乙肝診斷技術(shù)新進(jìn)展

1、目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題 單獨用單獨用HBsAg作為判定是否感染作為判定是否感染 乙肝病毒的指標(biāo)并非完全準(zhǔn)確乙肝病毒的指標(biāo)并非完全準(zhǔn)確 理論基礎(chǔ)：理論基礎(chǔ)： HBV/HCV合并感染，抑制合并感染，抑制HBsAg表達(dá)表達(dá) 144144、145145位等氨基酸變異位等氨基酸變異 國內(nèi)外ELISA試劑檢測HBsAg比較 野生型 ad 相差約8倍 ay 相差約16倍 變異型 對G145R變異及與其相關(guān)的多點變異的檢測能力弱,或檢不出； 對T118K/P120Q，Q129R/M133T等聯(lián)合變異的檢測能力弱； 對于T126N，D144A等變異國內(nèi)外試劑的檢測能

2、力基本一致。 國內(nèi)外診斷試劑對變異血清的檢測 國家參考品國家參考品adr血清的檢測結(jié)果血清的檢測結(jié)果含有含有G145R變異的血清檢測結(jié)果變異的血清檢測結(jié)果 變異血樣變異血樣 目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題 單獨用單獨用HBeAg診斷活動期乙肝并不可靠。診斷活動期乙肝并不可靠。 理論基礎(chǔ)：前理論基礎(chǔ)：前C區(qū)變異區(qū)變異 為什么會出現(xiàn)HBeAg陰性 HBeAg陰性是由于HBV變異造成： 常見的是 前核心區(qū)前核心區(qū) 和 核心啟動子區(qū)核心啟動子區(qū) 的變異 前核心區(qū) G 1896 A 突變使前核心區(qū)出現(xiàn)終止密碼，導(dǎo)致E抗原不能合成 前體氨基酸異位 核心啟動子區(qū) A 1

3、762 T + G 1764 A 突變造成信號RNA轉(zhuǎn)錄降低，導(dǎo) 致HBeAg不能分泌，血清中檢測不到HBeAg 前C區(qū)的基因突變 當(dāng)乙肝病毒為逃避宿主的免疫反應(yīng)基因可發(fā)生變異。 其所攜帶的HBV變異毒株大多數(shù)表現(xiàn)為： 在病毒基因組前C區(qū)末端1896位發(fā)生 G A 點突變點突變 TGG TAG 恰好形成新的終止密碼子（TAG） 阻斷了HBeAg的轉(zhuǎn)錄，翻譯，表達(dá) 導(dǎo)致在臨床上可出HBeAg檢測為陰性。 但但HBV病毒仍能復(fù)制和裝配病毒仍能復(fù)制和裝配 Expression of core protein and HBeAg 前前C區(qū)變異區(qū)變異 前前C C區(qū)發(fā)夾形纖襻結(jié)構(gòu)，在區(qū)發(fā)夾形纖襻結(jié)構(gòu)，在1

4、8581858位與位與18961896位間，將位間，將 不穩(wěn)定的不穩(wěn)定的T TG G對變異為對變異為T TA A對，使前基因組對，使前基因組RNARNA結(jié)結(jié) 構(gòu)更穩(wěn)定，更有利于病毒復(fù)制，進(jìn)而導(dǎo)致優(yōu)勢株。構(gòu)更穩(wěn)定，更有利于病毒復(fù)制，進(jìn)而導(dǎo)致優(yōu)勢株。 全世界全世界HBeAgHBeAg陰性的患者中有陰性的患者中有6060被檢測到前被檢測到前C C終終 止密碼變異，在地中海為止密碼變異，在地中海為9292，亞太地區(qū)是，亞太地區(qū)是5050， 美國北歐為美國北歐為2424 Cumulative effect of Core promoter mutations C區(qū)變異區(qū)變異 在病毒清除期，基因組較保守的

5、部位發(fā)生了選擇性變異，以C區(qū)中部 的變異或缺失 ，至少可涉及4個B細(xì)胞靶位、2個細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL） 表位和3個Th細(xì)胞表位。 C區(qū)Codon130是最重要的免疫原性區(qū) ，是T、B細(xì)胞共有的表位。 干擾素治療HBeAg陰性的慢性乙肝持續(xù)的反應(yīng)率較低，而在HBeAg陽性 患者干擾素療效較好，當(dāng)患者血清HBV前C基因突變株超過20時，常 預(yù)示IFN療效差，在慢性HBV感染過程中，前C1896變異毒株逐漸 累積成為優(yōu)勢毒株，因此，臨床應(yīng)用干擾素治療越早越好 X基因的變異基因的變異 X X基因是病毒復(fù)制的重要調(diào)節(jié)區(qū)，是轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄和正鏈合成的起點，基因是病毒復(fù)制的重要調(diào)節(jié)區(qū)，是轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄和正鏈合成

6、的起點， 也是多種細(xì)胞因子結(jié)合點，此區(qū)變異影響到病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制：核心也是多種細(xì)胞因子結(jié)合點，此區(qū)變異影響到病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制：核心 蛋白的啟動子（蛋白的啟動子（BCPBCP） 慢性乙型肝炎：慢性乙型肝炎：BCPBCP變異是多點和復(fù)合，主要是變異是多點和復(fù)合，主要是17621762（A AT T）、）、17641764 （G GA A）的雙變異，）的雙變異，BCPBCP區(qū)是富含區(qū)是富含ATAT區(qū)域，具有肝臟富含因子的獨立區(qū)域，具有肝臟富含因子的獨立 結(jié)合點，變異的結(jié)合點，變異的BCPBCP可改變這種結(jié)合，降低前可改變這種結(jié)合，降低前C C的的RNARNA轉(zhuǎn)錄，最終使轉(zhuǎn)錄，最終使 HBeAgHBe

7、Ag表達(dá)減少，平均降低表達(dá)減少，平均降低7070。 暴發(fā)型肝炎患者暴發(fā)型肝炎患者CP1638CP1638位（位（T TC C）、）、16731673位（位（C CT T）、）、17271727位（位（A A T T）、）、17301730位（位（C CG G）變異出現(xiàn)較多）變異出現(xiàn)較多 S基因變異基因變異 乙肝疫苗免疫HBsAg(+) ，“a”決定簇變異株，其中145位 的甘氨酸替代了精氨酸，這是由于HBV逃避宿主的免疫壓 力選擇性結(jié)果，有時這種變異株在母體內(nèi)為少數(shù)，而在疫 苗免疫后的小兒卻成為優(yōu)勢株 肝移植后應(yīng)用單克隆抗體或高效價HBsAg治療后也可出現(xiàn) 145位的甘氨酸精氨酸HBsAg變異

8、。 還有在HBsAg、DNA患者中發(fā)現(xiàn)124位半胱氨酸缺失， 導(dǎo)致HbsAg的分泌障礙，而使免疫學(xué)標(biāo)志出現(xiàn)HBsAg。 乙肝病毒臨床與變異乙肝病毒臨床與變異 慢性感染HBeAg（）期，病毒高滴度，但臨床常無加重 隨著感染持續(xù)，出現(xiàn)了HBeAg()前C變異株，并逐漸累積，此時血清 學(xué)仍可為HBeAg()，但血清中已可同時檢測野毒株和變異株，其中 野毒株逐步被清除，臨床上常伴肝炎發(fā)作； 隨著前C1896變異株選擇優(yōu)勢的發(fā)展，血清學(xué)可轉(zhuǎn)換為HBeAg(-)，但 在血清中仍可檢測到HBeAg分泌的野毒株，在臨床上既可表現(xiàn)為病情 加重，也可表現(xiàn)為病情緩解； 若選擇的結(jié)果進(jìn)入均一eAg不表達(dá)的變異株，則A

9、LT可輕微升高，但病 情可無明顯加重。 目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題 DNA復(fù)制程度的大小并不代表肝臟實際復(fù)制程度的大小并不代表肝臟實際 損害的程度（莊輝院士）損害的程度（莊輝院士）, , DNA不能準(zhǔn)確的不能準(zhǔn)確的 判斷愈后，轉(zhuǎn)陰后可能反彈。判斷愈后，轉(zhuǎn)陰后可能反彈。 附：附：DNA與與ALT的關(guān)系的關(guān)系 DNA與與ALT的關(guān)系的關(guān)系 首都醫(yī)科大學(xué)首都醫(yī)科大學(xué) 閔福援閔福援 39例急性乙肝患者血清例急性乙肝患者血清HBV-DNA與與ALT間的動態(tài)變化間的動態(tài)變化 時間時間 （周）（周） 例數(shù)例數(shù) HBV-DNA陽性陽性 例數(shù)例數(shù) （%） ALT大于大于

10、40U/L 例數(shù)例數(shù) （%） 1-539 35（90%）30（76%） 6-1035 25（71%）9（25%） 11-3021 7（33%）2（10%） 不同病程的不同病程的HBV-DNA與與ALT相比差異有顯著性。相比差異有顯著性。 目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題 單獨單獨DNA檢測并不能準(zhǔn)確反映乙肝檢測并不能準(zhǔn)確反映乙肝 病毒的復(fù)制情況，部分活動期乙肝患者病毒的復(fù)制情況，部分活動期乙肝患者 DNADNA檢測結(jié)果呈陰性。檢測結(jié)果呈陰性。 客觀評價乙肝病毒客觀評價乙肝病毒DNA檢測檢測 在臨床診斷中的意義在臨床診斷中的意義 擴(kuò)增乙肝C基因區(qū)上270bp基

11、因片段，以2 n 指數(shù)，將HBV- DNA分子片斷擴(kuò)增110 7 10 8 倍 同一位患者抽血檢查HBV-DNA，其定量數(shù)值每天都在變 化，即便是患者不進(jìn)行任何治療，定量檢測到的數(shù)值都在 時刻變化之中。同一份血清標(biāo)本在不同的時間檢測，或在 不同的實驗室檢測，其數(shù)值都會有所不同。以這種時刻都 在自然變化著的數(shù)值用來說明療效，是不確切的。 HBV-DNA定量檢測定量檢測 所用儀器設(shè)備、試劑品質(zhì)不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線以及標(biāo)準(zhǔn)熒所用儀器設(shè)備、試劑品質(zhì)不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線以及標(biāo)準(zhǔn)熒 光等各不相同，得出的數(shù)值左右漂浮，偏差大，得出的檢光等各不相同，得出的數(shù)值左右漂浮，偏差大，得出的檢 測值范圍也不相同測值范圍也不相同

12、DNA載量載量-隨時變化的不穩(wěn)定數(shù)值：隨時變化的不穩(wěn)定數(shù)值： 可能是治療效應(yīng)，也可能是自然變化或檢驗偏差?？赡苁侵委熜?yīng)，也可能是自然變化或檢驗偏差。 DNA載量正常值和異常值范圍難以統(tǒng)一載量正常值和異常值范圍難以統(tǒng)一 PCR-PCR-血清標(biāo)本的處理血清標(biāo)本的處理 目的基因的得率： 處理標(biāo)本過程中目的基因的得率問題，在一定范圍內(nèi)還 可以提高PCR法的特異性。 不同的抽提方法，DNA得率不同; 因此，如果沒有統(tǒng)一的血清標(biāo)本處理方法，那么基因 定量檢測的準(zhǔn)確性如何得到保證呢？這個問題在作PCR定 量時顯得尤為突出。 定量定量PCRPCR法的原理是把法的原理是把“反應(yīng)管反應(yīng)管”中的目的基中的目的基

13、因指數(shù)級地擴(kuò)增到一定水平，再通過產(chǎn)物雜交，因指數(shù)級地擴(kuò)增到一定水平，再通過產(chǎn)物雜交， 并與設(shè)定的內(nèi)參照對比，推算并與設(shè)定的內(nèi)參照對比，推算“反應(yīng)管反應(yīng)管”內(nèi)的目內(nèi)的目 的基因含量，并不等于原待測標(biāo)本內(nèi)的真正含量，的基因含量，并不等于原待測標(biāo)本內(nèi)的真正含量， 因此血清標(biāo)本處理過程種的目的基因的丟失及丟因此血清標(biāo)本處理過程種的目的基因的丟失及丟 失量均無法計算。失量均無法計算。 由于基因突變所致由于基因突變所致PCRPCR法假陰性的問題法假陰性的問題 慢活肝，血清慢活肝，血清HBV DNA檢測陰性？檢測陰性？ PCRPCR引物設(shè)計原則：篩選出陽性率引物設(shè)計原則：篩選出陽性率“最高最高”的一對引物的

14、一對引物 從整體上看，從整體上看，PCRPCR的漏檢率可能很低，但漏檢如果發(fā)的漏檢率可能很低，但漏檢如果發(fā) 生在某一個具體病人則是生在某一個具體病人則是100%100%。 第一，我們有沒有更積極的措施，最大限度地減少假陰性？第一，我們有沒有更積極的措施，最大限度地減少假陰性？ 第二，臨床醫(yī)生是否對第二，臨床醫(yī)生是否對DNADNA檢測技術(shù)的局限性有足夠認(rèn)識？檢測技術(shù)的局限性有足夠認(rèn)識？ 是不是僅憑一張檢驗報告的陽性或陰性結(jié)果，作出是不是僅憑一張檢驗報告的陽性或陰性結(jié)果，作出HBVHBV感感 染是與否的判斷？染是與否的判斷？ 基因檢測和免疫學(xué)檢測技術(shù)具有互補(bǔ)性基因檢測和免疫學(xué)檢測技術(shù)具有互補(bǔ)性 基

15、因檢測基因檢測 判斷病原體的有無和量的多少判斷病原體的有無和量的多少 機(jī)體作出了何種反應(yīng)？機(jī)體作出了何種反應(yīng)？ 程度如何？程度如何？ 反應(yīng)的結(jié)果如何？反應(yīng)的結(jié)果如何？ preS1對乙肝診斷的獨特作用對乙肝診斷的獨特作用 1、 preS1作為嗜肝侵蝕性的標(biāo)志作為嗜肝侵蝕性的標(biāo)志 與與HBsAg同時檢測；同時檢測； 結(jié)果相互印證，診斷乙肝更準(zhǔn)確。結(jié)果相互印證，診斷乙肝更準(zhǔn)確。 夾心法測夾心法測PreS1抗原抗原 PreS1 PreS2 HBsAg preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 2、解決、解決HBeAg漏檢帶來的誤診，漏檢帶來的誤診， 提供判斷病毒復(fù)制的可靠指標(biāo)。提供判

16、斷病毒復(fù)制的可靠指標(biāo)。 HBsAg ()組preS1抗原和HBeAg的關(guān)系 試驗單位試驗單位HBsAg () HBeAg (+)Pre-S1 (+) A247例例86（34.8）157（63.6） B245例例77（31.4）145（59.2） C328例例115（35.1）217（66.1%） 合計合計820例例278（33.9%）519（63.3） 前S1抗原與E系統(tǒng)的關(guān)系 HBeAg 合計合計 +- PreS1 +330197527 -89300389 合合 計計 419497916 PreS1陽性組中HBeAg陽性率62.6%; HBeAg陰性組中PreS1陽性率39.6%; 前前S1

17、抗原與抗原與E系統(tǒng)以及系統(tǒng)以及DNA的關(guān)系的關(guān)系 PreS1抗原 （） HBV-DNA （） HBeAg + 83.97% (1226/1460) 86.70% (554/639) _ 48.54% (1099/2265) 60.69% (315/519) 前前S1抗原與抗原與E系統(tǒng)以及系統(tǒng)以及DNA的關(guān)系的關(guān)系 PreS1抗原抗原 （）（） HBeAg （）（） HBV-DNA + 84.9% (653/769) 58.6% (450/769) _ 9.5% (37/389) 12.1% (47/389) preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 3、彌補(bǔ)乙肝、彌補(bǔ)乙肝DN

18、A檢測的假陰性檢測的假陰性 在已經(jīng)開展在已經(jīng)開展DNA檢測的單位，如果檢測的單位，如果DNA 陰性的病例，建議加查陰性的病例，建議加查PreS1, ,這時如果再有這時如果再有 ALT陽性，高度懷疑肝炎活動期。陽性，高度懷疑肝炎活動期。 Expression of 3 co-terminal envelope proteins of HBV preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 安徽阜陽肝病研究所安徽阜陽肝病研究所 張金良張金良 -313-313例慢性肝炎患者例慢性肝炎患者PreS1PreS1抗原和抗原和DNADNA檢測數(shù)據(jù)比較檢測數(shù)據(jù)比較 血清免疫血清免疫 標(biāo)志物模式標(biāo)志

19、物模式 例數(shù)例數(shù) HBV-PreS1陽性陽性 例數(shù)（例數(shù)（%） HBV-DNA陽性陽性 例數(shù)（例數(shù)（%） HBsAg + HBeAb + HBcAb + 140 78 （55.71%） 41 （29.29%） HBsAg + HBcAb + 173 118 （68.21%） 79 （45.66%） preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 4、preS1與肝損傷直接相關(guān)，與肝損傷直接相關(guān)， 判斷治療效果比判斷治療效果比DNA更準(zhǔn)確。更準(zhǔn)確。 preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 首都醫(yī)科大學(xué)首都醫(yī)科大學(xué) 閔福援閔福援 39例急性乙肝患者血清例急性乙肝患者

20、血清HBV-DNA與與ALT間的動態(tài)變化間的動態(tài)變化 時間時間 （周）（周） 例數(shù)例數(shù) HBV-DNA陽性陽性 例數(shù)例數(shù) （%） PreS1陽性陽性陽性陽性 例數(shù)例數(shù) （%） ALT大于大于40U/L 例數(shù)例數(shù) （%） 1-539 35（90%）26（67%）30（76%） 6-1035 25（71%）11（31%）9（25%） 11-3021 7（33%）3（14%）2（10%） 不同病程的不同病程的HBV-DNA與與ALT相比差異有顯著性，而相比差異有顯著性，而PreS1抗原與抗原與ALT相比相比 無顯著差異，無顯著差異，PreS1抗原可以判斷治療效果?？乖梢耘袛嘀委熜Ч?。PreS1先于

21、先于DNA轉(zhuǎn)陰提示預(yù)后良好。轉(zhuǎn)陰提示預(yù)后良好。 5 5、 PreS1PreS1抗原在抗原在AHBAHB病程中先于病程中先于HBV-DNAHBV-DNA轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰， 較早預(yù)示病情好轉(zhuǎn)，可用于判斷預(yù)后，比較早預(yù)示病情好轉(zhuǎn)，可用于判斷預(yù)后，比 DNADNA更有意義。更有意義。 preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 single-chain antibody geneproteic tracer gene Fusion gene Fusion protein Transformed bacteria 診斷用基因工程抗體分子的制備 基因工程抗體的優(yōu)勢基因工程抗體的優(yōu)勢 抗體分子超變

22、區(qū)點突變抗體分子超變區(qū)點突變 -使得抗體活性高于天然分子抗體，使得抗體活性高于天然分子抗體， 從而提高試劑的敏感度。從而提高試劑的敏感度。 抗體分子恒定區(qū)改造抗體分子恒定區(qū)改造 -避免人抗鼠抗體的干擾，避免人抗鼠抗體的干擾， 有效提高了試劑的特異性。有效提高了試劑的特異性。 傳統(tǒng)傳統(tǒng)preS1診斷試劑存在的問題診斷試劑存在的問題 傳統(tǒng)preS1診斷試劑抗體位點不全，影響檢出率。 與DNA檢測結(jié)果符合率較低 一步法的試劑敏感度低，影響對乙肝的正確診斷。 威高生物威高生物preS1診斷試劑的特點診斷試劑的特點 獨家采用基因工程抗體新技術(shù)。獨家采用基因工程抗體新技術(shù)。 準(zhǔn)確度高，真正發(fā)揮準(zhǔn)確度高，真

23、正發(fā)揮PreS1PreS1的診斷優(yōu)勢。的診斷優(yōu)勢。 提高乙肝診斷的準(zhǔn)確性，提高乙肝診斷的準(zhǔn)確性， 維護(hù)醫(yī)生和檢驗師的良好聲譽(yù)。維護(hù)醫(yī)生和檢驗師的良好聲譽(yù)。 傳統(tǒng)傳統(tǒng)preS1試劑試劑 威高新一代威高新一代preS1試劑試劑 項目項目 傳統(tǒng)傳統(tǒng)preS1診斷試劑診斷試劑 威高基因工程抗體威高基因工程抗體 preS1診斷試劑診斷試劑 核心技術(shù)核心技術(shù)單克隆抗體單克隆抗體基因工程抗體基因工程抗體 HBeAg陰性陰性 PreS1陽性率陽性率 2040%5060% 與與DNA符合率符合率 6070%8095% 對比總結(jié)對比總結(jié) 傳統(tǒng)傳統(tǒng)preS1試劑試劑 威高新一代威高新一代preS1試劑試劑 血清例數(shù)

24、血清例數(shù)傳統(tǒng)傳統(tǒng)preS1試劑試劑威高威高preS1試劑試劑乙肝乙肝DNA 53 陰性陰性陽性陽性陽性陽性 2陰性陰性陽性陽性陰性陰性 性能對比研究性能對比研究 不同質(zhì)量不同質(zhì)量preS1試劑試劑 對乙肝診斷的準(zhǔn)確性影響很對乙肝診斷的準(zhǔn)確性影響很 大大 模式模式例數(shù)例數(shù) DNA陽性率陽性率 某某preS1試劑試劑 （兩步法）（兩步法） 某某preS1試劑試劑 （一步法）（一步法） HBsAg + HBeAg + 71 97.2%70.4%31.0% HBsAg + HBeAg - 15657.1% 39.1%16% 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院 彭靜彭靜 臨床檢驗雜志臨床檢驗雜志

25、2006 2006年第年第3 3期期 檢驗兩對半為何還要查檢驗兩對半為何還要查Pre-S1？ 1前前S1抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出，提示可作為抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出，提示可作為 早期診斷乙肝病毒感染的指標(biāo)。早期診斷乙肝病毒感染的指標(biāo)。 2急性乙型肝炎患者前急性乙型肝炎患者前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早，預(yù)后越好，是病毒清除的最早跡象。反之，抗原陰轉(zhuǎn)越早，預(yù)后越好，是病毒清除的最早跡象。反之， 前前S1抗原持續(xù)陽性，將發(fā)展至慢性肝炎。（比抗原持續(xù)陽性，將發(fā)展至慢性肝炎。（比HBeAg陰轉(zhuǎn)、陰轉(zhuǎn)、HBsAb陽轉(zhuǎn)指標(biāo)提示要早）。陽轉(zhuǎn)指標(biāo)提示要早）。

26、 3HBeAg（-）慢性乙型肝炎約占慢性乙肝的）慢性乙型肝炎約占慢性乙肝的30%-50%，檢測前，檢測前S1抗原，提示病毒在抗原，提示病毒在 機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，此類患者更容易演變?yōu)楦斡不蚋伟?。加查前機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，此類患者更容易演變?yōu)楦斡不蚋伟＜硬榍癝1抗原，彌補(bǔ)了因抗原，彌補(bǔ)了因HBeAg 缺失造成的診斷和治療困難。缺失造成的診斷和治療困難。 4在在HBV無癥狀攜帶者中，有一定比例的無癥狀攜帶者中，有一定比例的HBeAb（+）者，加查前）者，加查前S1抗原（抗原（+）提示）提示 病毒在體內(nèi)還較活躍。病毒并沒有清除，肝臟還有潛在的病理損傷的可能。病毒在體內(nèi)還較活躍。病毒并沒有清除，肝臟還有

27、潛在的病理損傷的可能。 5抗病毒治療乙型肝炎，加查前抗病毒治療乙型肝炎，加查前S1抗原可作為治療前的患者篩查和治療后的療效判斷，抗原可作為治療前的患者篩查和治療后的療效判斷， 尤其對尤其對HBeAb（+）的慢性肝炎患者抗病毒治療的排查也起到重要作用。）的慢性肝炎患者抗病毒治療的排查也起到重要作用。 所以檢驗兩對半，加查前所以檢驗兩對半，加查前S1抗原可在急性肝炎，慢性肝炎，抗原可在急性肝炎，慢性肝炎，HBV無癥狀攜帶者和抗病無癥狀攜帶者和抗病 毒治療乙型肝炎診療過程中起到十分重要的作用。毒治療乙型肝炎診療過程中起到十分重要的作用。 為什么檢測為什么檢測HBV-DNA還要檢測前還要檢測前S1抗原

28、？抗原？ 1在病毒感染機(jī)體的整個周期中，前在病毒感染機(jī)體的整個周期中，前S1蛋白的獨特功能，使其能夠較充分的反應(yīng)蛋白的獨特功能，使其能夠較充分的反應(yīng) 機(jī)體的體液免疫狀況，直至病程的轉(zhuǎn)歸過程機(jī)體的體液免疫狀況，直至病程的轉(zhuǎn)歸過程, 如早期診斷，急性肝炎前如早期診斷，急性肝炎前S1抗原陰轉(zhuǎn)是抗原陰轉(zhuǎn)是 病毒清除的最早跡象，反之疾病將發(fā)展至慢性肝炎等臨床診斷以及前病毒清除的最早跡象，反之疾病將發(fā)展至慢性肝炎等臨床診斷以及前S1抗原陰轉(zhuǎn)，前抗原陰轉(zhuǎn)，前 S1抗體出現(xiàn)等免疫學(xué)反應(yīng)）這是單一測定抗體出現(xiàn)等免疫學(xué)反應(yīng)）這是單一測定HBV-DNA所不能做到的。所不能做到的。 2免疫測定技術(shù)因其有效、直接、簡便

29、的特點，已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地免疫測定技術(shù)因其有效、直接、簡便的特點，已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地 位。前位。前S1抗原的檢測與基因測定抗原的檢測與基因測定HBV-DNA能夠相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，就像能夠相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，就像HBV-DNA不能不能 替代乙肝五項的檢測一樣，同樣替代乙肝五項的檢測一樣，同樣HBV-DNA也不能替代前也不能替代前S1抗原的檢測?？乖臋z測。 3HBV DNA-PCR技術(shù)要求精密、所需要的條件高，易發(fā)生污染和假陽性，不適技術(shù)要求精密、所需要的條件高，易發(fā)生污染和假陽性，不適 于做常規(guī)檢測，前于做常規(guī)檢測，前S1抗原測定與之相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，使結(jié)果特異，準(zhǔn)確無誤，進(jìn)而提抗

30、原測定與之相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，使結(jié)果特異，準(zhǔn)確無誤，進(jìn)而提 高臨床大夫的診斷和治療水平高臨床大夫的診斷和治療水平 HBV血清標(biāo)志常見模式及臨床意義 模模 式式 HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1 臨床意義臨床意義 1+急肝，慢活肝，有傳染性急肝，慢活肝，有傳染性 2+ 可能可能HBV趨于轉(zhuǎn)歸趨于轉(zhuǎn)歸,而而HBeAg還還 沒有陰轉(zhuǎn)時沒有陰轉(zhuǎn)時,但前但前S1抗體已經(jīng)出現(xiàn)抗體已經(jīng)出現(xiàn) 并中和了前并中和了前S1 抗原抗原 3+慢肝，仍有傳染性。慢肝，仍有傳染性。 4+恢復(fù)期，無傳染性?；謴?fù)期，無傳染性。 HBV血清標(biāo)志常見模式及臨床意義 模模 式式 HBsAgHBsAbHBeAg

31、HBeAbHBcAbPreS1 臨床意義臨床意義 5+ 急肝或慢肝，仍有傳染性，病程急肝或慢肝，仍有傳染性，病程 持續(xù)。持續(xù)。 6+慢性慢性HbsAg 攜帶者攜帶者 7+恢復(fù)期，仍有傳染性?；謴?fù)期，仍有傳染性。 8+恢復(fù)期，無傳染性?；謴?fù)期，無傳染性。 HBV血清標(biāo)志常見模式及臨床意義 模模 式式 HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1 臨床意義臨床意義 9+恢復(fù)期，仍有傳染性?；謴?fù)期，仍有傳染性。 10+ 康復(fù)期康復(fù)期 11+恢復(fù)期，仍有傳染性?；謴?fù)期，仍有傳染性。 12+康復(fù)期，有免疫力?？祻?fù)期，有免疫力。 查查“漏漏” PreS1 補(bǔ)補(bǔ) “缺缺” 王曉偉王曉偉 13

32、336300228 目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題目前乙型肝炎實驗室診斷中存在的問題 單獨用單獨用HBeAg診斷活動期乙肝并不可靠。診斷活動期乙肝并不可靠。 理論基礎(chǔ)：前理論基礎(chǔ)：前C區(qū)變異區(qū)變異 定量定量PCRPCR法的原理是把法的原理是把“反應(yīng)管反應(yīng)管”中的目的基中的目的基 因指數(shù)級地擴(kuò)增到一定水平，再通過產(chǎn)物雜交，因指數(shù)級地擴(kuò)增到一定水平，再通過產(chǎn)物雜交， 并與設(shè)定的內(nèi)參照對比，推算并與設(shè)定的內(nèi)參照對比，推算“反應(yīng)管反應(yīng)管”內(nèi)的目內(nèi)的目 的基因含量，并不等于原待測標(biāo)本內(nèi)的真正含量，的基因含量，并不等于原待測標(biāo)本內(nèi)的真正含量， 因此血清標(biāo)本處理過程種的目的基因的丟失及丟因此血清標(biāo)本處理

33、過程種的目的基因的丟失及丟 失量均無法計算。失量均無法計算。 preS1對乙肝診斷的獨特作用對乙肝診斷的獨特作用 1、 preS1作為嗜肝侵蝕性的標(biāo)志作為嗜肝侵蝕性的標(biāo)志 與與HBsAg同時檢測；同時檢測； 結(jié)果相互印證，診斷乙肝更準(zhǔn)確。結(jié)果相互印證，診斷乙肝更準(zhǔn)確。 前前S1抗原與抗原與E系統(tǒng)以及系統(tǒng)以及DNA的關(guān)系的關(guān)系 PreS1抗原抗原 （）（） HBeAg （）（） HBV-DNA + 84.9% (653/769) 58.6% (450/769) _ 9.5% (37/389) 12.1% (47/389) preS1對乙肝臨床診斷的獨特作用對乙肝臨床診斷的獨特作用 首都醫(yī)科大學(xué)首都醫(yī)科大學(xué) 閔福援閔福援 39例急性乙肝患者血清例急性乙肝患者血清HBV-DNA與與ALT間的動態(tài)變化間的動態(tài)變化 時間時間 （周）（周） 例數(shù)例數(shù) HBV-DNA陽性陽性 例數(shù)例數(shù) （%） PreS1陽性陽性陽性陽性 例數(shù)例數(shù) （%） ALT大于大于40U/L 例數(shù)例數(shù) （%） 1-539 35（90%）26（67%）3