第八章合子胚培養(yǎng)

1、第八章 合子胚培養(yǎng)1合子胚培養(yǎng)的概念1.1植物胚胎培養(yǎng)的概念 植物胚胎培養(yǎng)是指對植物的胚、子房、胚珠和胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株的技術(shù)。目前，胚胎培養(yǎng)除了應(yīng)用于育種工作外，還廣泛被用來研究胚胎發(fā)生過程中的生理代謝變化以及有關(guān)影響胚發(fā)育的內(nèi)外因素等問題。并且，在離體胚培養(yǎng)成功的基礎(chǔ)上，又進(jìn)行了胚乳、胚珠和子房的培養(yǎng)，特別是未受精胚珠或子房培養(yǎng)，為進(jìn)行離體授粉(或試管受精)的研究提供了重要的技術(shù)條件。試管受精技術(shù)使克服遠(yuǎn)緣雜交中花粉與柱頭之間的不親和性成為可能。1.2合子胚培養(yǎng)的概念合子胚培養(yǎng)是指在無菌條件下分離和培養(yǎng)有性胚，以期獲得可育植株的一種技術(shù)。1904年，Hannig最早在無菌

2、條件下進(jìn)行了離體胚培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，他當(dāng)時(shí)所培養(yǎng)的是兩種十字花科植物辣根菜和蘿卜的成熟胚。在含無機(jī)鹽和蔗糖的半固體培養(yǎng)基上，Hannig成功將胚培育成可移栽的幼苗。隨后，許多研究者從一些植物的成熟種子，特別是從敗育導(dǎo)致種子不能萌發(fā)的植物中分離種胚，通過離體培養(yǎng)獲得植株。依靠合子胚培養(yǎng)技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)能夠挽救早熟敗育的雜志胚了。2胚培養(yǎng)的類型離體胚培養(yǎng)可分為幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)和成熟胚培養(yǎng)。離體培養(yǎng)中，這兩類胚的成苗途徑和所需營養(yǎng)條件也不太一樣。2.1成熟胚培養(yǎng)由于成熟胚生長不依賴胚乳的貯藏營養(yǎng)，只要提供合適的生長條件及打破休眠，它就可在比較簡單的培養(yǎng)基上萌發(fā)生長，形成幼苗。所以，培養(yǎng)基只需含無機(jī)鹽和糖即

3、可。另外，成熟胚培養(yǎng)技術(shù)也要求不嚴(yán)，將受精后的果實(shí)或種子(帶種皮)用藥劑進(jìn)行表面消毒，剝?nèi)》N胚接種于培養(yǎng)基上，在人工控制條件下即可發(fā)育成完整植株。2.2幼胚（未成熟胚）培養(yǎng) 幼胚指的是尚未成熟即發(fā)育早期的胚。它較成熟胚難培養(yǎng)，要求的技術(shù)和條件也較高。幼胚培養(yǎng)時(shí)，可能有三種生長方式：一是繼續(xù)進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育，維持胚性生長，最終形成具有萌發(fā)能力的成熟胚；二是不能維持胚性生長，迅速萌發(fā)為幼苗，這種未經(jīng)完成正常的胚胎發(fā)育過程而形成幼苗的現(xiàn)象稱為“早熟萌發(fā)”(precocious germination)。三是形成愈傷組織。由于早熟萌發(fā)形成的幼苗往往畸形瘦弱，甚至死亡。所以，進(jìn)行幼胚培養(yǎng)時(shí)，關(guān)鍵是維持

4、胚性生長。為了保證離體幼胚能沿著胚胎發(fā)生的途徑發(fā)育，其對營養(yǎng)的需求較成熟胚復(fù)雜。另外，通過培養(yǎng)遠(yuǎn)緣雜交后的幼胚可獲得遠(yuǎn)緣雜種。3合子胚培養(yǎng)方法3.1材料的選擇與滅菌 由于植物類型及實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌?，幼胚培養(yǎng)對材料的要求也不一樣。如果是一般的實(shí)驗(yàn)或示范，最好是先用一種胚易于剝離的植物如大粒種子的豆科和十字花科植物；如希望培養(yǎng)材料的胚發(fā)育時(shí)期具有一致性，應(yīng)選擇開花和結(jié)實(shí)習(xí)性有規(guī)律的植物，如薺菜具有總狀花序，各個(gè)胚珠處于不同的發(fā)育時(shí)期，一般沿花序軸由上而下，胚齡逐漸增加。每個(gè)蒴果含2025個(gè)胚珠，且基本處于同一發(fā)育時(shí)期；如希望培養(yǎng)某一發(fā)育時(shí)期的胚，則須對剛開放的花進(jìn)行人工授粉，并了解該植物授粉后的天數(shù)

5、與胚胎發(fā)育的相應(yīng)關(guān)系；如培養(yǎng)遠(yuǎn)緣雜種胚，則必須在其夭折前進(jìn)行。取回大田或溫室里授粉受精后的植物子房，用70的酒精進(jìn)行幾秒表面消毒，再用0.1氯化汞滅菌10-30min，用無菌水沖洗34次，即可用于胚的分離和培養(yǎng)。3.2胚的分離及培養(yǎng)3.2.1胚的分離一般來說，在進(jìn)行胚的離體培養(yǎng)時(shí)，必須把胚從周圍的組織中剝離出來。成熟胚只須剖開種子即可剝離，比較容易。但有些種子種皮很硬，須先在水中浸泡之后才能剖開。在剝?nèi)”容^小的胚的時(shí)候則須借助解剖鏡，并且在剝離出來后，要立即轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中。對于幼胚的剝離，是把滅菌后的材料在無菌條件下切開子房壁，用鑷子取出胚珠，剝離珠被，取出完整的幼胚，并置培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。由于

6、植物的種類及發(fā)育時(shí)期的不同，幼胚分離的技術(shù)和難度也不一樣(p160161，薺菜和大麥的幼胚剝離)。3.2.2胚的培養(yǎng)對于成熟胚來說，由于其生長不依賴胚乳的貯藏營養(yǎng)，只要提供合適的生長條件及打破休眠，它就可在比較簡單的培養(yǎng)基上萌發(fā)生長，形成幼苗。所以，培養(yǎng)基只需含無機(jī)鹽和糖即可。另外，成熟胚培養(yǎng)技術(shù)也要求不嚴(yán)，將受精后的果實(shí)或種子(帶種皮)用藥劑進(jìn)行表面消毒，剝?nèi)》N胚接種于培養(yǎng)基上，在人工控制條件下即可發(fā)育成完整植株。幼胚較成熟胚培養(yǎng)難，要求的技術(shù)和條件也較高。胚胎發(fā)育過程可分為兩個(gè)時(shí)期：一為異養(yǎng)期(heterotrophy period)，即幼胚由胚乳及周圍的組織提供養(yǎng)分；二為自養(yǎng)期(auto

7、trophy period)，此時(shí)的胚已能在基本的無機(jī)鹽和蔗糖培養(yǎng)基上生長。胚由異養(yǎng)轉(zhuǎn)人自養(yǎng)是其發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，這個(gè)時(shí)期出現(xiàn)的遲早因物種而異。在這兩個(gè)時(shí)期之內(nèi)，培養(yǎng)中的胚對外源營養(yǎng)的要求隨胚齡的增加而逐漸趨向簡單。在人工培養(yǎng)基上幼齡胚通常很難培養(yǎng)，盡管對培養(yǎng)基做了不少改進(jìn)，胚在發(fā)育的極早時(shí)期仍發(fā)生夭折，幼胚很難培養(yǎng)成功。在這種情況下，利用胚乳看護(hù)培養(yǎng)，則可顯著提高幼胚的成活率，因?yàn)橹参镎５纳L發(fā)育中，胚是由緊緊包圍它的胚乳組織供給營養(yǎng)的。如進(jìn)行大麥未成熟胚離體培養(yǎng)時(shí)，如果在其周圍培養(yǎng)基上存在來自同一物種的離體胚乳，則對胚的生長有明顯促進(jìn)作用。有時(shí)異種胚乳對胚的生長比同種的更為合適，如進(jìn)行谷類

8、胚乳看護(hù)培養(yǎng)時(shí)，把大麥的胚移植到小麥胚乳上，其生長優(yōu)于在大麥胚乳上。在大麥黑麥的屬間雜交中，若把雜種未成熟的胚放在事先培養(yǎng)的大麥胚乳上進(jìn)行培養(yǎng)，可使3040的雜種未成熟胚發(fā)育成苗，而傳統(tǒng)的胚培養(yǎng)法只有1的成功率。4影響胚培養(yǎng)的因素4.1培養(yǎng)基4.1.1無機(jī)鹽用于胚培養(yǎng)的無機(jī)鹽配方很多，對其中每種成分的作用并無精確的評(píng)價(jià)。成熟胚培養(yǎng)中，主要采用一些較簡單的培養(yǎng)基，如Tukey、Randolph、White等。幼胚培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要有MS、B5、Nitsch、Rijven、White、Rangaswang、Norstog等。Monnier(1976)研究了幾種標(biāo)準(zhǔn)的無機(jī)鹽溶液(包括Knop、Mill

9、er、MS等培養(yǎng)基)對薺菜胚培養(yǎng)的作用，發(fā)現(xiàn)在一定的培養(yǎng)基上，未成熟胚的生長和存活之間并不存在相關(guān)性（p165，圖10.6）。如在MS培養(yǎng)基中，未成熟胚的生長最好，但存活率卻低；在Knop培養(yǎng)基中，雖然其毒性小，但胚的生長卻較差。Monnier通過變動(dòng)MS培養(yǎng)基中每一種鹽分的濃度，配制了一種既有利于生長、也有利于存活的新培養(yǎng)基。在這種培養(yǎng)基上，胚的生長和存活都很好，與MS培養(yǎng)基相比，這種培養(yǎng)基中K和Ca2的水平比較高，而NH4的水平則低(p157表10.3)。另據(jù)Umbeck和Norstog(1979)報(bào)道，培養(yǎng)基中的NH4對于大麥未成熟胚的正常生長和分化是必需的。當(dāng)以N03作為無機(jī)氮的惟一來

10、源時(shí)，500m長的大麥胚在培養(yǎng)中只能略有生長，而這主要是由于細(xì)胞伸長造成的。盾片等的分化則需要有4.38.6 mmo|L NH4的存在。在曼陀羅和紫花曼陀羅中，對未成熟胚的培養(yǎng)來說，NH4或是必需的，或是一種較好的無機(jī)氮；另一方面，黃麻的胚則絕對需要硝態(tài)氮。4.1.2碳水化合物在離體的成熟胚和未成熟胚培養(yǎng)中，一般都需要有一種適當(dāng)?shù)奶荚?。迄今為止，蔗糖被認(rèn)為是碳水化合物的最好形式，在胚培養(yǎng)中的應(yīng)用最為廣泛。在胚培養(yǎng)基中加入蔗糖不僅是作為一種能源，而且是為了保持適當(dāng)?shù)臐B透壓，后者對于未成熟胚的培養(yǎng)來說尤為重要。最適蔗糖濃度因胚的發(fā)育時(shí)期而有所不同。成熟胚在含2蔗糖的培養(yǎng)基中就能很好生長；幼胚則要求

11、較高水平的糖濃度，如果濃度過低，會(huì)引起幼胚過早萌發(fā)。這是因?yàn)樵谧匀粭l件下，原胚就是被一種高滲液體包圍著的。適于原胚培養(yǎng)的蔗糖濃度一般為812。在長期的培養(yǎng)過程中，隨著培養(yǎng)時(shí)問的增加，必須把胚轉(zhuǎn)移到蔗糖水平逐步降低的培養(yǎng)基中。另有觀點(diǎn)認(rèn)為，胚在離體條件下的生長和分化在很大程度上并不依賴于滲透壓的大小，而主要取決于某些生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的存在與否。如高滲透壓阻止離體未成熟胚早熟萌發(fā)的作用可以用ABA有效地取代。4.1.3氨基酸和維生素在胚培養(yǎng)中加入氨基酸，無論是單一的還是復(fù)合的，都能刺激胚的生長。加單一氨基酸時(shí)，以谷氨酰胺最有效，如500mgL的谷氨酰胺可促進(jìn)多種植物離體胚的培養(yǎng)，1 600mgL的谷氨

12、酰胺能強(qiáng)烈促進(jìn)銀杏胚形成的幼苗生長。水解酪蛋白(CH)是一種氨基酸復(fù)合物，一直被廣泛用于胚培養(yǎng)。如水解酪蛋白和酵母提取物對薺菜及棉花心形胚生長有明顯的促進(jìn)作用，水解酪蛋白是四季橘很小的球形胚(1428m1428m)的培養(yǎng)所必需的。胚對水解酪蛋白的敏感性因物種而異，栽培大麥最適濃度為500mgL；毛曼陀羅和曼陀羅的胚在含有400 mgL CH的培養(yǎng)基上長得最好；50 mgL CH能促進(jìn)紫花曼陀羅胚的生長，但100 mgL時(shí)則有毒害作用。 常用于胚培養(yǎng)的維生素類有硫胺素、吡哆醇、煙酸、泛酸鈣等。維生素對發(fā)育初期的幼胚培養(yǎng)是必需的，而已萌發(fā)生長的胚，因其細(xì)胞能合成自身需要的維生素，維生素的加入可能對

13、其形態(tài)發(fā)生有抑制作用。因而，最好是只有在通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了它們的必要性之后，再在培養(yǎng)基中加入維生素。硫胺素對植物胚培養(yǎng)的根伸長有促進(jìn)作用，煙酸、泛酸鈣和生物素則對莖生長的促進(jìn)作用更為顯著。4.1.4植物生長調(diào)節(jié)劑除了在某些植物中為了打破休眠以外，沒有證據(jù)表明離體的成熟或未成熟胚的正常發(fā)育需要外源生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。實(shí)際上，生長素對于胚的生長通常表現(xiàn)抑制作用。Monnier(1978)建議，在胚培養(yǎng)基中不應(yīng)加入植物激素，以免引起結(jié)構(gòu)異常。他認(rèn)為胚對大多數(shù)生長調(diào)節(jié)物質(zhì)都是自主的。在這點(diǎn)上至少對GA3來說已在菜豆上得到了清楚的證明，其中胚柄可以滿足離體胚對激素的需要。但是，如果為了由胚和胚段誘導(dǎo)愈傷組織，則通

14、常都須在培養(yǎng)基中加入生長素或細(xì)胞分裂素，或二者都加。在大麥未成熟胚(500 m長)培養(yǎng)中，若加入ABA，特別是當(dāng)有NH4+存在的情況下，不但可以抑制由GA3和激動(dòng)素所促成的早熟萌發(fā)，而且能使胚循序進(jìn)行正常的發(fā)育。4.1.5天然有機(jī)物正常植物體上，胚的生長受胚乳滋養(yǎng)，因此，加入一些天然的胚乳或種子提取物，對離體胚的生長有促進(jìn)作用。20世紀(jì)40年代，Van Overbeek等使用椰子汁培養(yǎng)曼陀羅的心形胚獲得成功后，人們廣泛地在胚培養(yǎng)中使用椰子汁。使用多種天然提取物(大麥胚乳、麥芽、馬鈴薯塊、大豆等提取物)進(jìn)行大麥幼胚(0.5mm胚)培養(yǎng)，只有大麥胚乳可促進(jìn)其生長，形成幼苗。在其他植物中也發(fā)現(xiàn)類似情

15、況，如玉米胚乳組織的提取物可促進(jìn)培養(yǎng)的玉米胚生長。Kent和Brink(1947)報(bào)道，海棗和香蕉的浸提物、小麥面筋水解物、牛奶和番茄汁(TJ)能夠促進(jìn)大麥未成熟胚的生長和抑制它們的早熟萌發(fā)。在上述這些物質(zhì)中以番茄汁效果最好。此外，還發(fā)現(xiàn)蜂王漿對銀杏幼胚正常分化有促進(jìn)作用，并能減少培養(yǎng)胚的死亡率，抑制胚形成愈傷組織。4.1.6培養(yǎng)基的pH 培養(yǎng)基的pH對胚的培養(yǎng)也有一定的影響。如薺菜胚珠液的pH值約為6.0，而其離體胚在pH值為5.47.5的培養(yǎng)基中都能正常生長。對紫花曼陀羅心形早期的胚培養(yǎng)最適pH值在5.07.5的范圍內(nèi)。8日齡的水稻胚在pH值5和9時(shí)，生長最好。Norstog和Smith(

16、1963)報(bào)道，培養(yǎng)基的pH值對于大麥未成熟胚的器官分化是關(guān)鍵因素，最適值約為4.9。當(dāng)pH值在5.2以上時(shí)，胚雖能生長，但不發(fā)生明顯的分化。4.2培養(yǎng)條件4.2.1溫度大多數(shù)植物胚培養(yǎng)的溫度為2530，但也有些植物需要較低或較高的溫度。如馬鈴薯胚培養(yǎng)時(shí)溫度20較好，香子蘭的胚在3234下生長最好，柑橘、蘋果、梨2530是合適的，棉花胚32生長最好。有些植物，如桃的胚培養(yǎng)則需在變溫條件下進(jìn)行。4.2.2光照由于胚在胚珠內(nèi)的發(fā)育是不見光的，所以一般認(rèn)為在黑暗或弱光下培養(yǎng)幼胚比較適宜，光對胚胎發(fā)育有輕微的抑制作用。離體培養(yǎng)條件下進(jìn)一步發(fā)育的幼胚對光的需求，因植物種類而異。棉花幼胚先在黑暗中培養(yǎng)，然

17、后轉(zhuǎn)入較強(qiáng)光照下培養(yǎng)，子葉的葉綠素生成很慢，但轉(zhuǎn)人弱光下培養(yǎng)，子葉很容易產(chǎn)生葉綠素；薺菜胚培養(yǎng)，每天給予12h的光照比全黑暗條件好。4.3胚柄 胚柄是一個(gè)短命的結(jié)構(gòu)，長在原胚的胚根一端，當(dāng)胚達(dá)到球形期時(shí)，胚柄也發(fā)育到最大。有關(guān)胚柄的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞學(xué)和生理生化的詳細(xì)研究表明，胚柄積極參與幼胚的發(fā)育過程。一般胚柄較小，很難與胚一起剝離出來，所以培養(yǎng)的胚都不具備完整的胚柄。有研究指出在幼胚培養(yǎng)中，胚柄的存在對幼胚的存活是關(guān)鍵。如紅花菜豆較老的胚，不管有無胚柄的存在，均能在培養(yǎng)基中生長；但幼胚培養(yǎng)時(shí)，不帶胚柄會(huì)顯著降低形成小植株的頻率。因?yàn)橛着吲囵B(yǎng)中，胚柄的存在會(huì)顯著刺激胚的進(jìn)一步發(fā)育，而且這種作用在胚發(fā)

18、育的心形期達(dá)到高潮。使用生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，如5mgL赤霉素能有效地取代胚柄的作用。如紅花菜豆胚心形期時(shí)胚柄中赤霉素的活性比胚本身高30倍，子葉形成后，胚柄開始解體，GA3水平開始下降，但胚中GA3的水平增高。當(dāng)沒有胚柄存在時(shí)，一定濃度范圍的KT可促進(jìn)幼胚的生長，但其作用難與赤霉素相比。但Monnier(1978)的觀點(diǎn)是，無胚柄的極幼齡胚所以難于培養(yǎng)，是由于在除掉胚柄時(shí)所引起的損傷造成的。在薺菜幼胚培養(yǎng)中，無胚柄的胚在胚柄與胚連接點(diǎn)附近的胚根原區(qū)域會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞壞死的現(xiàn)象。5胚培養(yǎng)的應(yīng)用5.1通過“胚拯救獲得遠(yuǎn)緣雜種合子胚培養(yǎng)的最大用途是借以建立稀有的遠(yuǎn)緣雜種。在很多種間和屬間雜交中，受精作用能正常完

19、成，胚也能進(jìn)行早期的發(fā)育，但由于胚乳發(fā)育不正?；螂s種胚與胚乳之間生理上的不協(xié)調(diào)，造成雜種胚早期夭折，即發(fā)生所謂“受精后障礙”，最終不能形成有萌發(fā)力的種子。在這種情況下，通過“胚拯救” 即可克服這種受精后障礙，產(chǎn)生遠(yuǎn)緣雜種。 “胚拯救”的方式有3種：一是雜種幼胚在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，二是雜種幼胚的胚乳看護(hù)培養(yǎng)，三是雜種幼胚的愈傷組織培養(yǎng)：5.1.1雜種幼胚在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng) 在發(fā)生“受精后障礙”的情況下，若把雜種胚在開始夭折之前剝離出來，置于一種適當(dāng)?shù)娜斯づ囵B(yǎng)基上培養(yǎng)，則雜種胚常常表現(xiàn)出正常生長的潛力，最終長成雜種植株。例如，黃香草木犀是一種很重要的牧草，但其植株中含有大量對牛有害的物質(zhì)香豆素。同

20、屬的另一個(gè)物種白香草木犀香豆素含量很低，為了把這個(gè)有利性狀轉(zhuǎn)入到前一個(gè)物種，將這兩個(gè)物種進(jìn)行了雜交，結(jié)果是，雜種胚雖能生長一段時(shí)間，但由于授粉810 d后胚珠夭折，未能得到種子。后來通過雜種幼胚培養(yǎng)的方法，終于由這個(gè)雜交組合中獲得了雜種植株。采用類似方法，在花百合與王百合之間，鹿子百合與天香百合之間，以及車軸草屬的若干物種之間也獲得了雜種。 在稻屬植物中，很多研究者都想通過種間雜交選育抗病蟲害和抗逆的高產(chǎn)水稻品種，但胚的夭折一直是實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)的一個(gè)嚴(yán)重障礙。胚培養(yǎng)正是克服這個(gè)障礙的有效途徑。在若干個(gè)通常不能成功的稻屬種間雜交中，人們通過對雜種胚進(jìn)行培養(yǎng)而獲得了正常的雜種植株。 在番茄中，為了把

21、抗病蟲害的特性由野生物種轉(zhuǎn)移到栽培物種，一個(gè)理想的途徑是把栽培番茄和野生番茄進(jìn)行雜交。當(dāng)把野生番茄用做母本時(shí)，由于受精前障礙，雜交不能成功。然而反交時(shí)可以受精，只是由于胚的夭折不能形成有生活力的種子。而借助于胚培養(yǎng)，在以栽培番茄做母本的雜交中獲得了雜種植株。 另外，在有些遠(yuǎn)緣雜交中，如在大麥黑麥的雜交中，為了能夠得到適于培養(yǎng)的胚，授粉之后必須在穗子上噴灑GA3，NAA和2ip(二甲基丙烯嘌磷)的混合液。在未經(jīng)處理的穗子上，胚在達(dá)到適于培養(yǎng)的大小之前，種子的發(fā)育已經(jīng)停止。5.1.2雜種幼胚的胚乳看護(hù)培養(yǎng) 如果胚的夭折發(fā)生在發(fā)育的極早期，由于人工培養(yǎng)基很難取代天然胚乳的作用，采用以上方法拯救雜種仍

22、會(huì)遇到很大困難，在這種情況下，則可嘗試胚乳看護(hù)培養(yǎng)法。5.1.3雜種幼胚的愈傷組織培養(yǎng) 在以上兩種方法皆難奏效的情況下，則可嘗試雜種幼胚愈傷組織培養(yǎng)法，即先把雜種幼胚誘導(dǎo)成愈傷組織，經(jīng)過或長或短的繼代培養(yǎng)之后，再誘導(dǎo)雜種愈傷組織分化植株。這種方法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種十分有效的方法。例如，在小麥和簇毛麥的屬間雜交中，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)(1991)采用這種方法，由僅僅2個(gè)不足1mm大小的雜種幼胚，在不到1年的時(shí)間內(nèi)，獲得了數(shù)以萬計(jì)的雜種植株，通過雜種愈傷組織和雜種試管苗的染色體加倍，獲得了數(shù)以千計(jì)的雙二倍體種子。 除了以上介紹的例子外，采用未成熟胚愈傷組織培養(yǎng)方法，在大麥小麥，栽培番茄智利番茄等遠(yuǎn)緣雜交中也都取得了成功。在遠(yuǎn)緣雜交之后，通過染色體的定向消除而產(chǎn)生單倍體，是胚培養(yǎng)的另一項(xiàng)新用途。如在栽培大麥球莖大麥的雜交中，受精作用不難完成，但在胚胎發(fā)生的最初幾次分裂期間，球莖大麥染色體受到選擇性的淘汰，結(jié)果形成了單倍體的胚，它們生長相當(dāng)緩慢，加之受精后25 d胚乳逐漸解體，因此為了得到大麥的單倍體植株，必須把胚剝離出來進(jìn)行培養(yǎng)。5.2 獲得單倍體在遠(yuǎn)緣雜交之后，通過染色體的定向消除而產(chǎn)生單倍體，是胚培養(yǎng)的另一項(xiàng)新用途（p175）。 5.3打破種子休眠，縮短育種周期 許多植物的種子發(fā)育不完全或有抑制物存在而影響種胚發(fā)芽。如一些無胚乳種子(如蘭科)蒴果成