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1、實驗六限制性片段長度多態(tài)性（Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP）、實驗目的學習和掌握限制性片段長度多態(tài)性（RFLP ）遺傳標記的基本原理和檢測方法。二、實驗原理第一代分子遺傳標記RFLP是根據(jù)不同品種（個體）基因組的限制性內(nèi)切酶的酶切位點堿基發(fā)生突 變,或酶切位點之間發(fā)生了堿基的插入、缺失、重排等,導致酶切片段大俊生了變化,這種變化 可以通過PCR ,酶切及瓊脂糖凝膠電泳逬行檢測，從而可比較不同品種（個體）的DNA水平的差 異（即多態(tài)性），RFLP已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因走位以及生物進化和分類、遺傳多 樣性等研究。三、儀器、

2、材料與試別（-）儀器：電熱恒溫水浴鍋，瓊脂糖凝膠電泳及檢測系統(tǒng)（二）材料與試列：Hind JU限制性內(nèi)切酶,10xM Buffer,待分析的PCR產(chǎn)物,DL2000 DNA Marker, 6xLoading Buffer （上樣緩沖液），滅菌雙蒸水,1.5%瓊脂糖凝膠（注意：含溟化乙 錠EB ,致癌，請帶手套操作）,0.5%TBE （電泳緩沖液1四、實驗步驟1、Hind m限制性內(nèi)切酶酶切反應體積（10pl ）f在0.2ml Eppendorf管中依次加樣：10xM bufferi mlddH2O5.5 pLHind 皿0.5 pLPCR產(chǎn)物3 ML37C水浴消化2h ,消化產(chǎn)物全部用于瓊脂糖檢i則。2、瓊脂糖凝膠電泳配置1.5%瓊脂糖凝膠，取10pl酶切產(chǎn)物+1川上樣緩沖液280V恒壓電泳。DNA帶負電荷, 電泳時DNA從負極向正極泳動。待泳動至凝膠的1/2-2/3位置時，停止電泳，紫外檢測儀下觀察。五、作業(yè)寫出本實驗的具體操作過程并描述你所觀察到的結果。（畫圖）M1

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