化妝品微生物指標(biāo)檢驗(yàn)

1、化妝品微生物檢驗(yàn)化妝品微生物檢驗(yàn) 化妝品因含有水分，油脂， 蛋白質(zhì)，多元醇等，為微 生物的生長(zhǎng)創(chuàng)造了良好的 條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。 為了抑制微生物的繁殖和 消費(fèi)者使用過程中的產(chǎn)品 污染，往往在化妝品中加 入防腐劑，但不能過量。 因此，化妝品一方面為微 生物的生長(zhǎng)繁殖提供了良 好的環(huán)境；另一方面由于 防腐劑的應(yīng)用又可抑制微 生物的生長(zhǎng)。 化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 微生物檢驗(yàn)方法 gb/t 7918.1-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 總則 菌落總數(shù) （化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年） gb/t 7918.2-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 細(xì)菌總數(shù)測(cè)定 糞大腸菌群：gb/t 7918.3-1987 化妝

2、品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 糞 大腸菌群 銅綠假單胞菌 （化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年） gb/t 7918.4-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 綠膿桿菌 金黃色葡萄球菌 gb/t 7918.5-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方 法 金黃色葡萄球菌 霉菌和酵母菌：（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年） 總則 微生物檢驗(yàn)的基本要求 微生物檢驗(yàn)樣品的采集、保存及制備 適用范圍 總則 1、具有代表性 隨機(jī)抽取相應(yīng)隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。數(shù)量的包裝單位。 應(yīng)從批的整體中各部位抽取，如從四角應(yīng)從批的整體中各部位抽取，如從四角+中中 間；分上、中、下層；或上、中上、中、中間；分上、中、下層；或上、中上、中、中 下

3、、下層；梅花點(diǎn)式等。下、下層；梅花點(diǎn)式等。 所所有接觸樣品的工具、容器都必須保持清潔。有接觸樣品的工具、容器都必須保持清潔。 樣品的采集 2、抽/采樣數(shù)量 按照抽樣批及抽樣方案 jjf1070jjf107020052005 定量包裝定量包裝 商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則 3、檢驗(yàn)量 檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的 樣品中共取樣品中共取10g 或或10ml。包裝量。包裝量小于小于20g 的樣品，采樣量可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)的樣品，采樣量可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù) 量。量。 樣品的制備 液體樣品 膏、霜、乳劑半固體狀樣品 固體樣品 樣品的制備注意事項(xiàng)

4、無菌容器、材料及操作 樣品的均一性 樣品的檢驗(yàn)及保管 及時(shí)檢驗(yàn) 樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處 樣品先進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，再做其他指標(biāo) 須防止微生物的再污染和擴(kuò)散 如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報(bào)告發(fā) 出之日起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個(gè)月 菌落總數(shù)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)（aerobic bacterial count）是指化妝品 檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng) 基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、ph 值、需氧性 質(zhì)等），1g（1ml）檢樣中所含菌落的總數(shù)。 所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長(zhǎng) 的嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)。 測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程 度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。

5、 數(shù)據(jù)數(shù)據(jù) 處理處理 混合平板混合平板 的制備的制備 細(xì)菌的培細(xì)菌的培 養(yǎng)養(yǎng) 檢查結(jié)果、檢查結(jié)果、 觀察與計(jì)數(shù)觀察與計(jì)數(shù) 供試液供試液 的制備的制備 書寫檢驗(yàn)書寫檢驗(yàn) 記錄單記錄單 化妝品中防腐劑抑制細(xì)菌的生長(zhǎng). 含卵磷脂、吐溫80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行 中和。對(duì)尼泊金類、苯甲酸類、六氯酚 類等有效，但對(duì)卡松類的防腐劑的中和 效果有限。 卡松的中和劑半胱氨酸,可較好的中和卡 松的抑菌效果。因此,檢測(cè)時(shí)不同的防腐 劑加入不同的中和劑 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每 100ml 卵磷脂吐溫 80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入 1ml 0.5的 ttc 溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后 菌落呈紅色，而化妝品的顆粒

6、顏色無變化。 在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附 著于顆粒狀的原料中,檢測(cè)時(shí)不易洗脫下 來,因此,需要驗(yàn)證檢測(cè)方法的有效性。 糞大腸菌群 糞大腸菌群（fecal coliforms） 系一群 需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌， 在 44.50.5培養(yǎng) 24h48h 能發(fā)酵乳 糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。 該菌直接來自糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。 產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)酸：黃色 產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)氣：氣泡 產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣 書寫檢驗(yàn)書寫檢驗(yàn) 記錄單記錄單 不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 增增 菌菌 培培 養(yǎng)養(yǎng) 供試供試 液的液的 制備制備 配培配培 養(yǎng)基養(yǎng)基 和稀和稀 釋液釋液 檢查檢查 結(jié)果結(jié)果 判斷判斷 44 44 0.50

7、.5 2428h2428h 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 蛋白胨水蛋白胨水 培養(yǎng)培養(yǎng) 最終結(jié)最終結(jié) 果判斷果判斷 44 44 0.50.524242h2h 靛基質(zhì)靛基質(zhì) 特特 征征 菌菌 落落 36361 1 1824h1824h 雙倍膽鹽乳糖雙倍膽鹽乳糖mm embemb瓊脂瓊脂 液面玫瑰紅色液面玫瑰紅色 紫黑色紫黑色 糞大腸菌群檢查流程圖糞大腸菌群檢查流程圖 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa） 屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌， 氧化酶陽(yáng)性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還 能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽， 在 421條件下能生長(zhǎng)。 該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起

8、敗血 癥等。 最終結(jié)最終結(jié) 果判斷果判斷 增增 菌菌 培培 養(yǎng)養(yǎng) 供試供試 液的液的 制備制備 書寫檢驗(yàn)書寫檢驗(yàn) 記錄單記錄單 分分 離離 純純 化化 無菌落或無特征菌落無菌落或無特征菌落 配培配培 養(yǎng)基養(yǎng)基 和稀和稀 釋液釋液 革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn) 綠膿菌素試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn) 生化試驗(yàn)生化試驗(yàn) 硝酸鹽還原試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn) 4242生長(zhǎng)試驗(yàn)生長(zhǎng)試驗(yàn) 明膠液化試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn) 銅綠假單胞菌檢查流程圖銅綠假單胞菌檢查流程圖 scdlpscdlp培養(yǎng)基培養(yǎng)基 十六烷三甲基十六烷三甲基 溴化銨瓊脂溴化銨瓊脂 363611 1824h1824h 363611 1824h18

9、24h 特征菌落特征菌落 灰白色、扁灰白色、扁 平、周圍有平、周圍有 水溶性藍(lán)綠水溶性藍(lán)綠 色素色素 十六烷三甲基溴化銨平板十六烷三甲基溴化銨平板 scdlp培養(yǎng)基培養(yǎng)基 黃綠色黃綠色 菌膜菌膜 灰白色灰白色 濕潤(rùn)濕潤(rùn) 氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn) 粉紅粉紅/ 紫紅色紫紅色 綠膿菌素試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn) 鹽酸層呈粉紫色鹽酸層呈粉紫色 氯仿層呈藍(lán)綠色氯仿層呈藍(lán)綠色 硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn) n2 明膠液化明膠液化 試驗(yàn)試驗(yàn) 明膠培養(yǎng)基（高層）明膠培養(yǎng)基（高層） 明膠液化明膠液化 金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus） 為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無 芽胞

10、，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝 固酶陽(yáng)性。 該菌是葡萄球菌中對(duì)人類致病力最強(qiáng)的一種， 能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致 敗血癥。 革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 生化試驗(yàn)生化試驗(yàn): :血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn) 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) 最終結(jié)最終結(jié) 果判斷果判斷 增增 菌菌 培培 養(yǎng)養(yǎng) 供試供試 品的品的 處理處理 書寫檢驗(yàn)書寫檢驗(yàn) 記錄單記錄單 分分 離離 純純 化化 無菌落或無特征菌落無菌落或無特征菌落 配培配培 養(yǎng)基養(yǎng)基 和稀和稀 釋液釋液 363611363611 scdlpscdlp培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或 7.5%nacl7.5%nacl肉湯肉湯 24242h h baird parkersbaird parkers 或血瓊脂或血瓊脂 2448h2448h 特征菌落特征菌落 金黃色葡萄球菌檢查流程圖金黃色葡萄球菌檢查流程圖 baird parkersbaird parkers平板平板 灰灰/黑色黑色 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) 血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn) 血漿凝塊血漿凝塊 液態(tài)血漿液態(tài)血漿 霉菌和酵母菌 霉菌和酵母菌數(shù)測(cè)定（determination of molds and yeast count）是指化妝品檢樣 在一定條件下培養(yǎng)后，1g 或 1ml 化妝品 中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉 以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度 及