合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則

1、謝謝觀賞 謝謝觀賞 指導(dǎo)原則編號: 合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則 00七年九月 一、前言二、合成多肽藥物藥學(xué)研究的基本考慮三、合成多肽藥物藥學(xué)研 究的主要內(nèi)容 （一）制備工藝研究 （二）結(jié)構(gòu)確證研究 （三）制劑處方工藝研究 （四）質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) （五）穩(wěn)定性研究四、名詞解釋 五、參考文獻(xiàn) 六、著者 合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則 、刖S 多肽類化合物是一類重要的生物活性分子。20世紀(jì)70年代生物技術(shù) 在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，使多肽等生物技術(shù)藥物的研究進(jìn)展迅速；與此同 時，隨著多肽固相合成技術(shù)及高效液相色譜（HPLC純化、分析技術(shù)等的發(fā) 展，合成多肽藥物的開發(fā)也成為藥物研究中的一個活躍領(lǐng)

2、域。 采用化學(xué)合成方法制備多肽，可以對天然多肽的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，從而增 加多肽與受體的親和力、選擇性，增強對酶降解的抵抗力或改善藥代動力學(xué) 特性，甚至由受體的激動劑變?yōu)檗卓箘?；此外，新技術(shù)的發(fā)展，例如以多肽 固相合成和組合化學(xué)為基礎(chǔ)的組合肽庫合成技 術(shù)，使得在短時間內(nèi)獲得大量 的多肽化合物成為可能，藥物篩選的效率不斷提高。因此，將會有越來越 多的采用化學(xué)合成方法制備的多肽 類化合物成為治療用藥物。 合成多肽藥物是指采用化學(xué)合成方法制備的多肽類藥物。這類藥 物的藥 學(xué)研究同樣遵循國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)發(fā)布的相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則的一 般性要求。但是，由于多肽主要由氨基酸（包括天然 氨基酸和非天然氨基

3、 酸）構(gòu)成，這使得多肽類藥物在制備方法、結(jié)構(gòu)確證、質(zhì)量研究等方面又有 與一般藥物不同的獨特問題。本指導(dǎo)原則就是在已有的相關(guān)指導(dǎo)原則基礎(chǔ) 上，對合成多肽藥物藥學(xué)研究方面所 涉及的特殊問題進(jìn)行分析，結(jié)合國內(nèi) 對多肽藥物研究和評價的實踐經(jīng) 驗，提出多肽藥物藥學(xué)各項研究的一般性要 求。當(dāng)然，具體品種研究的內(nèi)容與深度還要取決于品種本身的特性。 本指導(dǎo)原則適用于采用液相或固相合成方法制備的多肽藥物。 、合成多肽藥物藥學(xué)研究的基本考慮 合成多肽藥物藥學(xué)研究的主要內(nèi)容、研究思路、研究方法及一般 性的 技術(shù)要求與其他類型的化學(xué)藥物基本一致。但是，由于多肽藥物的特點，在 進(jìn)行藥學(xué)研究時還應(yīng)注意考慮以下問題。 1、

4、關(guān)于多肽（原料藥）合成工藝選擇的考慮 多肽的化學(xué)合成是有機合成的一個非常特殊的分支，目前主要有 液相合 成和固相合成兩種方法。 液相合成是經(jīng)典的多肽合成方法，一般采用逐步合成或片段縮合 方法。 逐步合成法通常從鏈的C末端氨基酸開始，向不斷增加的氨基酸組分中反 復(fù)添加單個a -氨基保護(hù)的氨基酸。片段縮合一般先將目標(biāo)序列合理分割為 片段，再逐步合成各個片段，最后按序列要求將 各個片段進(jìn)行縮合。液相 合成的優(yōu)點是每步中間產(chǎn)物都可以純化、可以獲得中間產(chǎn)物的理化常數(shù)、 可以隨意進(jìn)行非氨基酸修飾、可以避免氨基酸缺失，缺點是較為費時、費力 等。 固相合成是將目標(biāo)肽的第一個氨基酸的竣基以共價鍵的形式與固相載體

5、 （樹脂）相連，再以這一氨基酸的氨基為合成起點，使其與相鄰氨基酸（氨 基保護(hù)）的竣基發(fā)生?；磻?yīng),形成肽鍵。然后讓包含 有這兩個氨基酸的樹 脂肽的氨基脫保護(hù)后與下一個氨基酸的竣基反 應(yīng)，不斷重復(fù)這一過程，直至目 標(biāo)肽形成為止。其優(yōu)點是簡化了每步反 應(yīng)的后處理操作，避免因手工操作 和物料轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的損失，產(chǎn)率較 高且能夠?qū)崿F(xiàn)自動化等；其缺點是每步中間產(chǎn)物不可以純化，必須采用較 大的氨基酸過量投料，粗品純度不如液相合成物，必需通過可靠的分離手 段進(jìn)行純化等。 液相合成和固相合成各有優(yōu)缺點，應(yīng)根據(jù)合成的實際需要選擇適 合的工 藝。一般而言，液相合成法較適于合成短肽；固相合成法更適 于合成中、長 肽。

6、當(dāng)然，也可以將兩種方法結(jié)合應(yīng)用，比如采用液相 方法合成短肽片斷， 然后將該片斷應(yīng)用到固相合成中。 無論是液相合成還是固相合成，均是按照設(shè)計的氨基酸順序，通 過定向形成酰胺鍵方法得到目標(biāo)分子。從理論上講這并不復(fù)雜，但實 施起來需要考慮的因素還是比較多。簡單的竣酸與胺之間形成酰胺鍵, 般是先將竣基轉(zhuǎn)變成一個活潑的竣基衍生物（如酰氯或酸酹）再與胺 作用，或者在反應(yīng)體系中加入縮合劑。但是，氨基酸之間形成酰胺 鍵情況則 復(fù)雜得多，這是由于每一個氨基酸既含有氨基,同時又含有竣基。如果將 一種氨基酸的竣基活化,則其可以和同一種或另一種氨 基酸分子的氨基反 應(yīng)；如果將幾種氨基酸混合在一起，加入縮合劑，則只能得

7、到由具有多種不 同氨基酸順序的多肽組成的混合物。因此，多肽合成的研究中不僅需要關(guān)注 活化方法、偶聯(lián)方法等，更要關(guān)注保護(hù)/脫保護(hù)策略的選擇。 在多肽合成過程中，會產(chǎn)生一些與目標(biāo)肽結(jié)構(gòu)類似的雜肽，例如因氨 基酸消旋化產(chǎn)生的非對映異構(gòu)體、因部分氨基酸未連接上產(chǎn)生的缺失肽、因 肽鍵斷裂產(chǎn)生的斷裂肽等。因此，需要考慮選擇可靠的分離和純化方法使多 肽的純度達(dá)到要求。多肽藥物的純化通常采用色譜 方法，但在一些情況下，有機合成中常見的純化方法（例如重結(jié)晶）也可能 適用。 2、關(guān)于多肽結(jié)構(gòu)確證研究的考慮 鑒于多肽分子主要是由各種氨基酸構(gòu)成，單純運用有機化合物結(jié)構(gòu)研究 常用的一些方法例如紫外光譜、紅外光譜、核磁共

8、振譜等來解 析多肽的結(jié) 構(gòu)可能有一定的困難；一般而言，氨基酸組成分析、質(zhì)譜、氨基酸序列測 定等對其結(jié)構(gòu)確證有重要意義。 氨基酸組成分析可說明多肽的組成是否正確；質(zhì)譜可以提供分子 量以及 序列信息。上述兩項數(shù)據(jù)除用于證明多肽的結(jié)構(gòu)外，還能在一定程度上反 映測試樣品的純度（是否含有合成雜質(zhì)）。氨基酸序列測 定可以直觀地說明 氨基酸的連接順序是否正確，對于說明合成多肽的結(jié)構(gòu)尤其是中、長肽的結(jié) 構(gòu)有非常重要的價值。 在進(jìn)行多肽藥物的結(jié)構(gòu)研究時，應(yīng)注意結(jié)合多肽的合成工藝（包括中 間體的結(jié)構(gòu)研究）、多肽的分子大小（包括組成多肽的氨基酸數(shù)量和種 類）、擬解決的結(jié)構(gòu)問題、各種測試方法所能提供的結(jié)構(gòu)信息等，綜合

9、考慮 選用合適的研究方法。 對于具有一定空間結(jié)構(gòu)才能發(fā)揮其活性的多肽，應(yīng)進(jìn)行必要的立體化學(xué) 研究。 3、關(guān)于多肽制劑處方工藝研究的考慮 合成多肽藥物制劑研究的總體目標(biāo)和要求與其它類型化學(xué)藥物制劑是一 致的，即通過一系列研究工作，保證制劑劑型選擇依據(jù)充分、處方合理、工 藝穩(wěn)定、生產(chǎn)過程得到有效控制，并能實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。 但是，由于多肽藥物的生物活性可能和其空間結(jié)構(gòu)相關(guān)，多肽分子中存 在大量的酰胺鍵，另外還可能有竣基、輕基、氨基、毓基等較 為活潑的基 團(tuán)，較易水解或降解，因此了解合成多肽藥物的物理化學(xué) 穩(wěn)定性和生物學(xué) 穩(wěn)定性對選擇適宜的劑型和合理的處方、制備工藝有重要作用。 4、關(guān)于多肽藥物質(zhì)量研

10、究的考慮 多肽藥物（包括原料藥和制劑）的質(zhì)量研究的主要項目、相關(guān)檢測方法 建立和驗證的要求與其它類型化學(xué)藥物基本一致。 但是，多肽藥物的一些特點在質(zhì)量研究中需要給予充分的考慮，在研究 時需要增加一些特別的考察項目，例如氨基酸組成分析等；對于一些中、 長肽，生物特性例如效價、免疫原性和抗原活性等也有必要進(jìn)行研究。 此外，由于合成工藝、結(jié)構(gòu)等方面的獨特性，合成多肽藥物在部 分質(zhì)控 項目的檢測方法建立和方法學(xué)驗證方面也有一些特殊的考慮。 例如，合成多肽原料藥中工藝雜質(zhì)的來源和一般化學(xué)藥物有所不同，其可能 的工藝雜質(zhì)如：缺失（不完全）肽、斷裂肽、去酰胺多肽、氨基 酸側(cè)鏈的不 完全脫保護(hù)所形成的副產(chǎn)物、

11、氧化肽、二硫鍵交換的產(chǎn)物、非對映異構(gòu)的多 肽、低聚物和/或聚合物及合成中所用的毒性試劑和溶劑等。在合成多肽藥 物的有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究中需要充分考慮這些可能的工藝雜質(zhì)，對這些 工藝雜質(zhì)檢出能力的驗證是方法學(xué)驗證 的重要方面。 5、關(guān)于多肽藥物穩(wěn)定性研究的考慮 由于多肽的結(jié)構(gòu)特點，這類藥物的穩(wěn)定性相對較差，引起多肽藥物不 穩(wěn)定的原因主要有水解、氧化、外消旋化、二硫鍵的斷裂及重排、 B消除、凝聚、沉淀、吸附等。穩(wěn)定性研究應(yīng)根據(jù)多肽藥物穩(wěn)定性的 特點合理選擇試驗條件、考察項目。 三、合成多肽藥物藥學(xué)研究的主要內(nèi)容 合成多肽藥物的藥學(xué)研究內(nèi)容和一般化學(xué)藥物一樣，主要包括原 料藥的制備工藝研究和結(jié)構(gòu)確

12、證研究、制劑的處方工藝研究、質(zhì)量研 究和 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂、穩(wěn)定性研究等。這些研究內(nèi)容的一般性的技術(shù)要求也和 一般化學(xué)藥物基本一致。但是，正如前面所討論的，多肽藥物還有一些特殊 的方面需要在研究中予以考慮，以下主要是針對多肽 藥物藥學(xué)研究的特殊內(nèi) 容及其技術(shù)要求進(jìn)行討論，這些技術(shù)要求也包 括了對申報資料內(nèi)容的一些要 求。 一）原料藥制備工藝研究 1、工藝選擇 研究者可以根據(jù)目標(biāo)肽的結(jié)構(gòu)、自身生產(chǎn)條件等考慮選用液相合 成或固 相合成工藝。但無論采用何種合成工藝，均需要提供化學(xué)反應(yīng) 式、工藝流 程圖、操作過程等，對工藝參數(shù)（如投料量、反應(yīng)條件、反應(yīng)試劑）要有詳 細(xì)的描述，包括對于多肽的修飾（例如二硫

13、鍵的形 成等）。 2、起始原料、試劑的質(zhì)量控制 1）氨基酸及其衍生物 氨基酸及其衍生物作為多肽合成的起始原料，其質(zhì)量對合成多肽 的質(zhì)量有重要影響，因此應(yīng)關(guān)注氨基酸及其衍生物的來源、質(zhì)控方法 等。 對于起始原料的質(zhì)量控制應(yīng)足以保證其質(zhì)量的一致性，以最終保證合成的多 肽批間質(zhì)量的穩(wěn)定。作為起始原料的氨基酸及其衍生物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般應(yīng)包 括性狀、熔點、比旋度、化學(xué)純度、色譜純度及光學(xué)純度、含量等，其中對 于起始原料的化學(xué)純度和光學(xué)純度的控制尤 為重要。 如果使用了特殊的氨基酸或其衍生物，例如經(jīng)過復(fù)雜修飾的非天然氨基 酸、采用新工藝合成的氨基酸等，申報資料中還應(yīng)提供其合成工藝及結(jié)構(gòu) 研究的相關(guān)資料。 2

14、）樹脂 采用固相合成方法制備多肽，應(yīng)提供樹脂的來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢 驗報 告，并對樹脂的摩爾取代系數(shù)、在不同溶劑中的膨脹系數(shù)、所用 合成條件下 的穩(wěn)定性情況、交聯(lián)度等予以說明。 常用樹脂包括聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂、聚丙烯酰胺和聚乙烯-乙 二醇類樹脂及衍生物等，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)多肽C末端氨基酸的不同類型（如竣酸 型、酰胺型等）選擇特定用途的樹脂，并說明選擇的依據(jù)。 3）試劑和溶劑 可以參考化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則的基本 要求。 3、工藝的過程控制 1）反應(yīng)終點監(jiān)控 液相合成屬于常規(guī)有機合成，一般可采用色譜法（如TLC法、HPLC法） 監(jiān)測；固相合成偶合反應(yīng)的終點可采用苗三酮法、三

15、硝基苯磺酸 （TNBS法和四氯苯醍等監(jiān)測。二硫鍵連接的終點可用Ellman試驗 或HPLC法監(jiān)測。除上述方法外，其他合適的方法也可以使用。 2）中間體質(zhì)量控制 對于液相合成，應(yīng)參照化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指 導(dǎo)原則對中間體的質(zhì)量進(jìn)行控制，特別要對縮合片段制訂合 適的質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)（例如對比旋度、熔點和純度等進(jìn)行控制），含有較長序列的中間體還應(yīng) 進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究（例如氨基酸組成分析、氨基酸序列分析、質(zhì)譜、比旋度 等）。 對于固相合成，一般無中間體分離過程。但如果多肽從樹脂上切割后 還需進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，對中間體的質(zhì)量也要進(jìn)行相應(yīng)控制，要進(jìn)行 相應(yīng)的結(jié)構(gòu)研究。同時還 4、分離和純化 在多肽合成過

16、程中，會產(chǎn)生一些與目標(biāo)多肽結(jié)構(gòu)和性質(zhì)類似的雜肽，例 如缺失肽、非對映異構(gòu)體等，隨著肽鏈的增長，可能存在的雜肽數(shù)量也隨之 增加。因此，應(yīng)研究合適的純化方法將目標(biāo)肽從雜肽中分離出來。 多肽純化方法的選擇需要綜合考慮多肽和雜肽的肽鏈長短、極性和荷電 性、粗品的純度等?？捎糜诙嚯募兓姆椒òㄖ亟Y(jié)晶、逆流 分布、電泳、 離子交換色譜、凝膠過濾色譜、反相色譜等。目前已上市多肽藥物常見的純 化方法是采用凝膠柱脫鹽后，再用制備型高效液相色譜進(jìn)行純化。 對于選定的純化方法，應(yīng)提供詳細(xì)的驗證性資料例如純化前后樣品的代 表性色譜圖以說明純化效果。同時應(yīng)提供詳細(xì)的純化過程和相 關(guān)的工藝參 數(shù)。純化工藝的研究可結(jié)合質(zhì)

17、量研究中雜質(zhì)分析方法的驗 證進(jìn)行。 純化后樣品的干燥方法也應(yīng)明確。常用的干燥方法為凍干法，如 果多 肽對溫度不敏感，也可采用室溫或高溫干燥。 二）結(jié)構(gòu)確證研究 多肽結(jié)構(gòu)研究的主要目的是要說明其氨基酸組成和序列是否正確。多肽 分子中如有半胱氨酸，應(yīng)明確其狀態(tài)（氧化態(tài)或還原態(tài)），對含有多個半胱 氨酸的多肽，應(yīng)明確二硫鍵的正確連接位點。對于某 些長肽，可能還需要 采用核磁共振、園二色譜等方法對其空間結(jié)構(gòu)（例如二級、三級結(jié)構(gòu)）進(jìn) 行研究。 對于短肽，采用元素分析、紅外光譜、核磁共振譜、氨基酸組成 分析、 質(zhì)譜等常見方法，有時就足以說明其結(jié)構(gòu)特征。如果上述測試 取得的信息難 以進(jìn)行合理解析和歸屬，應(yīng)進(jìn)行

18、氨基酸序列測定。 對于中、長肽應(yīng)進(jìn)行氨基酸組成和氨基酸序列分析。闡明氨基酸 序列 的通用方法是Edman降解，這種方法是測定N端氨基酸的一種化 學(xué)方法；基 于多種技術(shù)的質(zhì)譜，如快原子轟擊、電噴霧、場解析和激 光解析質(zhì)譜，可提 供多肽的分子量及其序列信息，是對Edman降解的很好補充。 中、長肽的結(jié)構(gòu)研究中，盡管紫外光譜、紅外光譜、核磁共振譜 等能夠提供的可供分析的信息有限，但在一些情況下，上述研究還應(yīng)考慮 進(jìn)行。例如，在可獲得結(jié)構(gòu)確證對照品時，進(jìn)行上述譜圖的對比測定，對于 說明所研制產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)有重要意義；對于全新結(jié)構(gòu)的多肽，進(jìn)行上述研究， 也可為說明多肽結(jié)構(gòu)提供輔助信息，并為質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

19、的制訂提供信 息。 對于含有20個以上氨基酸殘基的多肽，如不能直接確定其序列，可根 據(jù)多肽分子量大小及氨基酸組成特點，使用專一性較強的蛋白水 解酶（一般 為肽鏈內(nèi)切酶）將多肽裂解成小片段，再分析各小片段的序列。 當(dāng)多肽中含有非天然氨基酸及氨基酸衍生物時，結(jié)構(gòu)研究中應(yīng)予以證 明。此時，應(yīng)在相應(yīng)的研究中，考察這些非天然氨基酸及氨基酸 衍生物的色 譜行為。 三）制劑處方工藝研究 了解合成多肽的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性對選擇適宜的劑型和合 理的處方、制備工藝有重要作用。在進(jìn)行多肽藥物的制劑處 方工藝研究 時，了解原料藥的色澤、pH、pl、比旋度、立體化學(xué)、水 分、溶解度、油 /水分配系數(shù)、溶劑化或

20、水合狀態(tài)等，特別是原料藥在固態(tài)和/或溶液狀態(tài)下 （不同pH）在光、熱、濕、氧等條件下穩(wěn)定性情況等信息是十分必要的。另 外，多肽藥物的空間結(jié)構(gòu)與生物活性密切相關(guān)，任何導(dǎo)致多肽折疊結(jié)構(gòu)解體 或松散以及損害立體結(jié)構(gòu)的因素都會影響其生物活性，在處方工藝研究時對 這些因素需要有全面的了解。 1、劑型的選擇 對于全新結(jié)構(gòu)多肽藥物的劑型開發(fā)，或者對已上市多肽制劑改變劑型時，全面研究并分析藥物的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性對于選擇合適的 劑型是十分重要的。 與其他化學(xué)藥物相比，合成多肽藥物多具有以下特點：(1)穩(wěn)定性差, 包括存在化學(xué)和構(gòu)象不穩(wěn)定性；(2)易被胃腸道中的蛋白質(zhì)水 解酶降解； (3)體內(nèi)生物半衰

21、期短，被快速消除或降解；(4)脂溶性 差，不易通過 生物屏障等。因此，多肽藥物通常選擇注射途徑給藥，主要劑型為凍干粉針 劑和注射液。對于研究結(jié)果顯示藥物在溶液狀態(tài) 不穩(wěn)定的，不宜選擇注射液等液體劑型。 對于需頻繁注射給藥的合成多肽藥物，存在患者使用不便、順應(yīng) 性差 等問題，選擇適宜的非注射給藥途徑也是此類制劑的研究熱點，目前研究最 多的主要有鼻腔給藥、 肺部給藥、經(jīng)皮給藥和口服給藥等。 同時，為了減少給藥次數(shù)，也可考慮采用緩釋或控釋技術(shù)，使藥物在 給藥部 位緩慢釋放，達(dá)到理想的治療效應(yīng)。 2、處方篩選及工藝研究 合成多肽藥物處方篩選及工藝研究的重點是通過選擇適宜的處 方和工藝 條件，保證藥物的

22、物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性。 處方篩選通常通過選擇適宜的輔料提高制劑的物理化學(xué)穩(wěn)定性 和生物學(xué) 穩(wěn)定性。通過前期的研究工作，詳細(xì)了解外界條件(如pH、溫度、光照、 氧濃度等)對多肽穩(wěn)定性的影響，己基本可以確定引起 某一多肽藥物不穩(wěn) 定的主要因素。在處方設(shè)計中，通過使用適宜的輔 料來提高多肽藥物制劑的穩(wěn)定性是目前的主要方法，盡管使用添加劑可以提 高多肽藥物穩(wěn)定性的機制還不十分清楚。對于多肽藥物的二級 或三級結(jié)構(gòu)可 能對藥物生物活性產(chǎn)生直接影響的，選擇適宜的輔料可能會保證藥物空間結(jié) 構(gòu)更加穩(wěn)定。研究中首先需注意多肽藥物和輔料相容性的考察，可參照化 學(xué)藥物制劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則等進(jìn)行。 在此基礎(chǔ)上，

23、處方篩選可通過設(shè)計相應(yīng)的試驗進(jìn)行，重點考察不同處 方下藥物的有關(guān)物質(zhì)變化和活性的改變。例如，對于制劑pH變化可 能 引起多肽凝聚沉淀，使藥物變性失去生物活性的，可以考察不同pH值的系列 處方，或添加不同穩(wěn)定劑(如抗氧劑)的處方，在不同條件下降解產(chǎn)物和活 性等的變化情況。 多肽藥物生產(chǎn)過程可能會對其穩(wěn)定性和制劑質(zhì)量產(chǎn)生影響，這些因素包 括pH熱處理環(huán)節(jié)、凍干環(huán)節(jié)和剪切力、壓力等，需注意對 影響多肽藥物穩(wěn)定 性的生產(chǎn)過程因素進(jìn)行深入的研究。由于多肽藥物 特殊的理化性質(zhì)，無菌制 劑一般不采用終產(chǎn)品熱壓滅菌的生產(chǎn)工藝，多數(shù)情況下采用膜過濾的無菌生 產(chǎn)工藝。 對制劑基本項目考察合格的樣品，可選擇兩種以上

24、處方樣品進(jìn)行 影響因 素試驗，重點考察藥物物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性，篩選出相對滿意 的處方。同時，制劑處方和制備工藝也需根據(jù)后期臨床試 驗的需求和臨床試 驗結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。 四）質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1、質(zhì)量研究 1）原料藥的質(zhì)量研究 合成多肽原料藥的質(zhì)量研究除參考一般化學(xué)藥物的研究思路進(jìn)行常規(guī)項 目的研究外，還應(yīng)根據(jù)合成多肽的結(jié)構(gòu)特征、制備工藝特點和生物學(xué)特點 等進(jìn)行針對性的研究，研究項目一般包括：外觀性狀、理化常數(shù)、鑒別、氨 基酸組成分析、水分、反離子含量、純度、有機 溶劑和反應(yīng)試劑殘留量、生 物學(xué)安全性檢查、含量和/或活性效價測定等。檢測方法研究和驗證的基本 思路和要求與已頒布的相

25、關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則相一致。 對于合成多肽藥物，除常規(guī)項目外，理化常數(shù)一般需要關(guān)注其比旋 度、等電點（pl ）、溶解性（主要為水和緩沖液中）等。 般而言，多肽藥物的常規(guī)檢查項目與其它化學(xué)藥物相同。此外， 與多肽藥物的結(jié)構(gòu)及合成特點相關(guān)的一些檢查項目，例如氨基酸組成 分析、 反離子（例如三氟醋酸或醋酸根）含量、反應(yīng)試劑殘留量（例 如從樹脂上裂 解多肽使用了氫氟酸，需要檢查氟化物殘留量）等，則需要在原料藥質(zhì)量研 究中予以重視。 相關(guān)肽檢查（或稱有關(guān)物質(zhì)檢查）是反映多肽化學(xué)純度的重要指標(biāo)之 一，根據(jù)多肽的理化性質(zhì)、分子大小，可選擇合適的色譜、 電泳等方法進(jìn)行。短肽可參考一般化學(xué)藥品有關(guān)物質(zhì)檢查的研究思 路

26、選用適宜的方法；長肽的有關(guān)物質(zhì)檢查方法除常見的RP-HP L （外 卜， 還可考慮使用高效離子交換色譜（HPIEC、毛細(xì)管電泳技術(shù)等，非 解離條件下的高效分子排阻色譜（HP SEC、聚丙烯酰胺凝膠電泳 （PAGE以及激光散射粒度測定等技術(shù)可用于聚合體/低聚體的檢 查。 有關(guān)物質(zhì)檢查的方法學(xué)驗證應(yīng)能證明所采用的方法可以有效分 離目標(biāo)多肽與工藝雜質(zhì)（例如缺失肽等）、降解產(chǎn)物（例如二硫鍵交換或氧 化產(chǎn)物等）、聚合物等。一般應(yīng)考察兩種以上不同原理的方法，高效液相色 譜法至少應(yīng)包括一種梯度洗脫方法，并采用多肽粗品和強制降解試驗等對方 法的專屬性等進(jìn)行考察、對比，此外還應(yīng)注意 研究多波長檢測的結(jié)果并選擇 合適的檢測波長等。 合成多肽因結(jié)構(gòu)特征不同于通常的小分子化學(xué)藥品，純度檢查 有時難以從根本上有效控制產(chǎn)品安全性，需要進(jìn)行必