhǔn)： 活性成分 r0.999 雜質(zhì) r 0.990 2009-1-522 3 準(zhǔn)確度(一) n準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可 的參考值之間接近的程度。有時(shí)也稱真實(shí)度。 n通常用百分回收率或平均值與可接受的真值間的 差異及其置信區(qū)間來(lái)報(bào)告。 n一定的準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，

12、因此涉及 到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含 量測(cè)定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。 2009-1-523 3 準(zhǔn)確度(二) n準(zhǔn)確度試驗(yàn)受如下條件影響 是否所有的分析物已經(jīng)溶解了 可提取的和吸收損失 正確的檢測(cè) 檢測(cè)器對(duì)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng) 被分析物的相對(duì)響應(yīng)值 2009-1-524 3 準(zhǔn)確度(三) n準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對(duì)于制劑一般以回收率試驗(yàn)來(lái)進(jìn) 行驗(yàn)證。 n在方法的范圍內(nèi)將已知量的被分析物加到空白對(duì)照或樣品中 試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定線性范圍內(nèi)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè) 定3次，共測(cè)定9次，即33水平 覆蓋到范圍（通常為正常的80、100和120） 檢測(cè)結(jié)果與理論值比較確定回收率 n

13、通常主峰在98.0102.0 n對(duì)于雜質(zhì)通常如下： n0.2以下 0.05 n0.21.0 相對(duì)的20 n1.0以上 相對(duì)的10 2009-1-525 3 準(zhǔn)確度(四) 1、含量測(cè)定 n原料藥可用已知純度的對(duì)照品或符合要求的原料藥進(jìn)行測(cè)定，或用本 法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 n制劑可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑 的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，必要時(shí)，與 另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。 2、雜質(zhì)定量試驗(yàn) n雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果 不能得到雜質(zhì)，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比

14、較，如藥 典方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。 n如不能測(cè)得雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子，可在線測(cè)定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采 用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相 似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量(自身對(duì)照法)。并 應(yīng)明確單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比或面積比。 2009-1-526 4 精密度(一) n精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多 次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度（離散程 度）。 n含量測(cè)定和雜質(zhì)定量測(cè)定要做精密度考察。 n精密度一般用多次測(cè)量結(jié)果的偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差表示。用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示時(shí)，取樣測(cè)定 次數(shù)應(yīng)至少6次。

15、 n精密度可以從三個(gè)層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn) 性。 2009-1-527 4 精密度(二) 1、重復(fù)性 n重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間 隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。 n重復(fù)性測(cè)定可在規(guī)定范圍內(nèi)， n用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，制備3個(gè)不同濃度的試樣， 各測(cè)定3次，即33水平 n或100的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 n通常主峰2rsd，雜質(zhì)20rsd 2009-1-528 4 精密度(三) 2、中間精密度 n中間精密度系指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變， 如時(shí)間、人員、儀器設(shè)備，對(duì)測(cè)定結(jié)果的精密度的影響。 n驗(yàn)證時(shí)可設(shè)計(jì)方案對(duì)各變動(dòng)因素進(jìn)行統(tǒng)

16、一考察。 n色譜分析方法受外界因素的影響較大，一般需考察中間精密 度。 3、重現(xiàn)性 n指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。 n當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。 2009-1-529 精密度和準(zhǔn)確度 2009-1-530 5 范圍(一) n范圍系指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性， 測(cè)試方法適用的試樣中被分析物高低限濃度或量 的區(qū)間。 2009-1-531 5 范圍(二) n范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開(kāi)始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍 和試驗(yàn)方法?？梢圆捎梅弦蟮脑纤幣渲瞥刹煌?的濃度，按照相應(yīng)的測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)。 n范圍通常用與分析方法的測(cè)試結(jié)果相同的單位（如百 分濃度）表達(dá)

17、。涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì) 范圍進(jìn)行驗(yàn)證，如含量測(cè)定、含量均勻度、溶出度或 釋放度、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。 n范圍應(yīng)根據(jù)劑型和（或）檢測(cè)項(xiàng)目的要求確定。 2009-1-532 5 范圍(三) 1、含量測(cè)定 范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80120或更寬。 2、制劑含量均勻度 范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70130。根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、 噴霧劑，必要時(shí)，范圍可適當(dāng)放寬。 3、雜質(zhì) n雜質(zhì)測(cè)定時(shí)，范圍應(yīng)為雜質(zhì)的報(bào)告水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120。 n有異常功效的、有毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì)，其檢測(cè)限和定 量限應(yīng)與該雜質(zhì)必須被限制的水平相當(dāng)。 4、如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用面積歸一化法， 且僅使用100%的標(biāo)準(zhǔn)品

18、，則線性范圍應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告 限度至含量標(biāo)準(zhǔn)的120。 2009-1-533 6 檢測(cè)限(一) n檢測(cè)限系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的 最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。 n該驗(yàn)證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏 的檢測(cè)能力。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方 法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證檢出需控制的 雜質(zhì)。 n常用信噪比法確定檢測(cè)限。 2009-1-534 6 檢測(cè)限(二) 1、直觀法 n直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 n檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一系列已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn) 確、可靠檢測(cè)被測(cè)物的最小量或最低濃度來(lái)建立。 2、信噪比法 n用于能顯示基線噪音的分析方

19、法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲 信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng) 的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。 3、其他方法 n基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法。 dl=3.3/s 標(biāo)準(zhǔn)偏差 s曲線的斜率 n無(wú)論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測(cè) 限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定檢測(cè)限。 2009-1-535 7 定量限(一) n定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測(cè)定 的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和 精密度。 n定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢 測(cè)能力。雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法的定量限， 以保證含量很少的雜質(zhì)能夠

20、被準(zhǔn)確測(cè)出。 n常用信噪比法確定定量限。 2009-1-536 7 定量限(二) 1、直觀法 n直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 n定量限一般通過(guò)對(duì)一系列含有已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度 和精密度都符合要求的情況下，來(lái)確定被測(cè)物能被定量的最小量。 2、信噪比法 n用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲 信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為10：1時(shí) 相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。 3、其他方法 n基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法。 ql=10/s n無(wú)論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近

21、于或等于定量 限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定定量限。 2009-1-537 8 耐用性(一) n耐用性系指測(cè)定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果 不受影響的承受程度。 n耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗 干擾能力。開(kāi)始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐 用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中 予以寫(xiě)明。 2009-1-538 8 耐用性(二) n典型的變動(dòng)因素包括： n分析溶液的穩(wěn)定性 n液相色譜法中的參數(shù) 參數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)范圍 n檢測(cè)波長(zhǎng) 4nm n流動(dòng)相的組成 5 n流速 2 nph值 0.2 n色譜柱的不同供應(yīng)商 三家 n柱溫 5 n流速 2 2009-1-539 8 耐用性(三) n測(cè)定：條件

22、變化時(shí)與正常條件下結(jié)果比 較 n耐用性評(píng)估的結(jié)果：建立一系列的系統(tǒng) 適用性參數(shù)，以確保在任何時(shí)候使用該 分析方法都是有效的。 2009-1-540 9 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) n對(duì)一些儀器分析方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分 析設(shè)備、電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作、測(cè)試樣品等一起當(dāng)作完 整的系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適用性便是對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng) 估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方 法類型而定。 n色譜方法對(duì)分析設(shè)備、電子儀器的依賴程度較高，因此 所有色譜方法均應(yīng)進(jìn)行該指標(biāo)驗(yàn)證，并將系統(tǒng)適用性作 為分析方法的組成部分。具體驗(yàn)證參數(shù)和方法參考藥典 有關(guān)規(guī)定。 2009-1-541 試驗(yàn)程序 n一些試驗(yàn)可以一起進(jìn)

23、行 例如：精密度和準(zhǔn)確度 n標(biāo)準(zhǔn)的程序: 1.專屬性 2.檢測(cè)限和定量限 3.線性 4.準(zhǔn)確度 5.精密度 6.耐用性(可以做為開(kāi)發(fā)試驗(yàn)的一部分來(lái)完成) n在驗(yàn)證試驗(yàn)開(kāi)始前進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 2009-1-542 方法驗(yàn)證計(jì)劃 n確定耐用性的重要試驗(yàn)參數(shù) n方法驗(yàn)證的材料 n已知相關(guān)物質(zhì)的可靠樣品 n重要的藥品(用于精密度和專屬性) n重要的空白對(duì)照（用于專屬性） n用于準(zhǔn)確度的空白對(duì)照(用于加樣試驗(yàn)) 2009-1-543 方法驗(yàn)證方案 n方案要列出進(jìn)行驗(yàn)證的方法進(jìn)行驗(yàn)證的 詳細(xì)要求 n驗(yàn)證目的和范圍 n驗(yàn)證參數(shù) n可接受標(biāo)準(zhǔn) nsop n偏差和修正 2009-1-544 方法驗(yàn)證報(bào)告 驗(yàn)證

24、報(bào)告應(yīng)包括 n驗(yàn)證的目的和范圍 n方法的說(shuō)明 n驗(yàn)證試驗(yàn)過(guò)程 n試驗(yàn)結(jié)果：圖表、圖譜、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)和認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn) n偏差和修正的概述 n附錄中參考文獻(xiàn) 2009-1-545 方法的來(lái)源（種類） n原則上，對(duì)于各類方法均需進(jìn)行驗(yàn)證， 但依方法來(lái)源的不同對(duì)于驗(yàn)證的要求有 所不同。 n根據(jù)分析方法的來(lái)源，可將方法分為兩 大類，即標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法。 2009-1-546 標(biāo)準(zhǔn)方法 n標(biāo)準(zhǔn)方法也稱為正式方法、法定方法 n一般是指已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析方法，who推 薦的分析方法也可作為重要參考。此類方法 在被確定為標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過(guò)了適當(dāng)?shù)尿?yàn)證。 在首次采用此類方法前，也應(yīng)對(duì)該方法進(jìn)行 適當(dāng)?shù)尿?yàn)證，如進(jìn)行專屬性和

25、精密度的驗(yàn)證， 以便證明在實(shí)際的使用條件下該方法也是適 用的。 2009-1-547 非標(biāo)準(zhǔn)方法 1.標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法 此類方法系指由申報(bào)者提出的可取代標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法。申 報(bào)者在決定采用此類方法時(shí)應(yīng)持慎重的態(tài)度，并需提供表明新 方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗(yàn)證資料，包括兩 種方法的比較性資料。 2.來(lái)自參考文獻(xiàn)的方法來(lái)自參考文獻(xiàn)的方法 是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認(rèn)真對(duì)待 此類方法，并需進(jìn)行全面的驗(yàn)證。應(yīng)說(shuō)明參考文獻(xiàn)的出處，附 原文及譯文。 3.自己建立的方法自己建立的方法 對(duì)于某些產(chǎn)品，尤其是創(chuàng)新性產(chǎn)品來(lái)講，由于缺少可參考的方 法，通常需要

26、自己建立一種新的分析方法，對(duì)于這類方法需進(jìn) 行全面而嚴(yán)格的驗(yàn)證。 2009-1-548 標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn) nusp通論1226標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)。 n不需要完整的驗(yàn)證 n確認(rèn)已確信方法起作用 n通過(guò)評(píng)估驗(yàn)證特征的子數(shù)據(jù)集來(lái)完成 2009-1-549 標(biāo)準(zhǔn)方法通常需確認(rèn)的參數(shù) 分析方法 參數(shù) 雜質(zhì)檢查 含量分析 定量 限度 hplc/gc專屬性 精密度 專屬性 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 精密度 分光光度計(jì) 專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 精密度 滴定法精密度 精密度 tlc專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 凝膠電泳專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 原料藥和輔料 200

27、9-1-550 標(biāo)準(zhǔn)方法通常需確認(rèn)的參數(shù) 分析方法 參數(shù) 鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查 含量分析 定量 限度 hplc專屬性 精密度 專屬性 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 精密度 專屬性 線性、范圍 分光光度計(jì) 專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 精密度 線性、范圍 滴定法精密度 精密度 線性、范圍 tlc專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 凝膠電泳專屬性 精密度 定量限度 專屬性 檢測(cè)限度 制劑 2009-1-551 各種檢測(cè)方法通常需測(cè)定的參數(shù) 分析方法 參數(shù) 鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查 含量分析 特殊分析 定量 限度 準(zhǔn)確性* 精密度 重復(fù)性 * 精密度 中間精密度 * * * * 耐用性*

28、 線性 范圍 專屬性* 檢測(cè)限度 定量限度 注： 表示通常不需測(cè)定的參數(shù) *在一些情況下可能不需要 表示通常需測(cè)定的參數(shù) * *如果做了重復(fù)性，可能不需要做 2009-1-552 方法再驗(yàn)證 n需要不需要再驗(yàn)證？ n再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn) 證。 n方法再驗(yàn)證是對(duì)分析方法的完善過(guò)程，應(yīng)根據(jù) 實(shí)際改變情況/定期評(píng)估決定是否需要進(jìn)行再 驗(yàn)證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥 品的內(nèi)在質(zhì)量。 2009-1-553 方法再驗(yàn)證 n在某些情況下需要再驗(yàn)證： n原料藥合成工藝改變：可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含 量測(cè)定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查 方法能夠檢測(cè)新引

29、入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對(duì)主成份的含量 測(cè)定應(yīng)無(wú)干擾。 n雜質(zhì)概況發(fā)生改變 n制劑處方改變、輔料變更：可能會(huì)影響鑒別的專屬性、溶出度 和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)鑒別、含量測(cè)定方法再驗(yàn)證。 當(dāng)原料藥產(chǎn)地來(lái)源發(fā)生變更時(shí)，可能會(huì)影響雜質(zhì)檢查和含量測(cè) 定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方 法進(jìn)行再驗(yàn)證。 n分析方法發(fā)生部分改變：采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，檢 測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測(cè)限、專屬性、準(zhǔn)確度、 精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，證明修訂后分析方法的合理性、 可行性。 n分析儀器大修、發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)偏差、定期評(píng)估 2009-1-554 對(duì)方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià) 對(duì)于方法驗(yàn)證，有以下

30、幾個(gè)方面值得關(guān)注。 1、有關(guān)方法驗(yàn)證評(píng)價(jià)的一般考慮 n總體上，方法驗(yàn)證應(yīng)圍繞驗(yàn)證目的和一般原則來(lái)進(jìn)行， 方法驗(yàn)證內(nèi)容的選擇和試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案應(yīng)系統(tǒng)、合理， 驗(yàn)證過(guò)程應(yīng)規(guī)范嚴(yán)謹(jǐn)。 n并非每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的分析方法都需進(jìn)行所有內(nèi)容的驗(yàn) 證，但同時(shí)也要注意驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)充分，足以證明采用 的分析方法的合理性。如雜質(zhì)限度試驗(yàn)一般需要驗(yàn)證 專屬性和檢測(cè)限，而對(duì)于精密度、線性、定量限等涉 及定量測(cè)定的項(xiàng)目，則一般不需要進(jìn)行驗(yàn)證。 2009-1-555 對(duì)方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià) 2、方法驗(yàn)證的整體性和系統(tǒng)性 n方法驗(yàn)證內(nèi)容之間相互關(guān)聯(lián)，是一個(gè)整體。因此方法驗(yàn)證應(yīng)注重 整體性和系統(tǒng)性。 n例如，對(duì)于鑒別項(xiàng)目所需要的專屬性，一般一

31、種分析方法不太可 能完全鑒別被分析物，此時(shí)采用兩種或兩種以上分析方法可加強(qiáng) 鑒別項(xiàng)目的整體專屬性。 n在方法驗(yàn)證內(nèi)容之間也存在較多的關(guān)聯(lián)性，可以相互補(bǔ)充。如原 料藥含量測(cè)定采用容量分析法時(shí)，由于方法本身原因，專屬性略 差，但假如在雜質(zhì)檢測(cè)時(shí)采用了專屬性較強(qiáng)的色譜法，則一般認(rèn) 為整個(gè)檢測(cè)方法也具有較強(qiáng)的專屬性。 n總之，由于實(shí)際情況較復(fù)雜，在方法驗(yàn)證過(guò)程中，不提倡教條地 去進(jìn)行方法驗(yàn)證。此外，越來(lái)越多的新方法不斷被用于質(zhì)量控制 中，對(duì)于這些方法如何進(jìn)行驗(yàn)證需要具體情況具體分析。 2009-1-556 生物制品分析方法驗(yàn)證 n生物制品的理化分析方法驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相 同，但同時(shí)需結(jié)合生物制品

32、的特點(diǎn)考慮。 n生物制品具有多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)，分析方法也會(huì) 各有特色。 n相對(duì)于理化分析方法而言，生物學(xué)測(cè)定具有更大的可 變性，一般要使用動(dòng)物、細(xì)胞或生物分子，因此對(duì)于 生物學(xué)測(cè)定的判斷標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)靈活掌握，但是對(duì)于定 量測(cè)定方法應(yīng)盡可能減少方法的變異，驗(yàn)證的結(jié)果仍 應(yīng)能證明該方法具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確性和可靠性，并應(yīng)以 能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量為基本標(biāo)準(zhǔn)。 2009-1-557 生物學(xué)測(cè)定常用方法生物學(xué)測(cè)定常用方法 n酶反應(yīng)試驗(yàn)酶反應(yīng)試驗(yàn) 是指在體外能促進(jìn)酶分子的活化或本身具備酶的活性，通 過(guò)底物的變化檢測(cè)酶活性。主要用于酶、輔酶、激酶、激活 劑、抑制劑等的活性測(cè)定。這類方法的變異相對(duì)較小，結(jié)果 比較

33、準(zhǔn)確。 n結(jié)合試驗(yàn)結(jié)合試驗(yàn) 是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設(shè)計(jì)的試驗(yàn)，如免疫 結(jié)合試驗(yàn)。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結(jié)合試驗(yàn) 中測(cè)定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品 的活性（或效力）測(cè)定。這類方法的變異也相對(duì)較小。 2009-1-558 生物學(xué)測(cè)定常用方法生物學(xué)測(cè)定常用方法 n細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn)細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn) 是指產(chǎn)品可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生可測(cè)定的應(yīng)答，如細(xì)胞增殖、聚集、分 化、死亡、遷移或產(chǎn)生特定的化學(xué)物質(zhì)等。細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn)一般能較好地 反映制品的生物學(xué)活性，常用于各種生物制品的活性（效力）測(cè)定。與 上述兩類方法相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細(xì)胞相比，使用 原代細(xì)胞的方法變異更大

34、。 n動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn) 是指以整體動(dòng)物為試驗(yàn)材料檢測(cè)制品生物學(xué)活性（或效力）的試驗(yàn) 方法，如動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)，一般用于疫苗的效力測(cè)定。由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的 成本高、周期長(zhǎng)和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對(duì)于某些治療用 的制品，由于其作用機(jī)理或本身化學(xué)性質(zhì)的原因，難以建立體外測(cè)活的 方法，也可以采用動(dòng)物試驗(yàn)方法測(cè)定，但由于這類方法的變異一般相對(duì) 較大，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)盡可能以體外法代替。 2009-1-559 生物制品分析方法驗(yàn)證 n生物制品分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性與技術(shù)方 法本身（包括方法的原理和方法的技術(shù)特點(diǎn)等） 密切相關(guān)。 n分析方法的驗(yàn)證就是根據(jù)方法的需要，測(cè)定該 方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密

35、度、線性、范圍、 檢測(cè)限度、定量限度、耐用性等幾個(gè)指標(biāo)中的 一個(gè)或幾個(gè)，用于不同檢測(cè)目的的試驗(yàn)方法需 進(jìn)行不同參數(shù)的測(cè)定。 2009-1-560 各種檢測(cè)方法通常需測(cè)定的參數(shù) 分析方法 參數(shù) 鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查 生物活性 (效價(jià))測(cè)定 含量測(cè)定 定量 限度 準(zhǔn)確性 精密度 耐用性 線性 范圍 專屬性 檢測(cè)限度 定量限度 注： 表示通常不需測(cè)定的參數(shù) 表示通常需測(cè)定的參數(shù) 2009-1-561 專屬性專屬性生物制品分析方法驗(yàn)證 n生物學(xué)測(cè)定方法的專屬性與測(cè)定方法及產(chǎn)品組成密 切相關(guān)，所以應(yīng)首先從測(cè)試原理、測(cè)試用材料和供 試品組成等方面分析方法的專屬性，進(jìn)而再進(jìn)行必 要的驗(yàn)證。 n由于生物制品的性

36、質(zhì)和組成多樣，檢定方法各不相 同，難以提出統(tǒng)一的專屬性驗(yàn)證要求。下面以生物 技術(shù)產(chǎn)品常用的幾種檢定方法為例，進(jìn)行具體分析 及說(shuō)明。 2009-1-562 專屬性專屬性生物制品分析方法驗(yàn)證 1、如采用免疫印跡試驗(yàn)進(jìn)行生物制品的鑒別，應(yīng)首先對(duì)所使用抗體的特 異性進(jìn)行分析；若供試品中還存在其它組分，則應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證被檢測(cè) 物中其它物質(zhì)能否引起非特異性免疫反應(yīng)。 2、如采用細(xì)胞測(cè)定方法檢測(cè)生物活性，應(yīng)首先說(shuō)明被測(cè)物質(zhì)與特定的細(xì) 胞應(yīng)答之間的相關(guān)性，如二者的相關(guān)性較好，則一般認(rèn)為該方法的特 異性較好。為表明細(xì)胞測(cè)定方法的特異性，可進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證， 如加入抗體或特異抑制劑的封閉實(shí)驗(yàn)等。如果成品中加入了

37、可能影響 活性測(cè)定的輔料，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證以排除此種影響。 3、如采用elisa法檢測(cè)重組產(chǎn)品的殘余宿主蛋白含量，可采用與表達(dá)體 系相同的宿主細(xì)胞的蛋白作為免疫原制備抗體，若采用與產(chǎn)品相似工 藝進(jìn)行處理后再免疫動(dòng)物，則所獲得抗體的特異性更好。另外，產(chǎn)品 中存在的大量目的蛋白可能影響殘余宿主蛋白的測(cè)定，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)驗(yàn) 證以排除此種影響。 2009-1-563 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性生物制品分析方法驗(yàn)證 n對(duì)于化學(xué)藥品一般可采用填加和回收實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定，即 對(duì)已知量的供試品進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定值和真實(shí)值之 間的差異。但對(duì)于生物制品而言，由于沒(méi)有純的標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)，往往難以獲得確切的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)，所以一般不 需要準(zhǔn)確地測(cè)出該

38、參數(shù)。然而，仍有一些問(wèn)題與生物 活性測(cè)定方法的準(zhǔn)確性密切相關(guān)，值得研究者注意。 n生物制品的生物學(xué)活性為相對(duì)活性，一般與同時(shí)進(jìn)行 測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品/參考品進(jìn)行比較而得，所以應(yīng)對(duì)單位有 一個(gè)適當(dāng)?shù)亩x或以適用的標(biāo)準(zhǔn)品/參考品作為對(duì)照經(jīng) 計(jì)算而得。為得到準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： 2009-1-564 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性生物制品分析方法驗(yàn)證 1、必須同時(shí)測(cè)定供試品和標(biāo)準(zhǔn)品/參考品的劑量反應(yīng)曲線， 而且兩條曲線必須具有平行性，即供試品和標(biāo)準(zhǔn)品/參考 品的活性成分僅是量的不同而沒(méi)有質(zhì)的區(qū)別。如果兩條 曲線不具備平行性，則說(shuō)明供試品和標(biāo)準(zhǔn)品/參考品中的 活性成分可能不同或者該測(cè)試系統(tǒng)不具有適用性，這種 情況

39、下，將難以準(zhǔn)確計(jì)算出相對(duì)活性的結(jié)果。 2、應(yīng)盡可能使供試品隨機(jī)分布及保證測(cè)試系統(tǒng)的平衡性。 需對(duì)引起系統(tǒng)偏差的某些因素進(jìn)行分析排除，如不同的 試驗(yàn)平板、平板的不同位置（如邊緣效應(yīng)）、檢測(cè)次序、 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的籠子效應(yīng)等。 2009-1-565 專屬性、準(zhǔn)確性專屬性、準(zhǔn)確性生物制品分析方法驗(yàn)證 n專屬性和準(zhǔn)確性不是每個(gè)生物學(xué)測(cè)定方法都 需要測(cè)定的參數(shù)，但同樣重要，只是對(duì)于不 同品種的不同方法應(yīng)有不同的考慮，在進(jìn)行 方法驗(yàn)證過(guò)程中能有所考慮。 2009-1-566 精密度精密度生物制品分析方法驗(yàn)證 n與理化測(cè)定方法相比，各種生物學(xué)測(cè)定方法的變異均較大， 且不同類制品的生物學(xué)測(cè)定方法的變異也不同。對(duì)精

40、密度 的要求可根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)、用途以及測(cè)定方法的特點(diǎn)有所 區(qū)別。在測(cè)定方法與生物活性、藥理作用或效力相關(guān)性較 好的情況下，應(yīng)盡可能采用變異較小的測(cè)定方法。 n由于生物活性（或效價(jià)）測(cè)定是生物制品質(zhì)控中的主要指 標(biāo)，該方法的可靠性會(huì)直接影響產(chǎn)品的可控性，所以對(duì)生 物活性測(cè)定方法的精密度驗(yàn)證工作應(yīng)非常重視。如果在成 品檢定項(xiàng)目中生物活性指標(biāo)是唯一的測(cè)定有效成分含量水 平的指標(biāo)，則必須采用定量的測(cè)定方法，并盡可能減少方 法的變異。 2009-1-567 精密度精密度生物制品分析方法驗(yàn)證 n對(duì)于不同測(cè)定方法，其精密度可有較大不同，一般情況 下， n酶法：小于20%； n結(jié)合試驗(yàn)：小于20%； n細(xì)胞試驗(yàn)：小于30%； n動(dòng)物試驗(yàn)：小于50%。 n對(duì)于一些尚不成熟的試驗(yàn)方法或某些特殊方法（如噬斑試驗(yàn)）， 其方法變異可能會(huì)更大些。 n當(dāng)然，對(duì)于方法精密度的可接受標(biāo)準(zhǔn)還應(yīng)從多方面進(jìn)行 考慮。比如，有些藥物的臨床效應(yīng)（包括療效及不良反 應(yīng)）對(duì)給藥劑量的變化非常敏感，這時(shí)需對(duì)生物活性測(cè) 定方法的精密度提出更高的要求。 2009-1-568 精密度精密度生物制品分析方法驗(yàn)證 n從理論上考慮，測(cè)定次數(shù)主要取決于方法學(xué)的誤差，變 異大的方法應(yīng)增加測(cè)定次數(shù)； n從可操作性角度考慮，對(duì)于復(fù)雜、成本高及周期長(zhǎng)的方 法，重復(fù)次數(shù)太多，試驗(yàn)難度將很大。 n所以關(guān)于驗(yàn)證次數(shù)的設(shè)計(jì)，需綜合考慮，應(yīng)以基本達(dá)